APOPTÓZA Karel Souček, Ph.D. Alena Vaculová, Ph.D. Oddělení cytokinetiky Biofyzikálni ústav AV ČR, v.v.i. Apoptóza - programovaná buněčná smrt - termín poprvé použil australský patolog J. F. Kerr v roce 1972, aby odlišil jinou formu buněčné smrti než je nekróza - název odvozen z řečtiny, znamená „padání listí" - od 70. let intenzívní výzkum apoptózy a její regulace - geneticky kontrolovaný komplexní proces programované buněčné smrti, cílená sebedestrukce buňky - obrovský význam ve vývoji a udržení homeostazy mnohobuněčného organismu Apoptóza Viable ■ AVI ■ NATURE REVIEWS MOLECULAR CELL BIOLOGY 111 MARCH 2008 VOLUME 9 Morfologie -nekróza vs. apoptoza ■ ztráta integrity plazmatické membrány ■ bobtnání cytoplazmy a zvětšení buňky ■ rozbití jádra ■ desintegrace buněčných organel ■ kompletní lyže buňky ■ bobtnání cytoplazmatické membrány, integrita membrány není porušena ■ zmenšení velikosti buňky ■ kondenzace a specifická fragmentace jaderného chromatinu ■ udržení integrity intracelulárních organel ■ formace tzv. apoptotických bodies Phase contrast Hoechst Merge ■ NATURE REVIEWS MOLECULAR CELL BIOLOGY 232 MARCH 2008 VOLUME 9 Biochemie -nekróza vs. apoptoza Bez účasti specifických molekul Pasivní proces bez dodání energie z ATP Neregulovaná destrukce jaderné DNA Není specifická role mitochondrií Ztráta regulace iontových rovnováh Aktivace specifických molekul Nutné dodání energie ve formě ATP Specifická fragmentace jaderné DNA Uvolnění specifických regulátorů z mitochondrií Změny symetrie membrán ■ Fyziologický vj nekróza vs. ape Postihuje skupiny buněk Indukována nefyziologickými stimuly Poškození okolní tkáně - vylití toxických látek Spouští zánět »ptóza Týká se jednotlivých buněk Indukována fyziologickými stimuly Fagocytóza makrofágy Není zánět ■ Induktory bunečné smrti -nekróza vs. apoptoza Hypoxie Extrémní výkyvy teploty Osmotický tlak Silné změny pH Lytické viry Metabolické jedy atd. Nedostatek růstových faktorů Hormonální změny Specifické signály smrti - „death Ugandy" Chemoterapie UV-záření Ztráta kontaktu s prostředím Význam apoptózy ■ Eliminace nepotřebných, poškozených, nebezpečných, mutovaných či jinak pozměněných buněk za účelem udržení homeostázy mnohobuněčného organismu Studium apoptózy v mnohobuněčném organismu ■ Caenorhabditis elegans (Nematoda) - první a velmi sofistikovaný model studia PCD Přesně řízený vývoj - organismus z 1090 buněk, z nich během vývoje 131 buněk umírá apoptózou - nutno přesné načasování a lokalizace, jinak vážné malformace Jeden z nejvíce studovaných organismů z hlediska popisu mechanismů apoptózy, podobnost s obratlovci (výskyt analogických apoptotických genů a proteinů) http://en.wikipedia.Org/wiki/Image:CrawlingCelegans. gif Apoptoza ve vývoji mnohobuněčného org ■ Metamorfóza hmyzu - vývoj imaga z larvy ■ Metamorfóza obojživelníků a plazů - ztráta ocasu pulců během proměny v žábu (postupná řízená indukce apoptózy a proměna tvaru těla) Apoptoza ve vývoji mnohobuněčného organismu ■ odumírání některých neuronů při vytváření CNS ■ formace tvaru orgánů a struktur - prsty a interdigitální prostory ■ odstranění abnormalit během embryogenéze (včetně spontánních abortů) Apoptóza v regulaci homeostázy organismu ■ Eliminace starých diferencovaných nepotřebných buněk (krevní, střevní, kožní...) ■ Eliminace již nepotřebných buněk mléčné žlázy po ukončení laktace ■ Regulace endometria během menstruačního cyklu ■ Odumření poškozených zárodečných buněk Apoptóza versus proliferace ■ Pro udržení homeostázy organismu je nutná dokonalá rovnováha mezi procesy proliferace a apoptózy ■ Porušení této rovnováhy má dalekosáhlé důsledky, které se odrazí na zdraví organismu ■ Obzvláště nutné pro intenzívně proliferující tkáně (krev, střevo...) proliferace SSSSSSS ERR! Baa ERR! ERR! i il SSSSS q Rakovina AlO SS homeostaza AIDS neurodegenerativní onemocnění Apoptoza a nemoci -zvýšená vs. snížená apoptoza AIDS Neurodegenerativní onemocnění (Alzheimer,Parkinson) Myelodysplastický syndrom Ischemické poškození (infakrt, reperfuze) Intoxikace jater Rakovina Autoimunitní onemocnění Virové infekce (Herpes, Adenovirus) Obecné znaky apoptózy Změny na úrovni membrán Změny na úrovni jádra Účast specifických genů a proteinů v regulaci apoptózy ■ Regulace apoptozy 3 Granzyme B pathway 1 Extrinsic pathway O— FasLyTNFa i Plasma membra Cytoplasm Granzyme B~rQ BCL-2 subfamily Caspase-8 Death receptors Dathway 2 Intrinsic Caspase-8 J BAD / BID hrkG ' O O BMF m ----NOXA U (_J O PUMA BIM i ° Q, BH3-only proteins Caspase-3 Změny na úrovni membrán Plazmatická membrána - Zachována integrita plazmatické membrány - Významné změny v symetrii membrány • Translokace fosfatidylserinu z vnitřní strany membrány na stranu vnější - signál pro fagocyty, které mají na povrchu specifické receptory pro PS Ann&íin V-PE conjugate o o 1 CíT+ üäff ca" ca*+ Plasma ■nein brané Apo ptosis ---------------► Eťt&ma lízati on of phuSphatiJylStíriľití Cytoplasm Cytoplasm Změny na úrovni membrán ■ Mitochondriální membrána -změny propustnosti vnější membrány mitochondrií, tvorba pórů v této membráně -významné změny mitochondriálního membránového potenciálu - umožnění vylití některých důležitých mediátorů apoptózy z mitochondrií do cytoplazmy Změny na úrovni jádra ■ Kondenzace a fragmentace jaderného chromatinu, shlukování jaderné hmoty v okolí jaderné membrány, charakteristická jaderná morfologie Změny na úrovni jádra Specifická řízená degradace DNA -internukleozomální štěpení DNA - vznik charakteristických fragmentů DNA o délce 180 bp - účast specifických endonukleáz (Ca- a Mg- dependentních) -historie protein ■ DNA Linker-DNA Účast specifických genů a proteinů v regulaci apoptozy ■ Kaspázy Inhibitory kaspáz Nekaspázové proteazy Proteiny rodiny Bel-2 Mediatory apoptozy uvolňované z mitochondrií ■ Kaspázy - Cysteinove proteázy, specificky štěpí proteinové substráty v místě kyseliny asparagové - Klíčová úloha v přenosu apoptotického signálu - v inaktivní formě (proenzymy, pro-kaspázy) v cytoplazme, štěpení - aktivní kaspáza schopná dále štěpit tzv. „death substráty" a významně se tak podílet na šíření apoptotického signálu a exekuci apoptózy - struktura: - Prodoména - Katalytické podjednotky - velká a malá (heterotetramer) ■ 32-57 kDa N Asp-X QACXG , „ W Asp-X Prodomain (2-25 kDa) Large subunit (17-21 kDa) Long Initiator caspases Caspase-2 Caspase-8 Caspase-9 Caspase-l 0 Short Effector caspases Caspase-3 Caspase-6 Caspase-7 Small subunit (10-13 kDa) Cleavage specificity Group I (Caspase-l, -A, -5f -13) (Inflammation) Group II (Caspase-3, -7) (Apoptosis) (Caspase-2) (Apoptosis) Group III (Caspase-6, -8, -9, -10) (Apoptosis) (W/L)EHD DEXD VDVAD (I/L7V)EXD Activace pro-kaspáz 1 32-53 kDa 1 Asp-X Asp-X "HOT -----he p no-domain (3-24 kDa) large subunit small subunil (17-21 kDa) (10-13 kDa) ( cleavage J "ö= O- active sile | larg« subuiW&mall subunil J 3 aclive lei ramer www.rsc.org/ej/NP/2001/A909080K/ Cell membrane Focal adhesion sites Cell-cell adhesion sites 0fc 0 o Golgi fragmentation ER fragmentation NATURE REVIEWS MOLECULAR CELL BIOLOGY 111] MARCH 1008 Substráty kaspáz ■ Strukturální proteiny - laminy (jádro), aktin, fodrin (cytoskelet), keratin 18 (intermediární filamenta) ■ Signální a regulační proteiny - cPLA2, PKC, některé proteiny rodiny Bcl-2, MEKK-1 ■ Transkripční faktory - MDM2, RB ■ Proteiny v regulaci metabolismu DNA/RNA -PARP, CAD inhibitor (inaktivace DNázy závislá na kaspázách) Metody detekce kaspázové aktivity ■ detekce aktivní formy kaspáz ■ detekce aktivity pomocí syntetických selektivních substrátů ■ analýza pomocí značených inhibitorů kaspáz (fluorochrome-labeled inhibitors of caspases (FLICA)) ■ detekce štěpení substrátů kaspáz (PARP.CK18) Caspases: Determination of Their Activities in Apoptotic Cells Alena Vaculova and Boris Zhivotovsky Methods in Enzymobgy, Volume 442 JSSN 007ŕ>-ŕ>879, DOJ: 10.1016/S007ŕ>-ŕ>879(08)01408-0 Detekce aktivní ■ Caspase-3 p32 - O 15 30 p20 pl7 ■ formy kaspáz 45 60 90 120 nim Alena Vaculova and Boris Zhivotovsky Detekce aktivní formy kaspáz ■ Intracelulární detekce pomocí protilátek specifických pouze pro aktivní formu enzymu ■ fixace PFA + permeabilizace E 3 o > 10u 10' 3% M2 ■—*"** * ■■ .q tu O > tu QĹ 10" 10' 1D4 F ITC Active C a spa se 3 e s o ^r g o 1 60% Jl M1 ib 40% ft M2 10° 101 102 103 F ITC Active Ca spa se 3 104 ^ Q BD Detekce kaspázové aktivity pomocí syntetických substrátů v živých buňkách PhiPhiLux (Oncolmmunin) - Permeabilní pár fluorochromů kovalentně spojených linkerem (specifická substrátová sekvence) - Po štěpení dochází ke změně konformace a nárůstu fluorescence - buňky nelze dodatečné permeabilizovat - lze snadno studovat dynamiku aktivace Control g.Fas Ab Staurosporine n PhiPhiLux:s-GiD2 http://www.phiphilux.com/principl.htm Detekce kaspázové aktivity pomocí syntetických substrátů v intaktních buňkách ■ výhody -jednoduchý protokol - u některých substrátů možnost kombinace s detekcí povrchových antigénu ■ limity - specifita , nízká toxicita a prostupnost substrátu - nemožnost fixace a permeabilizace 23 Detekce kaspázových substrátů Poly(ADP)ribose polymerase (PARP) - substrát kaspázy -3, -6 - rutinní detekce fragmentů pomocí Western blotu - analýza na průtokovém cytometru pomocí protilátek proti štěpeným fragmentům • PARP (P25; p89) ePIT^MICS ^IMGENEX +*J>j£jP BETTER ANTIBODIES ■ BETTER SCIENCE J* —— -' ^ J^ f"> ŕí**V^ Ae/is CYTOKERATIN-18 —a-------------i= Ca spase Caspase i BIOCHEMICALS M- .Q. A Brand of Enzo Life Sciences, Inc. *] ^ jj . -, .. . "^l* M30 http://www.peviva.se/pr od/prod.php?key=M30%20CytoDEATH%20antibody Protilátka M30 Cytodeath™ 180 150 120 s. I 90 o <-> 60 Control 1.7 ±0.4% 10^ ISO 150 120 q 90 U 104 10? 10^ 104 FITC Alena Vaculova and Boris Zhivotovsky http://www.alexis-biocheniicals.coni/M30_CytoDEATH_Monoclonal_Anäbody.5+M5f92729e270.0.htnil Detekce kaspázových substrátů ■ výhody - jednoduchý protokol ~ standardní intracelulární imunodetekce na metanol fixovaných buňkách - možnost kombinace s detekcí dalších intracelulárních antigénu ■ limity - kvalita protilátky - buněčná specifita - obtížná kombinace analýzy s detekcí povrchových antigénu - nemožná kombinace s analýzou vitálních funkcí 23 Jakou metodu použít? ■ více než jednu; ■ principielně odlišnou; ■ v závislosti na buněčném typu; ■ a experimentálním zásahu. Účast specifických genů a proteinů v regulaci apoptozy ■ Kaspázy ■ Inhibitory kaspáz ■ Nekaspázové proteazy ■ Proteiny rodiny Bcl-2 ■ Mediatory apoptozy uvolňované z mitochondrií ■ Inhibitory kaspáz ■ FLIP - má sekvenci podobnou kaspáze-8, ale bez katalytického místa, kompetitivně inhibuje vazbu kaspázy-8 v DISCu ■ lAPs - „inhibitor of apoptosis proteins" -clAP1, clAP2, XIAP, survivin - váží se na prokaspázy a kaspázy (prostřednictvím domény BIR) a blokují jejich aktivitu, mohou inhibovat jak iniciační, tak efektorove kaspázy - různé mechanismy Účast specifických genů a proteinů v regulaci apoptozy ■ Kaspázy ■ Inhibitory kaspáz ■ Nekaspázové proteazy ■ Proteiny rodiny Bcl-2 ■ Mediatory apoptozy uvolňované z mitochondrií ■ Nekaspázové proteázy ■ Calpainy (I, II, calpastatin) ■ Cathepsiny (B, D, L) ■ Granzymy (A, B) ■ Mohou buď spolupracovat s kaspázami, nebo spouštět buněčnou smrt nezávisle na nich Calpainy ■ Cytosolové cysteinové proteázy ■ Aktivace závislá na vápníku (|liM, mM), mají vazebné domény pro Ca2+, autolyze a autoaktivace ■ |Li-calpain (calpain I), m-calpain (calpain II), calpastatin (inhibitor calpainů) Glutamate Ca2* NMDA CALPAIN t C yt os kel eta I Breakdown i Membrane Damage Cathepsiny ■ Lysosomální proteázy ■ Aktivovány v kyselém pH (lysosom) -autoproteolýza, nebo jinými proteázami ■ Nejznámější - cathepsin B, D ■ Během apoptozy translokovany z lysozomu do cytoplazmy - exekuce apoptozy Granzymy ■ Serinové proteázy T-buněk a NK-buněk ■ Spolu s perforinem se podílejí na indukci buněčné smrti (perforin vytvoří póry v buňce, umožní průnik granzym u B) ■ Granzym B se může účastnit aktivace kaspáz nebo DNáz Účast specifických genů a proteinů v regulaci apoptozy ■ Kaspázy Inhibitory kaspáz Nekaspázové proteazy Proteiny rodiny Bel-2 Mediatory apoptozy uvolňované z mitochondrií ■ Proteiny rodiny Bcl-2 ■ Důležité regulátory apoptózy na úrovni mitochondrií ■ Rodina asi 30 proteinů, pro něž je charakteristická přítomnost tzv. domény BH (Bcl-2 homology), které zprostředkovávají interakce s jejich vazebnými partnery ■ Patří sem proteiny jak s proapoptotickou, tak antiapoptotickou funkcí, na jejich rovnováze pak závisí osud buňky - V nepřítomnosti apoptotického signálu jsou proteiny Bcl-2 rodiny lokalizovány v různých subcelulárních kompartmentech - antiapototické proteiny - integrální membránové proteiny -mitochondrie, endoplazmatické retikulum, jádro - proapoptotické proteiny - cytosol, cytoskelet - apototický stimulus má za následek jejich konformační změny a translokace, především do mitochondrií- na úrovni mitochondriální membrány pak dochází ke vzájemným interakcím pro- a antiapoptotických proteinů této rodiny - velký význam v regulaci propustnosti membrány, membránového potenciálu a vylití specifických mediátorů apoptózy z mitochondrií do cytosolu Death blocker Bcl-2 Cell death signal Death inducer ▼ CHECKPOINT Bax Death signal blocked CELL SURVIVAL Death signal promoted CELL DEATH Proteiny rodiny Bcl-2 Regulace mitochondriální dráhy indukce apoptozy NATURE REVIEWS MOLECULAR CELL BIOLOGY Anti-apoptotic BCL-2 C BCL-XL BCL-W ÍBH4Í ÍBH3Í ĹBH1Í i BH27 í.,fĚH4í ŕňH3 bhí; MCLl í i'RM4f iRMV ŕ ftHIÍ f RH?( BCL2A1 f.,'BH4í >ĚH3i ■ BHI [ i BCL-B (,jBH4{ jBH3[ \ BHfT" Pro-apoptotíc BAX BAK BOK BH3-only BIK HRK BIM BAD BID PUMA NOXA BMF L L ■BH3I ÍBHTT (BH3Í i BH1 ■ ■;bh3I IBHU íbRIí 1BH31 ÍBHM THT BH2i BH2i ;bh3: TbhF iBH2( ÍTMTD21 ■BH2Í (TM(Í)24 Ĺ BH2-: (TMTD23 ;'BH3i (tmTDio ;BH3; ~fTMTľ'22 Du 111 MARCH 200S VOLUME 9 Bcl-2 ■ B-cel I lymphoma 2 protein ■ Bcl-2 byl první popsaný člen této rodiny (po něm pojmenována) a zároveň první popsaný savčí regulátor apoptózy ■ Antiapoptotický protein ■ Důležitá úloha v rezistenci nádorových buněk k některým typům chemoterapeutik Mcl-1 - Myeloid cell leukemia 1 protein - Antiapoptotický protein z Bcl-2 rodiny - Úloha v regulaci diferenciace a apoptózy - Krátký poločas rozpadu, „short-term viability protection", po vstupu do apoptózy jeho hladina v buňce prudce klesá, což může ovlivnit spuštění mitochondriální dráhy indukce apoptózy - translokaci Bax, uvolnění cytochromu c, Smac/DIABLO, aktivaci kaspáz... Bid ■ proapoptotický protein ■ obrovský význam v integraci signálů dvou základních drah indukce apoptozy - „vnější a vnitřní" ■ spojení receptorove dráhy indukce apoptozy a mitochondrii, regulace vylití cytochromu c z těchto organel a následné aktivace mitochondriální dráhy _., Caspase-8 _., Bid F tBid (22kDa) (15kDa) Inactive form Active form cytoplasm mitochondria MITOCHONDRIE centra buněčného dýchání, energetická centra buňky složení: vnější membrána - semipermeabilní (5 kDa), kanálky (porin) vnitřní membrána - nepropustná, pouze selektivní transport, bohatě členěná (kristy - zvětšení povrchu -syntéza ATP), zde ukotveny proteiny - součásti elekron-transportního řetězce, transport elektronů a syntéza ATP intermembránovy prostor (enzymy, proapoptotické proteiny) matrix - vysoce koncentrovaná směs enzymů, DNA, ribozomy, citrátový cyklus Úloha mitochondrií v apoptóze - Změny v transportu elektronů - Změny energetického metabolismu buňky - Změny v produkci ROS - Změny mitochondriálního membránového potenciálu - Účast proteinů rodiny Bcl-2 (Bid, Bak, Bax...) - Uvolnění proapoptotických proteinů Účast specifických genů a proteinů v regulaci apoptozy ■ Kaspázy ■ Inhibitory kaspáz ■ Nekaspázové proteazy ■ Proteiny rodiny Bel-2 ■ Mediatory apoptozy uvolňované z mitochondrií ■ Mediatory apoptózy uvolňované z mitochondrií ■ Cytochrom c - aktivace kaspázy-9 na úrovni apoptozomu ■ Smac/DIABLO - inhibuje lAPs - přispívá tak k aktivaci kaspáz ■ endoG -mitochondriální nukleáza, translokuje se do jádra, kde štěpí DNA ■ Omi/Htra - serinova proteaza, antagonista některých lAPs ■ AIF - translokován do jádra, iniciace řady procesů apoptózy včetně např. kondenzace chromatinu Cell Death Sensitization taati") ^ignal-s ^toíhoíiiJrtori Smac'DlABLU 0 HtľAZ'Omi CHc-cIĎT Caspars CA Cň CAD CAD [DFF4Dd 0 e ÉndaŮ DNA Fragmentation M U LI ■? U 5 Apoptóza zprostředkovaná přes povrchové receptory ■ Tzv. „death receptory" - receptory smrti, přes ně dochází ke spuštění _ apoptózy indukované tzv. ligandy smrti ■ Patří do rodiny TNF (tumor necrosis factor) ■ Obsahují tzv. „death doménu", která umožní pokračování přenosu apoptotického signálu (vazba s dalšími členy signální dráhy) ■ Významné ligandy a receptory rodiny TNF CD95L (FasL) - CD95, Fas TNF-alfa-TNF-R1 TRAIL - DR4, DR5, DcR1, DcR2, OPG TNF-oc, FasL TRAIL - členové rodiny TNF - úloha v imunitních a zánětlivých reakcích organismu, v regulaci proliferace, diferenciace a apoptózy -podobnost apoptotických signálních drah (oligomerizace receptoru, adapterový protein, death doména, iniciační kaspáza) - vazba na tzv „death receptory" (TNFR1, Fas -CD95, TRAIL-R1, TRAIL-R2) TNF-oc, FasL TRAIL - cytotoxické a antiproliferační působení na řadu buněčných linií - využití v protinádorové terapii jako důležitá alternativa ke konvenčním léčebným postupům využívajícím chemoterapii a ionizující záření - omezení: vedlejší účinky, rezistence Systémová aplikace - TNF-g, anti-Fas, TRAIL - TNF-a, anti-Fas - silná zánětlivá odpověď, poškození jaterních buněk - TRAIL - výhoda, selektivní toxicita, většina normálních buněk rezistentní k jeho účinkům, otázka - hepatocyty -in vivo - intravenózni infuze, vysoké dávky - myši, primáti (šimpanzi) - bez toxických vedlejších efektů, co člověk? TRAIL selektivní indukce apoptozy u celé řady nádorových buněk, ne však u většiny normálních (na rozdíl od TNF, Fas) ivfLji I1 *r tin J dein n rtťčptúľS ff • možnost interakce s pěti různými receptory TRAIL-R1 (DR-4, APO-2) TRAIL-R2 (DR-5, TRICK, Killer) TRAIL-R3(DcR1) TRAIL-R4 (DcR2, TRUNDD) TRAIL-R5 (osteoprotegerin) ■ TRAIL „death receptor' Prokaspáza-8 \ XI Kaspáza-8 Efe kto rove kaspázy FADD Bid i—n Buněčná membrána Mcl-1 Bcl-2 Bax tBid Bak n Mitochondrie N^ Cytochrom c O dATP i »ľ Q Apaf-1 Kaspáza-9 •O l=l 3 U Prokaspáza-9 Kaspáza-6 Kaspáza-3 l i jádro „Death" substráty Modelový systém pro studium apoptózy - in vivo Epitel střeva, střevní krypta DIFFERENTIATION Fully d i f í erf n t i.-Ue*d terminal cells Pro! if e rati ng /d ifferenti ating »lis Stem cells PROLIFERATION o REPLICATION /\ STAGES O O o Modelový systém pro studium apoptózy - in vitro ■ Buněčná kultura na Petriho misce -adherentní epitheliální buňky kolonu ■ Postupné uvolňování původně přisedlých buněk do média, apoptoza, apoptotická tělíska ■ v umělé in vitro kultuře nejsou přítomny fagocyty, aby je pohltily, může proto docházet k tzv. sekundární nekróze VÝZKUM APOPTOZY Výzkum zabývající se problematikou apoptozy je velmi aktuální a rozvíjející se oblastí vědy. Má možnosti široké aplikace jak v základním výzkumu, tak v klinické praxi. Regulace průběhu buněčné smrti patří mezi klíčové funkce nutné pro udržení normálních funkcí organismu. V případě jejího porušení může docházet k nekontrolovatelnému úbytku buněk nebo naopak k jejich akumulaci v organismu (např. při nádorovém onemocnění). Důkladné pochopení mechanismů apoptozy je proto nutným předpokladem pro úspěšnou terapii řady onemocnění. K Apoptóza vs. léčba rakoviny Možnost spustit apoptozu nádorové buňky je základní podmínkou úspěšné protinádorové terapie Řada nádorových buněk je však vůči apoptóze rezistentní Je nutné objasnit mechanismy rezistence a překonat ji (nová léčiva, spuštění alternativních mechanismů, kombinovaná terapie, genová terapie...) Tumor Diagnosis -------^ Biopsy I Apoptotic Responsiveness (gene expression of pS3, bcl-2, bax, etc.; sensitivity to apoptotic stimuli; basal level of apoptosis; etc.) Sensitive to Apoptotic Stimuli Resistant to Apoptotic Stimuli Standard Treatment - {a uťge rachem o > radio, i mmu no-therapy, etc.} Gene Therapy to Restore sensitivity (e.g. p53, ha«, etc.) Shrnutí přednášky i Apoptoza je dominantním způsob buněčné smrti od bezobratlých po člověka i Kaspázy jsou klíčové enzymy zodpovědné za indukci i exekuci apoptózy i Bcl-2 proteiny mají klíčové slovo při rozhodování o životě a smrti buňky i Mitochondrie jsou společným dějištěm těchto procesů i Narušení procesu apoptózy vede k fatálním poruchám homeostazy a rozvoji patologických stavů ■ za pozornost! ■ Děkuji Vám