Metoda Bradfordové je jednou z metod používaných k stanovení koncentrace bílkovin. Existuje několik
dalších metod, jako je Kjeldahlova metoda, biuretova metoda, BCA metoda nebo Lowryho metoda. V
rámci tohoto úkolu jsme se zaměřili právě na metodu Bradfordové.


Princip této metody spočívá ve vazbě barviva Coomassie Brilliant Blue G-250 na molekulu proteinu.
Tato vazba způsobuje posun absorpčního maxima z 464 nm na 595 nm. Měření absorbance při 595 nm
slouží jako indikátor koncentrace bílkovin v analyzovaném vzorku.


Pro získání co nejpřesnějších výsledků je důležité, aby standardní roztok bílkoviny měl podobné
složení jako testovaný vzorek. Citlivost metody Bradfordové se udává jako 1 mg/ml a je ovlivněna
obsahem bazických a aromatických aminokyselin.


Je třeba poznamenat, že spolehlivost metody Bradfordové je nižší než u BCA metody, kvůli
negativnímu působení detergentů, jako je SDS nebo Triton. Tyto látky mohou ovlivnit výsledky a
snížit přesnost měření.

                                             Zákal (%)

                                              Vs (mg)

                                              V (mg)

                                                90

                                              13853,3

                                              13841,3

                                                80

                                              14393,2

                                              14381,3

                                                70

                                              13103,7

                                              13092,0







                                         Bacillus subtilis

                                             Zákal (%)

                                Hmotnost bakteriální sušiny (mg/ml)

                                            1. skupina

                                Hmotnost bakteriální sušiny (mg/ml)

                                            2. skupina

                                Hmotnost bakteriální sušiny (mg/ml)

                                              průměr

                                                90

                                               0,55

                                               0,65

                                               0,60

                                                80

                                               0,50

                                               2,50

                                               1,50

                                                70

                                               0,40

                                               13,6

                                               7,00



                                            Zkumavka č.

                                       Koncentrace albuminu

                                              (μg/ml)

                                            Absorbance

                                           (1. skupina)

                                            Absorbance

                                           (2. skupina)

                                        Absorbance (průměr)

                                                 1

                                                 0

                                               0,000

                                               0,000

                                               0,000

                                                 2

                                                200

                                               0,188

                                               0,151

                                              0,1695

                                                 3

                                                400

                                               0,321

                                               0,285

                                               0,303

                                                 4

                                                600

                                               0,433

                                               0,450

                                              0,4415

                                                 5

                                                800

                                               0,585

                                               0,495

                                               0,540

                                                 6

                                               1000

                                               0,687

                                               0,611

                                               0,649



Průměrná hmotnost bakteriální sušiny Bacillus subtilis při různých stupních zákalu je následující:
při 90% zákalu je 0,60 mg/ml, při 80% zákalu je 1,50 mg/ml a při 70% zákalu je 7,00 mg/ml. Rozdíly
mezi hodnotami v první a druhé skupině mohou být způsobeny nepřesným pipetováním kultury do váženek
nebo chybou při vážení.


Koncentrace bílkovin stanovená pomocí metody Bradfordové při různých stupních zákalu je
následující: při 90% zákalu je 130,167 μg/ml, při 80% zákalu je 74,334 μg/ml a při 70% zákalu je
48,500 μg/ml. Rozdíly mezi skupinami mohou být způsobeny chybou při pipetování vzorku.


                                         Bacillus subtilis

                                               Zákal

                                                (%)

                                            Absorbance

                                            1. skupina

                                            Absorbance

                                            2. skupina

                                   Koncentrace bílkovin (μg/ml)

                                            1. skupina

                                   Koncentrace bílkovin (μg/ml)

                                            2. skupina

                                   Koncentrace bílkovin (μg/ml)

                                              průměr

                                                90

                                               0,132

                                               0,083

                                              171,000

                                              89,333

                                              130,167

                                                80

                                               0,106

                                               0,042

                                              127,667

                                              21,000

                                              74,334

                                                70

                                               0,080

                                               0,037

                                              84,333

                                              12,667

                                              48,500