Lékařská mikrobiologie pro ZDRL Týden 19: Přehled spirochet a ostatních bakterií Co nás dnes čeká § Spirochety – spirální bakterie (treponemata, borrelie, leptospiry) § Mykoplasmata § Rickettsie § Chlamydie 1. Spirochety Úvod: Z medické hymny „Diabetes mellitus, icterus et vomitus“ (Druhá sloka) Treponema pallidum Gonococcus ruber Ulcus molle, ulcus durum Molle est reparaturum Nos curabit … (doplní se jméno vhodného urologa či dermatovenerologa) Ulcus durum (tvrdý vřed) Příběh první § Růžence Flekové naskákaly po těle růžové skvrny. Vzpomněla si, že by to mohla být… No ano, to by odpovídalo, před několika týdny byla na táboře a několikrát během tábora měla klíště. § Obvodní lékař ji poslal na dětskou infekční kliniku, kde zkušená infekcionistka potvrdila, že opravdu s největší pravěpodobností jde o to, co si myslela Růženka. Pro jistotu ještě odebrala sérum na průkaz protilátek… Viníkem byla Lymeská nemoc – zoonóza, přenášená klíšťaty Návratná horečka Spirochety Příběh druhý (vymyšlený, ale základ vychází ze skutečného příběhu) § Když Leona zjistila, že „perník“ opravdu potřebuje, a čím dál víc, nebylo pro ni daleko k rozhodnutí vydělávat si vlastním tělem. Konec konců, sex měla vždycky ráda. § Když si zákazník připlatil, vyspala se s ním i bez kondomu, brala přece antikoncepci a samotné jí to víc vyhovovalo… § Pak se ale zamilovala a rozhodla se mít dítě. Vysadila antikoncepci a byla celá šťastná, Helmut bude určitě ten pravý otec… Příběh druhý – pokračování § A tak tedy Leona byla těhotná. Zároveň si ale našla vředy na genitáliích a gynekoložka jí odebrala krev na serologické vyšetření. To vyšlo pozitivní. Leona odmítla interrupci ze zdravotních důvodů, jednak se na vše přišlo dost pozdě, jednak touha po dítěti byla silnější. § Leona byla léčena, bohužel nevhodně zvoleným antibiotikem. Dítě se narodilo nemocné a po dvou týdnech zemřelo na sekundární klebsielovou sepsi Viníkem zde bylo § Treponema pallidum, původce syfilis § Syfilis je klasická pohlavní nemoc. Přenáší se výhradně sexuálně. Jde ovšem o systémové onemocnění – v pokročilých stádiích postihuje celé tělo postiženého člověka (gummata, disekce aorty, neurolues, psychické příznaky) § Některé poddruhy T. pallidum a některá jiná treponemata způsobují jiné choroby (framboesie – yaws, T. pertenue) § Některá treponemata jsou i nepatogenní Gramatická poznámka § Treponema je slovo řeckého původu. V řečtině je středního rodu a leží vedle slov jako je aróma, magma, sperma, smegma, miasma. § Ovšem současnost slovo Treponema (ale i třeba slovo plasma) rozkolísala, a proto se často používá i ženský rod (ta Treponema) § Slovenčina urobila všetkým historickým reminiscenciám dôrazný koniec, a preto všetky tieto slová sú v slovenčine ženského rodu. Průběh syfilis Terciární syfilis Syfilis Yaws (framboesie) Příběh třetí § Pan Krysařík byl pracovníkem firmy KVAK (Kocourkovské vodovody a kanalizace, a. s.) § Jeho denním chlebem byla údržba kanálů. Nebylo kanálu, který by neznal. Znal i zvyky potkanů, měl je docela rád a rozuměl si s nimi. § Přesto jednou došlo mezi ním a vůdcem tlupy potkanů k jakémusi nedorozumění a pan Krysařík byl kousnut do lýtka § Netrvalo dlouho, a pan Krysařík ležel se žloutentkou a krvácivými stavy v nemocnici… Tohle sice není pan Krysařík, ale jeden jeho venezuelský kolega s.podobným osudem Viníkem je… Defilé zločinců: Spirochety Treponemata: jak pátrat přímo § Přímý průkaz se dělá zřídka už proto, že málokdy je co odebrat. Jen pokud má pacient(ka) zrovna tvrdý vřed, lze provést seškrab z něj. § Mikroskopie: Používá se nativní preparát – zástin. Zvláštností je, že ač jde o nativní preparát, používá se imerze (treponemata jsou velmi subtilní). Mimo to lze provést fluorescenční barvení § Kultivace ani biochemická identifikace se nepoužívají § Průkaz antigenu lze provést přímou IMF § Pokus na zvířeti: Existuje tzv. RIT – Rabit infectivity test (test infekčnosti na králíkovi § PCR diagnostika se stává čím dál důležitější 4b Zástinová mikroskopie New Zealand Rabbit Imunofluorescence Treponemata: jak pátrat nepřímo § Používají se netreponemové testy, kde antigenem je zpravidla kardiolipin z hovězích srdcí, a treponemové testy, kde antigen je získán opravdu z Treponema pallidum § Diagnostika se skládá ze screeningu a konfirmace. Konfirmuje se vše, co ve screeningu vyšlo pozitivní či aspoň hraniční, a dokonce i to, co bylo negativní, je-li důvod. § Screeningově se zpravidla použije jeden netreponemový a jeden treponemový test § Konfirmace se provádí pomocí velmi spolehlivých treponemových testů Přehled nejdůležitějších nepřímých testů na lues TPHA - připomenutí Připomenutí TPHA II (www.medmicro.info) TPHA – hodnocení: Borrelie a leptospiry – průběh pátrání § Borrelie: Především sérologie, popř. PCR. Sérologii se stanovují IgM (svědčí pro časnou infekci) a IgG protilátky metodou ELISA, pozitivní nález se ověřuje Western blotem. Western blot je specifičtější metodou. § Leptospiry: Používá se zástinová mikroskopie (viz jarní semestr) a kultivace ve speciálním médiu. Nepřímá diagnostika borreliózy § Konfirmují se pouze ty výsledky, které vyšly pozitivní reakcí ELISA. Za pozitivní se u IgM považuje pozitivita alespoň v jednom specifickém pruhu, u IgG alespoň ve dvou specifických pruzích (názvy specifických pruhů jsou na šabloně v šedém obdélníku) Serologie syfilis – ukázka postupu (screening a konfirmace ) § Nejdříve vybereme ze screeningových pacientů ty, které je třeba konfirmovat § Následně potvrdíme jejich diagnózu a učiníme konečný závěr § Pracujeme s pěticí pacientů: § A = těhotná žena § B = pacient s hojící se ulcerací na glans penis § C = kontakt pacienta s ulcerací (B) § D = žena s projevy sekundarismu (mokvavé léze v.dutině ústní, riziková anamnéza) § E = novorozeně ženy léčené před 2 lety pro syfilis Výsledky - screening Výsledky - konfirmace Leptospira v elektronovém mikroskopu Další diagnostické možnosti u leptospir (latexová aglutinace) Diagnostika leptospir Přehled použité literatury Mykoplasmata Mykoplasmata § zvláštní skupina balterií - Mollicutes - "ty s měkkou kůží" § nemají buněčnou stěnu. § nelze stanovit jejich tvar, který může být kulatý, oválný či vláknitý. § u člověka jsou významné rody Mycoplasma a Ureaplasma § nejmenší organismy, které ke svému růstu nepotřebují cizí buňku § několikrát menší než běžné bakterie Mycoplasma pneumoniae § původcem tzv. atypických pneumonií. § není příliš výrazný nález při běžném vyšetření, ale zato je výrazný nález na rentgenu § choroba probíhá ve tkáni mezi plicními sklípky. § mohou nastat i mimoplicní komplikace (srdeční, nervové a jiné). § často naopak jen jako rýma nebo úplně bez příznaků § přenos vzduchem Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum § důležití původci pohlavně přenosných nákaz § záněty pochvy, močové trubice aj. Mycoplasma genitalium § také na pohlavních orgánech, význam nejasný § Mycoplasma penetrans § u nemocných AIDS jako oportunní infekce Mykoplasmata Kultivace § Speciální půdy pevné i tekuté § Rostou pomalu (dny až týdny) § Na agarové půdě obvykle kolonie vzhledu sázeného vejce, nutno ale prohlížet pod lupou či mikroskopem! § Toto neplatí pro Mycoplasma pneumoniae § Ureaplasma urealyticum - tekuté médium s ureou, zčervenání = přítomnost mikroba § Mycoplasma hominis - totéž, ale substrátem je arginin § Vzorky pro průkaz urogenitálních mykoplasmat se ředí § Vždy transportní médium Kolonie mykoplasmat Půdy na urogenitální mykoplasmata § Na obrázku jsou agarové půdy, u nás se používají půdy tekuté; barevná změna ze žluté na červenou je však stejná Nepřímá diagnostika § KFR, ELISA aj.Obvykle zároveň se serologií respiračních virů Imunofluorescenční průkaz § Vlevo buňky nenapadené mykoplasmaty, vpravo tytéž buňky napadené Průkaz PCR Chlamydie Chlamydie § povinně nitrobuněční parazité. § jsou to přesto bakterie, v mnohém blízké gramnegativním § od plnohodnotné bakterie, se liší především neschopností vyrobit ATP § mají ale buněčnou stěnu. Chlamydia trachomatis § onemocnění závisí na serotypu: § Serotypy L1, L2, La2 a L3 § vyvolávají tropickou pohlavní nemoc - lymphogranuloma venereum. § Serotypy D až K § způsobují pohlavně přenosná onemocnění ve vyspělých zemích § často bez příznaků § možné záněty různých částí pohlavního ústrojí § možná neplodnosti § mohou též způsobit záněty spojivky - paratrachom Chlamydia trachomatis § Serotypy A, B, Ba a C § způsobují trachom - nejčastější příčinu slepoty v rozvojových zemích § postižen téměř každý desátý obyvatel zeměkoule (tj. asi půl miliardy lidí!) § začíná jako zánět spojivek § slepota přichází během 25 – 30 let § přenos dotykem a nespecifickými přenašeči (mouchy). Chlamydophila pneumoniae § především onemocnění dýchacích cest § od rým a zánětů dutin až po záněty plic Chování chlamydií § nechají se pohltit hostitelskou buňkou § v ní se namnoží § pak jsou z buňky vypuzeny nebo ji rozloží Diagnostika chlamydií § Mikroskopie s použitím speciálních barviv je možná, ale běžně se neprovádí § Gramem se nebarví. § Pro kultivaci nutné speciální odběrové médium § Kultivace na buněčných kulturách jako u virů Pozorují se buněčné inkluze § Významný je průkaz antigenu, např. ELISA § Nepřímý průkaz: KFR a ELISA. § Genetické metody: genová sonda, PCR, LCR Z diagnostiky chlamydií Rickettsie a příbuzné organismy Rickettsie a spol. § Podobně jako chlamydie odebírají z hostitelských buněk ATP a navíc i jiné živiny § Jsou rovněž povinně nitrobuněčnými parazity § Při výzkumu rickettsií přispěl badatel Prowazek z Jindřichova Hradce Prowazek Prowazek § (1875-1915) "Nikdo nemůže vyjádřit mínění o povaze viru jen na základě experimentů, tak, jak se v nynější době stává se dogmatem." § Mikrobiolog a zoolog a objevitel původce skvrnitého tyfu Stanislaus Prowazek se narodil v Jindřichově Hradci v rodině důstojníka rakouské armády dne 12. listopadu 1875. Studoval na přírodovědecké fakultě v Praze a ve Vídni. Jeho doktorská práce zaujala Paula Ehrlicha (pozdějšího držitele Nobelovy ceny). A tak se Prowazek stal jeho asistentem. Postupně se stává nadějí německé medicínské parazitologie. Prowazek se stává vedoucím protozoologické laboratoře Institutu pro tropické choroby v Hamburgu. Další osudy této erudované osobnosti jsou spojeny se skvrnitým tyfem, typickou válečnou chorobou. Za tou se Prowazek v roce 1913 vypravuje do Srbska. Prowazek v chotěbuzském zajateckém lágru studoval nad mikroskopem tyfový materiál nemocných zajatců. Toto studium se mu stalo osudným. Porobně jako Ricketts i on se nakazil skvrnitým fyfem a dne 17. února 1915 zemřel. § 99 www.quido.cz/osobnosti/images/prowazek.gif Rickettsia § skvrnitý tyfus, vyvolávaný R. prowazeki § vyrážka, vysoká horečka aj. § smrtí velice často § častý během válek, i u nás, např. v koncentračních táborech § po letech někdy pozdní vzplanutí - tzv. Brill-Zinserova choroba. § jiné rickettsie způsobují tzv. purpurové horečky (např. horčka Skalistých hor) Rickettsiím příbuzné (?) organismy § Rochalimea § vyvolává např. zákopovou horečku a snad i nemoc z kočičího škrábnutí. § Ehrlichia § vyvolává nemoci, postihující hlavě bílé krvinky § klíšťová ehrlichióza - v USA, ale i u nás § Coxiella § plicní choroby s horečkou - tzv, Q-horečka. § Bartonella § peruánské bradavice § mnohem závažnější horečka Oroya § Bartonella hensellae - nemoc z kočičího škrábnutí Vlastnosti rickettsií a příbuzných organismů § Po opuštění buňky většina rickettsií rychle hyne. § Ve stolici vší však může R. prowazekii přežít dlouho. § Odolné jsou coxielly, mohou být přeneseny vzduchem § Jinak přenos savčích rezervoárů (podle druhu: ovce, hlodavci, psi...) § Přenašeči: veš, blecha, klíště, komár Přenašeč Diagnostika § se provádí jen ve vyčleněných laboratořích za zvlášť přísných bezpečnostních opatření § mikroskopie se zpravidla neprovádí § kultivace na žloutkovém vaku nebo buněčných kulturách § antigenní analýza imunofluorescencí § nepřímý průkaz KFR, aglutinací a imunofluorescencí § u některých rickettsií funguje zkřížená aglutinace - protilátky reagují s O antigeny některých nepohyblivých kmenů Protea (tzv. Weil-Felixova reakce) Děkuji za pozornost Použity obrázky z adres: 01 http://www.unmc.edu/dept/biochemistry/index.cfm?L2_ID=4&L1_ID=2&CONREF=23 02 www.unc.edu/depts/tcf/badbug_index.htm. 03 www.vbi.vetsuisse.unibe.ch/home_main.htm. 04 05 http://www.clongen.com/mycoplasma_in_cell_culture_or_biologicals-.htm 06 http://www.rowland.harvard.edu/labs/bacteria/projects_glide.html 07 www.invivogen.com/sscat.php?ID=1&ID_cat=1. 08 http://www.remelinc.com/order/ShowItems.cfm 09-12 http://webdb.dmsc.moph.go.th/ifc_nih/a_nih_1_001c.asp?info_id=933 13 http://www.newbugs.info/ 14 www.bocascientific.com/images/e-myco.gif 15 www.notfalllabor.de/bilder/10424.jpg (medco Diagnostika GmbH, München) 16 http://www.nature.com/genomics/papers/r_prowazekii.html 17 www.shoarns.com/Flea.html. 18 http://www.pathguy.com/lectures/rmsf.gif 19 http://info.fujita-hu.ac.jp/~tsutsumi/case/case169.htm 20 http://info.fujita-hu.ac.jp/~tsutsumi/photo/photo135-4.htm 21 http://info.fujita-hu.ac.jp/~tsutsumi/photo/photo135-2.htm 22 emma-jane4.tripod.com/.