Klonování genů

                                        Martina Bednáriková

                                                  &

                                         Rastislav Benčo ©





                                      O/ Co to vlastně gen je?



•     úsek DNA se specifickou funkcí



•     je schopen utvářet svoje vlastní přesné kopie



                                       O/Co je klonování DNA?



•     pořizování identických kopií (klonů)

•     využívá enzymatické systémy živých buněk

•     je třeba přimět určité buňky, aby kopírovaly úsek cizí DNA

                            O/Jak přimět buňky, aby kopírovaly cizí DNA?



•     musíme je oklamat ☻

•     používají se především bakterie, příp. bakteriofágy

•     technologie rekombinantní DNA

•     vektor, klonovací vektor

                                O/Jaké klonovací vektory lze použít?



•     fasmidy

•     plazmidy

•     bakteriofágy

•     kosmidy

•     umělé bakteriální chromosomy (BAC = bacterial artificial chromosome)

•     umělé kvasinkové chromosomy (YAC = yeast artificial chromosome)

                                 O/Jak se klonuje pomocí plazmidu?



•     pBluescript

•     ColE1ori

•     rezistence k antibiotikům

•     mnohočetné klonovací místo

                      O/Jak ale probíhá samotné vložení cizí DNA do plazmidu?



•     linearizace

•     vložení a spojení

•     kompatibilita spojovacích konců





                   O/Jak lze plazmid vpravit do bakterie, pomnožit a získat zpět?



•     transformace (kompetentní buňky)

•     destabilizace CPM

•     kultivace bakteriální kultury

•     izolace nukleových kyselin



                                        O/Proč klonovat DNA?

                                        Naklonovaný úsek DNA

•     jako DNA sondu

•     použít pro sekvenování

•     in vitro transkripce

•     in vivo exprese