Lékařská mykologie Iva Kocmanová Obecná mykologie Rozmnožování hub Názvosloví hub Názvosloví hub Názvosloví hub – klinická praxe Obecná mykologie studuje zástupce Onemocnění způsobená houbami - patogeneze Onemocnění způsobená houbami - rozdělení Léčba - antimykotika Medical Mycology: The Last 50 Years Léčba – antimykotika (mechanismus účinku) Možnosti diagnostiky – klinická mykologie Možnosti diagnostiky – klinická mykologie nativní preparát (kultury) C.parapsilosis –rýžový agar Výhody: • rychlost (minuty), relativní levnost, specificita, riziko kontaminace není tak velké, může být pozitivní i v případech, kdy houba již není životaschopná (př.dermatomykóza) Nevýhody: • malá senzitivita, pozitivní obvykle až pozdějších stádiích invaze • v materiálu lze většinou jen orientačně zařadit patogena do rodu nebo skupiny (septované x neseptované) Ø Stále není zcela prokázaný vztah mezi výsledky in vitro a in vivo houby rostou pomaleji než bakterie stavba buňky (eukaryota) a složení (chitin) jiná reakce makroorganismu…. Ø Existují standardní metodiky – CLSI (M27-A pro kvasinky, M37-A pro vláknité houby, M44-A pro DDS) nevhodné pro rutinu (pracné, drahé, zatím nedostupné) Ø V rutinní praxi lze využít pomocné metodiky s různou shodou se standardními (ETEST, Sensititre, DDT..) Výhody: • umožní zařadit patogena do rodu i druhu (epidemiologie), otestovat citlivost na antimykotika, specifické (z primárně sterilních materiálů) Nevýhody: • málo senzitivní (ale víc než mikroskopie), časově náročnější (dny až týdny), riziko kontaminací (pomnožení), pozitivní až pozdějších stádiích invaze, u nesterilních materiálů obtížná interpretace (moč, sputum etc.) Možnosti diagnostiky – klinická mykologie antigeny buněčné stěny hub protilátky antigalaktomanan ostatní manitol, gliotoxin, enoláza… Nekultivační metody – sérologie stanovení antigenů G-test - princip 1,3-beta-D-glukan polysacharid běžný v přírodě - houby, bakterie, řasy, vyšší rostliny Nekultivační (sérologické) metody stanovení protilátek Výhody: • rychlé, senzitivní, specifické, možnost monitorovat léčebnou odpověď (v případě antigenů) Nevýhody: • falešné pozitivity, nejednoznačná interpretace (protilátky), cena (G-test) Možnosti diagnostiky – klinická mykologie Ø velmi citlivá – může detekovat jen několik kopií genu v reakci a dokonce méně než jeden genom. Ø lze využít jak konzervované, tak variabilní úseky genomu a tak navrhnout assay panfungální nebo specifickou pro určité rody nebo druhy. Ø kvantifikací lze odlišit kolonizaci od aktivní infekce. Ø při použití multiplex PCR lze detekovat více druhů v jedné PCR reakci. Ø výsledek je znám během několika málo hodin. Falešné negativity z důvodu: Ø málo účinné metodě izolace DNA Ø velkému nadbytku humánní DNA ve vzorku (kompetice) NESTANDARDNÍ Neexistuje shoda o výběru: • testovaného materiálu (plná krev, plazma, sérum) • metody izolace DNA • PCR metody pro detekci (nested PCR, RT qPCR..) První snahy o standardizaci: • mezinárodní srovnávací studie (Lewis 2006) nebo komerční kit pro detekci - affigene® Aspergillus tracer Mikrobiologická diagnostika IFI shrnutí Mikroskopie (v minutách) Mykózy Epidemiologie invazivních mykotických infekcí Epidemiologie invazivních mykotických infekcí Kandidóza Kandidóza mikrobiologická diagnostika – kultivace, mikroskopie Sérologie kandidózy manan, antimanan, glukan – senzit., spec., ALE falešné pozitivity Rizikové faktory pro vznik IC Aspergilóza Aspergilóza mikrobiologická diagnostika – kultivace, mikroskopie Sérologie aspergilózy mikrobiologická diagnostika – galaktomanan, glukan Sérologie aspergilózy mikrobiologická diagnostika – galaktomanan, glukan Sérologie aspergilózy mikrobiologická diagnostika – galaktomanan, glukan Zygomykóza Zygomykóza mikrobiologická diagnostika – kultivace, mikroskopie Fusarióza Kryptokokóza (invazivní) Pneumocystová pneumonie Povrchové (superficiální) mykózy Ø Dermatofytózy (tinea – dle lokalizace capitis, corporis, manus, pedis, unguium - onychomykóza…) Ø Kandidózy Ø Keratomykózy (Pityriasis versicolor) Závěry – co byste měli vědět JJ