PRAKTIKUM č.26
GENETICKÁ
XIKOLOGIE
© Biologický ústav LF MU Brno, 2005 Připravili: Renata Veselská, Jakub Neradil
PROGRAM:
1. Metody hodnocení genotoxickeho rizik"
Amesůvte: rincip, demonstrace
3.  Hodnocení SCE v lidských buňkách princip, hodnocení výsledků
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE
zabývá se studiem vlivu chemických látek a faktorů vnějšího prostředí na genetický materiál
testování genotoxické aktivity biologické monitorování genotoxického
rizika:
>   monitorování genotoxinů ve složkách životního prostředí (voda, půda, ovzduší)
*   monitorování biologického účinku, tj. hodnocení celkové expozice lidí v dané lokalitě
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE METODY A TESTOVACÍ ORGANISMY
Mikroorganismy
testy na reverzní muta<
(Salmonella typhimurium, Escherichia co Saccaromyces cerevisia
reparační testy
(Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Saccaromyces cerevisiae
SOS-chromotest (Escherichia coli)
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE METODY A TESTOVACÍ ORGANISMY
Živočišné organismy
st na recesívní letální mutace vá
ohla ví (Drosophila melanogaster dominantní letální test, savčí spot-tes (hlodavci)
Rostlinné organism1
mutace v barvě trichomu (Tradescantia)
embryonální a chlorofylové mutace (Arabidopsis thaliana)
cytogenetická analýza (Vicia faba)
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE METODY A TESTOVACÍ ORGANISMY
Savčí buňky in vivo:
hlodavci:
cytogenetická analýza buněk kostní dřeně test na přenosné translokace v
lity tvaru spermii

cytoqenetická analýza
etekce sesterskvcn chromatidovvch vvmen
I
detekce asociací satelitních chromosmů detekce mikrojader
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE METODY A TESTOVACÍ ORGANISMY
Savčí buňkv in vitro:
cvtoaenetická analvza
detekce sesterských chromatidovvch vvmě
1
detekce asociací satelitních chromosmů detekce mikrojader letekce reparačr'
Lidské a savčí buněčné linie
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE
Příklad baterie tesů:
1. Povinné testv toxicity a qenotoxicity:
A. Všeobecné testy toxicity
>   resty akutní a subchronicke toxicit
B.  Testy genotoxicit
>   festy na chromosomove mutace
>  Reparační test
GENETICKÁ TOXIKOLOGIE
Příklad baterie tesů:
2. Speciální testv toxicity a qenotoxicitv:
A. Všeobecné testy toxicity
>   restv akutní a subchronicke toxicit
eciální testy toxicit
nické toxicity, karcinogenity, imunotoxicity, reprodukční studie
C.  Testy genotoxicity
>   Ověřovací testy
>   Doplňkové testy
Amesův test
detekce reverzních mutací v genu pro syntézu histidinu u auxotrofního kmene (His-) bakterií
Salmonella typhimurium
S- typhimurium:
ii"
prototrofní

auxotrofní MP + His
Amesův test:
His+
S.typhimurium TA 98
na miskách s MP
roste
neroste
Sesterské chromatidove výměny (SCEs)
normal breakage
induced
FPG technika (Fluorescence Plus Giemsa): kultivace v přítomnosti 5-bromodeoxyuridin fixace
barvení: Hoescht 33258 (bis-benzimid) UV-záření barvení: Giemsa
Sesterské chromatidove výměny (SCEs)
kontrolní buňky
Sesterské chromatidove výměny (SCEs)
SCEs indukované chemickým mutagenem
2 SCEs
I
>

i
D
ciSJCEs
<
C
□
<
<