MASARYKOVA UNIVERZITA Pfiloha č.11 Posudek oponenta habilitační práce Masarykova univt-r/.ita Fakulta Obnr ŕi/ťni Uchani Pniem išli- ueha/i-čť Habilitační práct- ini/cv) Oponi-nt Pracov išli- ••pum m.1 Lékařská Lékařská mikrobiologie Mgr. Martina l.engerová, ľh.l). Sekce oportunnich infekci CMBGT IHOK FN Brno a LF MU Včasná diagnostika oportunnich infekci pomoci molekulárne biologických metod Prof. RNDr. Jiří Doskař. CSc. Prírodovedecká fakulta MU. Ústav experimentálni biologie Habilitační práce Mgr. Martiny Lcngerové. Ph.D. s nazvem „\ča\ná diagnostika oportunnich infekci pomoci molekulární biologických metod" vychází / výsledku její dosavadní vědeckovýzkumné činnosti, jíž se dlouhodobé a systematicky venuje v Centru molekulární biologie a genové terapie LF MU a FN Brno. Tematicky je práce zamířena na vývoj a optimalizaci nových molekulárne genetických metod v diagnostice původců oportunnich bakteriálních, mykotických a virových infekci, zejména u pacientů s oslabeným imunitním systémem. Jelikož rychlá a jednoznačná identifikace patogena je rozhodujícím předpokladem pro zahájeni cílené terapie, je téma habilitacc vysoce aktuálni a v rámci lékařské mikrobiologie jedno ze stéžejnich. Habilitační práce o celkovém rozsahu 144 stran je členéna do dvou části. První úvodní část (43 stran) je přehledným shrnutím aktuální problematiky spolu s vlastními výsledky /iskanvmi autorkou v dané oblasti. Druhou části práce jsou přílohy, které představuje soubor reprinlii 13-1 i nej významnejších časopiseckých publikací a dále patent a užitný vzor. které í jejich výsledků vzešly. V úvodní části je ucelený přehled a charakteristika nejčastěji se vyskytujících oportunnich infekcí u jednotlivých skupin imunokompromitovaných pacientů, jejichž počet narůstá a kteří představují hlavni cílovou skupinu zasaženou tčmito onemocnénimi. Dále se autorka vénuje infekcím způsobovaným bakteriemi, houbami a viry s uvedením popisu principů metod, které jsou používány k identifikaci téehto patogenů. Jelikož jsou klinické projevy oportunnich infekci velmi často nespecifické, je zdůraznčn fakt. že identifikace patogena pomocí vhodné zvolené metody je klíčovým krokem nezbytným pro včasné odhalení původce infekce a rychlé zahájeni cílené terapie, která často rozhoduje o přežiti pacientů. I IHJ MASARYKOVA UNIVERZITA Autorka se ve své výzkumné práci zaméřila na aplikaci a optimalizaci pokročilých molekulárne biologických metod pro identifikaci pú\odců nejčastéjších infekci, jak o tom svedči odkazy na její již publikované práce. Zabývala se diagnostikou invazivni aspergilózy. kde vyvinula kvantitativní rcal-timc PCR pro specifickou detekci a kvantifikaci DNA nékolika odlišných druhů r. Aspcrgillus v klinických vzorcích. O významu této metody svédci její patentování (v r. 2011) a následná validace na zvířecím modelu ve spolupráci s univerzitou v USA. Jejím dalším cenným výsledkem bylo zavedení postupu pro druhovou identifikaci původců invazivni mukormykózy. kde aplikovala metodu analýzy křivek tání s vysokým rozlišením spolu s kvantitativní real-time PCR. kterážto kombinace umožňuje nejen druhovou identifikaci původce infekce, ale téz stanovit jeho nálož ve vzorcích tkání. Neméné přínosné je i zavedeni metody panfungálni PCR pro identifikaci původců infekci a jejich odlišeni od kontaminující flóry, o jejímž významu svédci udélení užitného vzoru. Poslední skupinou pulogenú. klením se uchu/ecka vénujc. jsou viry. Diagnostika virových infekci má svá specifika, vyplývající zejména / různorodosti testovaných klinických materiálů a z vysoké genetické variability a mutability virových kmenů v rámci druhu. Dr. Lengerová se podílela na optimalizaci a zavedení metod pro detekci nékolika druhů virů. zejména herpetických (CMV. F.BV). Přínosem autorky v této oblasti bylo zavedení metody real-time PCR pro detekci CM V a sledování mutačních zmén v jeho genech, k nimž dochází v průbéhu léčby pacientů, kdy se selektuji a v jejich tele přetrvávají rezistentní klony tohoto viru. V případe HBV výsledky testováni přítomnosti virů potvrdily nutnost sledování pacientů po transplantacích, u nichž je výskyt tohoto viru velmi častý. Celkové je z přehledu dosažených výsledků zřejmé, že Dr. M. l.engerová je v oblasti diagnostiky původců oportunnich infekci nejen velmi dobře erudovaná, ale navíc je i zdatnou cxpcrimcntátorkou. což je jedním z předpokladů pro vývoj, optimalizaci a spolehlivost metod nové /avadénych Jo klinické praxe Výsledky vědeckovýzkumné práce, které tvoři základ habililace. byly publikovány celkem ve 24 publikacích v renomovaných časopisech s vysokým IF. u nichž je M. Lengerová 3x první a 6x druhou autorkou, a dále v 6-ti článcích v českých časopisech, kde je první autorkou. Její práce současné dokumentuji význam diagnostických molekulárne biologických metod v klinické medicíne, jak potvrzuje udélení patentu a užitného vzoru pro diagnostiku mykotickych infekci iv obou případech je \1. lcngerová první autorkou), Fakt. /c všechny metody, na nichž se podílela, jsou rutinné využívány ve FN limo při diagnostice mykotickych a dalších infekci, jsou toho důkazem. 2 (Ml MASARYKOVA UNIVÍMITA Dotazy oponenta k obhajobe habilitační práce: I Jsou nove vyvinuté metody používány také na některých dalších tuzemských nebo zahraničních pracovištích? 2. Na které dal si patogeny zodpovedné za opomním infekce se hodlá uchazečka dále zamořovat? Které z metod chce dále rozvíjet? Předložená habilitační práce má vysokou odbornou i formální úroveň a její autorka prokázala odpovídající kvalifikaci v problematice diagnostik) původců oportunnich infekci. Ji dosažené výsledky byly publikován) \ renomovaných impaktovaných časopisech, což dosvedčuje jejich originalitu a vysokou kvalitu. Významný je též fakt. že metody, které vyvinula, maji bezprostřední praktický přínos pro cílenou léčbu pacientů trpících oportunnimi infekcemi. Habilitační práce Mgr. Martiny Lcngerové. Ph.l). „Včasná diagnostika oporlunnich infekci pomoci molekulárne biologických metod" splňuje požadavky štandardné kladené na habilitační práce v oboru lékařská mikrobiologie. /.IX i; 3