Hybridizace DNA

                        Ivana Eštočinová, Pavla Fabulová, Markéta Formánková

                                            Hybridizace

•      Základní vlastnost NK založená na principu komplementarity bází

•      Proces vytváření dvouřetězcových molekul z jednořetězcových DNA za předpokladu, že se jejich
sekvence vyznačují úplnou nebo částečnou komplementaritou bází.

•      Hybridizovat mohou vlákna DNA/DNA, RNA/RNA i DNA/RNA

                                         Postup hybridizace

•      Zvýšení teploty (90°C) nebo pH (13) na hodnotu, při níž dojde k denaturaci

•      Míchání za stálé teploty

•      Proces renaturace - snížení teploty nebo pH - komplementární řetězce se opět spojí vodíkovými
můstky na základě komplementarity bází            

            

                                        Výsledek hybridizace

•      Hybridní molekuly DNA - renaturované molekuly, v nichž se spojily řetězce pocházející z
molekul DNA různých zdrojů.

•      Homoduplex - hybridní molekula DNA, jejíž řetězce se vyznačují úplnou komplementaritou

•      Heteroduplex -  hybridní molekula DNA, jejíž řetězce se vyznačují neúplnou komplementaritou

                                               Sondy

•       Základem hybridizace je vždy značená sonda o známé nukleotidové sekvenci

•      DNA sonda je krátká jednořetězcová DNA (10-1000 nukleotidů), která slouží k nalezení NK
obsahující komplementární sekvenci

•      sondy jsou značeny radioaktivními nebo neradioaktivními markery



Typy sond

•      restrikční fragmenty dvouřetězcové DNA (cDNA)

•       mRNA izolovaná z buněk nebo tkání

•       RNA transkripty in vitro

•       syntetické oligonukleotidy (připravené podle sekvence aminokyselin)





•      Hybridizace                      s radioaktivně značenou sondou

                         Uspořádání hybridizačního experimentu je rozmanité
                             podle povahy prostředí, ve kterém probíhá



                                   Použití FISH  pro detekci genů
                                          na chromosomech

•      Použito 6 různých sond pro analýzu sekvencí v lidském metafázním chromozomu 5

•      Každá sonda vytváří 2 tečky na každém chromozomu

                                         Význam hybridizace



•      prenatální diagnostika genetických chorob

•      určení polohy sekvencí NK v buňkách nebo na chromozomech

•      možnost identifikovat jediný gen mezi miliony fragmentů lidské DNA – vysoce specifická metoda



•      Děkujeme 

                         za

                                  pozornost.....