LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA PARAZITŮ PETRA KUBÁČKOVÁ OKM n přímý průkaz n makroskopický n mikroskopický n průkaz antigenu n PCR n kultivace n nepřímý průkaz n průkaz protilátek PŘÍMÝ PRŮKAZ n materiál: • stolice – vajíčka červů, cysty prvoků • moč – vajíčka schistosom, trichomonády • krev – plasmodia, babesie, leishmanie, trypanosomy • výtěr – trichomonády • biopsie – vajíčka schistosom, E. histolytica, echinokok,… PŘÍMÝ PRŮKAZ n MIKROSKOPIE - v nativním preparátu nebo po koncenteraci - v barveném preparátu (Giemsa, trichrom, Miláček) n PRŮKAZ ANTIGENU (giardie, kryptosporidia, tricho) n PCR (Toxoplasma gondii – PCR RT, plasmodia, entaméby) n KULTIVACE (trichomonády, entaméby, akantaméby) n MAKROSKOPICKÝ (články tasemnice, škrkavky, larvy,…) ODBĚR KRVE NA MALÁRII BARVENÍ n po usušení tenký roztěr fixujeme metanolem (1 minutu) n barvíme Giemsa-Romanowski (1 díl G-R + 9 dílů pufrované destilované vody), tlustou kapku 20 minut, tenký roztěr 30 až 40 minut n barvicí roztok splachujeme opatrně n vždy připravíme nový barvicí roztok STANOVENÍ PARAZITÉMIE n prohlížíme při zvětšení 100x n parazitémie v tenkém roztěru se počítá na 10 000 erytrocytů (200 ery na zorné pole, 50 zorných polí), výsledek se udává v procentech n parazitémie vyšší než 2,5% - pacient patří na jip DIAGNOSTIKA STŘEVNÍCH PARAZITŮ n barvení trichromem n stolici špejlí rozetřeme na podložní sklo do středně silného nátěru n hned za vlhka ( nesmí v průběhu barvení včetně montování do Solakrylu uschnout ) fixujeme n 1. sublimát alkohol 1 hod. n 2. 75% alkohol 10 min. n 3. 75% alkohol 10 min. n 4. TRICHROM 10 min. n oplach pod tekoucí vodou n oplach v 96% alkoholu n vložit do 96% alkoholu 10 min. n karboxylen 10 min. n xylen 10 min. n montovat do Solakrylu = na sklo kápneme skleněnou tyčinkou 2 kapky Solakrylu, překryjeme krycími skly n nativ + Faust n 1.nativní preparát n nativní preparát se provádí ze stolice hned, jak vzorek přijde do laboratoře n vzorek velikosti obilného zrna rozmíchat špejlí do kapky fyziol.roztoku / RINGER/ na podložním skle /slabší nátěr/ n přikryjeme krycím sklíčkem n hledáme pohyb v čerstvé stolici = vegetativní stadium u améb n 2.Faustova metoda flotační n vzorek stolice asi 1g (jako fazole) se špejlí přenese do zkumavky s dest.vodou a důkladně rozmíchá n suspenzi centrifugovat při 2500 ot./min. asi 1 minutu, supernatant odsát vodní vývěvou, 2 - 3 x opakovat n doplnit 1cm pod okraj roztokem ZnSO4, řádně promíchat a stočit 3 minuty při 2500 ot./min. n doplnit po okraj a přiložit krycí sklíčko na hladinu roztoku n po 20 minutách položit toto krycí sklo na podložní sklo n sedimentační metoda (formol – éterová) n vzorek nativní stolice (asi 1 g) přenést do krevní zkumavky, řádně rozmíchat ve fyz. roztoku n suspenzi opakovaně promývat centrifugací (2 min. při 1500 ot./min.) fyz. roztokem (popř. vodou) n vypraný sediment suspendovat do 5 ml 4%formaldehydu n nechat stát 5 minut n přidat 1,5 ml éteru (popř. octanu ethylnatého), zazátkovat gumovou zátkou, řádně roztřepat n centrifugovat 2 min. při 1500 ot./min. n třívrstevný supernatant uvolnit špejlí od stěn zkumavky a odstranit n sediment přenést na podložní sklo a přikrýt krycím sklem n laboratorní diagnostika kryptosporidií n uděláme silný nátěr a necháme zaschnout n fixace metanolem 5 minut n methylová violeť nebo gencianová violeť 30 minut n krátce opláchnout tekoucí vodou n diferencovat v 1-2% H2SO4 do světle fialové barvy 30 s- 2 minuty n opláchnout tekoucí vodou n dobarvit oranž G ( nebo roztok tartrazinu ) 30 s – 2 minuty n krátce opláchnout tekoucí vodou n nechat zaschnout při pokojové teplotě n montáž do média ( Solakrylu, Caedaxu ) DIAGNOSTIKA TRICHOMONÁD n TRICHOMONAS VAGINALIS specifický parazit lidského urogenitálního systému, kosmopolitní, přenos pohlavním stykem, netvoří cysty a je málo odolný mimo tělo hostitele NEPŘÍMÝ PRŮKAZ n průkaz protilátek (toxoplasmóza, toxokaróza, echinokokóza, schistosomóza, E. histolytica, trichinelóza, filárióza) DIAGNOSTIKA TOXOPLASMÓZY n opakované serologické všetření n stanovení avidity protilátek n KFR, ELISA protilátek IgM a IgG n přímý průkaz - PCR DIAGNOSTIKA TOXOKARÓZY n materiál: srážlivá krev, sklivec, likvor n ELISA IgG, WB n vysoká eosinofilie n zobrazovací metody - CT DĚKUJI ZA POZORNOST