Automatické imunochemické analyzátory •Automatizace koncem 80. let •Uplatnění pro analyty s nízkou koncentrací (nmol/l, pmol/l) •Využití reakce antigen – protilátka •Značená protilátka (případně antigen) •Většinou heterogenní imunoanalýza (pevný povrch – paramagnetické částice, kulička) •Doba analýzy 15 – 60 min •Detekce s vysokou citlivostí (chemiluminiscence, elektrochemiluminiscence, fluorescence..) • • • • Automatické imunochemické analyzátory •Základní postup: • smíchání komponent • inkubace – vznik kompexu antigen - protilátka • separace (v případě heterogenní imunoanalýzy, • časté využití magnetu) • reakce značenky komplexu antigen – protilátka • s chemickou látkou startující reakci • s detekovatelným efektem • detekce (př. chemiluminiscence) Automatické imunochemické analyzátory • •Jsou opatřeny čtečkou čárového kódu, umožňují tak jednoznačnou identifikace pacienta • •Zpracovávají vzorky v primární zkumavce , práce po pacientech - Random Access • •Požadavky pro jednotlivé analýzy jsou přijímány z laboratorního informačního systému (LIS), analýza pak probíhá automaticky bez zásahu obsluhy • •Jedná se o uzavřené systémy – pouze pro reagencie výrobce přístroje • Automatické imunochemické analyzátory • •Kazetový systém reagencií • •Detekce sraženiny patří ke standardní výbavě • •Cena imunochemických vyšetření poměrně vysoká - řádově mezi 50 – 200 Kč • •Principy jednotlivých firem se liší typem značenky, separace a detekce • Advia Centaur (Bayer) centaur • •Pracuje s diagnostickými soupravami firmy BAYER Diagnostics •Analyzovaným materiálem je sérum/plasma nebo moč. •Pracuje po pacientech při využití principu "RANDOM ACCESS„ - analýzy se provádějí v optimálním časovém rytmu •Stroj se nemusí zastavovat pro doplnění reagencií a vzorků • Advia Centaur (Bayer) • ADVIA Centaur je plně automatizovaný chemiluminiscenční analyzátor pro rutinní i statimová vyšetření. • • Výkon: 240 stanovení za hodinu, první výsledek je po 15 minutách, dále každých 15 sekund • • Princip měření: Systém měří kvantitativní množství světla emitovaného během chemiluminiscenční reakce, pevná fáze jsou paramagnetické částice (Fe2O3), magnetická separace, značkovač je AE (acridinium ester), což je chemiluminiscenční látka, která emituje světlo při oxidaci H2O2v alkalickém prostředí. Reakce probíhá během jedné sekundy a je velice citlivá ( 10-15 ). • • • Advia Centaur (Bayer) • Metody: Thyroidní hormony: FT4, TT4,FT3, TT3, TSH, TU, TSH-3, • neonatal TSH, Anti - TPO • Reproduktivní hormony: Prolactin, FSH, Progesteron, hCG, Estradiol, • Testosteron, LH • Anemie: B12, Foláty, RBC Foláty, Ferritin • Tumor markery: AFP, CEA, PSA, komplex PSA, CA 15-3, • /B27.29/, CA 125, CA 19-9, • TDM: Digitoxin, Carbamazepin, Phenobarbital, • Tobramycin, Digoxin, Genamicin • • Kardio markery: CKMB, cTroponin I, Myoglobin • Alergie: total IgE • Ostatní: Kortizol • Infekce: Rubella G, Rubella M, Toxoplasma G, • Toxoplasma M • • Advia Centaur (Bayer) •Reagencie: Kazetový chlazený zásobník s 30 pozicemi - jsou neustále promíchávány. Automatická kontrola hladiny reagencie • •Vzorky: Lineární podavač s kontinuálním přístupem totéž pro kontroly, standardy • •Kyvety: akrylové, na jedno použití • •Kalibrace: Kalibrační křivka se vkládá do analyzátoru pomocí čtečky čárového kódu načtením. Master křivky z příslušného setu. Advia Centaur (Bayer) • Centaur nabízí optimální produktivitu a výkonnost. Během chodu analyzátoru lze kdykoli doplnit reagencie, špičky, destilovanou vodu, kyvety, vylít odpad, odstranit použité špičky či kyvety, přidávat vzorky, přednostně vložit statim. Analyzátor je 24 hodin připraven k práci. • Advia Centaur (Bayer) • 1 chlazený zásobník reagencií •2 3 reagenční jehly •3 inkubační kotouč s kyvetami •4 luminometr •5 jehla pro dávkování NaOH •6 odsávací jehla pro odpad •7 dodávání kyvet •8 promývací jehly •9 magnety •10 promývání •11 jehla pro dávkování H2O2 •12 jehla pro dávkování pomocných roztoků •13 vzorková jehla •14 chlazený zásobník pomocných reagencií •15 zásobník špiček •16 prostor pro aktuálně dávkované vzorky •17 vstup pro vzorky •18 stojánek pro vzorky •19 vstup pro statim •20 výstup hotového vzorku •21 softwarové ovládání analyzátoru • popis2 Advia Centaur (Bayer) • Vzorek je vložen do stojánku a ten je dán do vstupu pro vzorky. Stisknutím tlačítka START je stojánek posunován v řadě a vsunut do dávkovacího prostoru . Vzorková jehla nabere ze zásobníku pro špičky jednu špičku, nabere vzorek ze zkumavky a nadávkuje jej do kyvety v inkubačním kruhu. Ten je vyhříván na 37oC a neustále se otáčí, čímž umožňuje takt zpracování 15 sekund. Kyveta se vzorkem se otočí k jehle, která event. dávkuje pomocný roztok dále ke 3 reagenčním jehlám, které nezávisle dávkují primární reagencie z primárních zásobníků. Kyveta se poté otočí k promývacím jehlám a promývací stanici. Magnetické částice jsou pomocí magnetů přichyceny na stěnu kyvety, promývací jehly odsají tekutinu z kyvety a magnetické částice jsou promyty destilovanou vodou, která je opět odsáta. Inkubační kruh posune kyvetu k jehle, která dávkuje peroxyd vodíku a poté k výtahu, který dopraví kyvetu do luminometru. Ten má 3 části: fotonásobič, jehlu, která dávkuje NaOH a jehlu, která odsává vše do odpadu. Po přidání NaOH, proběhne chemiluminiscenční reakce. • Luminometr měří emitované světlo v relativních světelných kvantech a ta převádí na výsledky / koncentrace. • popis2 Elescys (Roche) • Analyzátor ELECSYS 2010Ò je plně automatizovaný softwarově řízený systém. •Systém je založen na technologii Elektrochemiluminiscence (ECL), dosahující mimořádné citlivosti, širokého měřícího rozsahu a rychlosti stanovení •Jedná se o benchtop analyzátor s kapacitou 86 testů za hodinu. •Operační systém je založen na vkládání dat prostřednictvím unikátního dvourozměrného čárového kódu . E2010 Elescys (Roche) • •ELECSYS 2010Ò je uzavřený systém a používá výhradně systémové reagencie, kalibrátory a roztoky firmy Roche • •Elecsys 2010 se vyrábí ve dvou variantách-Disc a Rack • •Reagenční disk obsahuje 18 pozic pro reagenční soupravy, předzpracující reagencie a diluenty - najednou může být založeno maximálně 15 různých metod v jednotlivých pozicích Elescys (Roche) • Dávkování vzorků a reagencií • přístroj je vybaven funkcí detekce hladiny, ale i detekce případné sraženiny či pěny •promíchávání magnetických mikročástic zajišťuje přesnost a integritu dávkování vzorků a reagencií •jednorázové špičky - minimalizují kontaminace •3 zásobníky špiček po 120 ks a 3 zásobníky cupů Elescys (Roche) • •Inkubační jednotka 37 ·C ± 0,5 ·C • • Zde probíhá vlastní imunochemická reakce mezi vzorkem a reagenciemi • •Délka inkubace – 9 , 18 nebo 27 minut • •Po ukončení reakce je reagenční cup přemístěn na pozici pro dávkování reakční směsi do měřící cely. Elescys (Roche) •Měřící jednotka • •Je klíčovou jednotkou analyzátoru ElecsysÒ 2010 • •Obsahuje fotonásobič, průtokovou měřící celu, magnetickou jednotku a zesilující obvod • •Teplota je udržována na hodnotě 28 ·C ± 0,5 ·C. Elescys (Roche) •Elektrochemiluminiscence - proces při kterém vysocereaktivní látky reagují na povrchu elektrody a produkují světlo • •Protilátka (příp. antigen) je označena rutenium(II) tris-bipyridylovým komplexem • •K elektrochemiluminiscenci dochází po vložení napětí na elektrodu a reakci s tripropylaminem (TPA) Architekt i 2000 SR, Abbott sejmout0016 ARCHITECT i2000/i2000SR •Systémy ARCHITECT i2000SR/i2000 - plně automatizované systémy poskytující vysoký stupeň flexibility •25 metod, chlazený karusel •Velikost reagenčních souprav 100 a 500 testů •Automatické opakované testování, ředění a reflexe •Detekce kapalin, detekce sraženin •Použití čárových kódů •Možnost integrace s biochemickým analyzátorem ARCHITECT c8000 •Výkon systému je až 200 testů za 1 hodinu (400 pro i4000, 600 pro i6000 a 800 pro i8000) • • Architekt i 2000 SR, Abbott – detail distribučního systému sejmout0014 Architekt i 2000 SR, Abbott - detekce •Technologie ChemiFlex CMIA (chemiluminiscenční imunoanalýza na paramagnetických mikročásticích) •- měření vyzařovaných chemiluminiscenčních emisí v reakční nádobce •Stručný postup: • 1. Změření pozadí po přídavku peroxidu vodíku • 2. Dávkování NaOH (Trigger) do reakční nádobky • 3. Zachycení emitovaného světla a jeho odvedení světlovodem do fotonásobiče (PMT) •Značení patentovaným akridiniem • • Optický systém N:\OKBH\_APPS\SLP_WIN\tmp\HVEZDAKAEI_soubory\image005.jpg Unicel Dxl 800 (Beckman Coulter) • • kompaktní plně automatický uzavřený systém umožňující provádění imunoanalytických stanovení •založen na použití alkalické fosfatázy jako markeru •paramagnetických mikročástic jako nosiče protilátek resp. antigenů •luminiscenční detekci využívající přeměny dioxetanfosfátu na dioxetan •přístroj má vysokou detekční citlivost při širokém koncentračním rozmezí a velmi dobrou přesnost a reprodukovatelnost výsledků unicelldxi Unicel Dxl 800 (Beckman Coulter) •Výkon: Až 400 testů /hodinu Rychlé uvolnění vzorku ze systému - systém si vytváří vlastní interní alikvot. •Jednoduchá obsluha: Minimální „kontakt“ obsluhy s řídícím softwarem. Doplňování reagencií a spotřebního materiálu prostým provedením úkonu. •Nepřetržitý provoz Doplňování reagencií a spotřebního materiálu za plného provozu (bez nutnosti pauzy). Minimální údržba (5min.denně) Unicel Dxl 800 (Beckman Coulter) • • •Kontrola integrity vzorků – detekce sraženiny a bublin •Kompatibilita s biochemickými analyzátory Synchron LX® 20, UniCel® DxC s automatizací – preanalycká linka, Power Processor®, •Široká nabídka testů Axsym (Abbott) •Velmi rozšířený analyzátor •80-120 testů/ hod •Měřící principy – MEIA, FPIA, REA a ICIA •Robustnost, •Dotyková obrazovka •Doba analýzy 15 - 20 min •Technologie zabraňující tvorbě pěny image: AxSYM / AxSYM Plus 5.0 Axsym - procesní centrum Axsym - reakční nádobka Axsym (Abbott) •MEIA (Microparticle Enzyme Immunoassay) •- Enzymová analýza na mikročásticích • •Vzorek se smíchá s reagenciemi, pak se inkubuje •Separace na skleněných vláknech matrice •Přídavek konjugátu s alkalickou fosfatázou •Přídavek substrátu – 4-methylumbelliferylfosfát (MUP) •Hydrolýza MUP s ALP •Fluorescence methylumnelliferonu • Axsym (Abbott) •FPIA – Fluorizační polarizace • •Polarizační fluorescenční záření emitováno z indikátoru, kterým je značený analyt •Hodnota polarizace emitované fluorescence je úměrná rychlosti rotace molekuly •Rotace je úměrná velikosti molekuly – malé analyty rotují rychleji než komplexy •Měří se změna v polarizaci emitované fluorescence po vytvoření komplexu analyt-protilátka Immulite 2000 (DPC) • Účinnost: •Výkon 200 testů •Random Access •24 chlazených reagencií •Automatické opakování "out of range" vzorků • • Maximální integrace: •Primární zkumavky •LIS interface • • Immulite 2000 (DPC) • •Detekce sraženin • •Enzymově zesílená chemiluminiscence • •Stanovení 3. generace • •Dotyková obrazovka • •Dlouhá doba inkubace – 35 nebo 70 minut • • Immulite 2000 (DPC) • •Princip měření: • •Ke konjugátu vázanému na reakční kuličce a značenému alkalickou fosfatázou je přidán luminogenní substrát (adamantyl dioxetan fosfát) • •Dojde k odštěpení fosfátu a ze substrátu vzniká nestabilní anion, při jehož rozkladu dojde k emisi fotonů (chemiluminiscenční reakce) • Immulite 2000 - Chemická reakce substrátu AU3000i (Olympus) •Firma Olympus přichází na trh s imunoanalyzátorem až v roce 2005 • •Pevná fáze – magnetické mikročástice • •Detekce – chemiluminiscence prostřednictvím hydrolýzy AMPPD (derivát dioxetanu) • •Enzym – ALP • •240 testů/ hod • •Detekce sraženiny RAD 120, Radim ~8808604 RAD 120, Radim •Patentovaná technologie nazvaná “Pegasus” • •Pevná fáze - železitan potažený zirkoniem •Částice se silnou vazebnou kapacitou k biologicky aktivním molekulám •Rychlá a efektivní separace • •Fluorescenční detekce při 450 nm RAD 120, Radim - charakteristika •Kontinuální přidávání reagencií a vzorků za chodu •Primarní, sekundarní vzorky, pediatrické kyvety •Produktivita: až 120 testů/hod •Reflex test •Kalibrace – stabilní až 4 týdny •Archív pacientů •Operační systém - Windows Xp •Dotyková obrazovka • • Ukázka obrazovky se statusem inkubátoru, předřeďovacího stojanu a stojanů s kyvetami sejmout0011 Speciální možnost stanovení – autoimunitní markery sejmout0009 Kryptor (Brahms) •Jediný z uvedených analyzátorů využívá pouze homogenní imunoanalýzu •Odpadají promývací a separační kroky •Princip měření: •Neradioaktivní přenos energie z donoru (kryptátová struktura s iontem europia v centru) na akceptor (chem. modif. protein) •Měření signálu emitovaného z imunokomplexu s časovým zpožděním •Měřený vzorek je ozářen dusíkovým laserem, následně donor (kryptát) emituje fluorescenční signál, po něm emituje signál akceptor Chemická analýza moče • •automatizace od 80. let minulého století •přístroje využívají stanovení parametrů pomocí diagnostických proužků (suchá chemie) •semikvantitativní stanovení bilirubinu, urobilinogenu, bílkoviny, ketonů, hemoglobinu, leukocytů, dusitanů, pH, glukosy a specifické hmotnosti •standardizace měřící procedury •namáčení proužků x pipetování na jednotlivé reakční zóny •analýza na principu reflexní fotometrie Chemická analýza moče •Reflexní fotometrie: •zdroj světla - světlo emitující diody •emitují světlo o různých přesně definovaných vlnových délkách – světlo pak dopadá v různých úhlech na reagenční zóny diagnostického proužku •světlo je odráženo na fotodiodu , která slouží jako detektor •intenzita odraženého světla závisí na vybarvení reakční zóny (od bílé zóny se odráží prakticky 100%, čím tmavší zóna, tím víc světla je absorbováno) Chemická analýza moče •Příklady analyzátorů: •pro malé laboratoře - • Miditron Junior, Urisys 1800 (Roche Diagnostic) • Aution Mini (Arkray) • •vysokokapacitní – • Urisys 2400 (Roche Diagnostic) • Aution Max (Arkray) Urisys 2400 (Roche Diagnostic) • •plně automatický močový analyzátor pro střední a velké laboratoře •kazety s 400 vyšetřovacími proužky •snadné vkládání vzorků ve stojanech, posuv po pásovém dopravníku •identifikace vzorků integrovanou čtečkou čárového kódu •pozice pro statimové vzorky •minimální objem vzorku 1.5ml • Průtoková cytometrie •UF 100 (Sysmex) •vzorek moče je automaticky naředěn a obarven a obklopen kapalinou neobsahující žádné buňky •prochází měřící celou, kde je ozářen argonovým laserem •fluorescence a rozptyl světla vznikající po ozáření se detekuje a je specifická pro jednotlivé buňky •výsledky jsou vydány jako počet buněk /ul (erytrocyty, leukocyty atd.) •nevýhoda - jednotlivé částice nemůže obsluha prohlížet Grafický výstup z přístroje UF 100 (Sysmex) IQ 200 (IRIS) – mikroskopická analýza •plně automatizovaná mikroskopická analýza •60 vzorků/hod •možnost prohlížení částic na obrazovce •možnost přeřazení do jiné kategorie •přístroj rozlišuje 12 základních kategorií (např. erytrocyty, leukocyty, epitelie, válce) a umožňuje tvorbu podkategorií •archivace zobrazení IQ 200 (IRIS) •Princip přístroje: •tenká vrstvička vzorku sendvičovitě uzavřená mezi vrstvy suspendované tekutiny se dostává do mikroskopu, který je spojen s digitální kamerou. •kamera s využitím stroboskopu zachytí 500 obrázků z jednoho vzorku - výsledný obraz je digitalizován •jednotlivé obrazy částic jsou izolovány do rámečků – každá částice zvlášť Erytrocyty – zobrazení z IQ 200 Kompletní systém močové analýzy •IQ 200 (Iris) v kombinaci s Aution Max AX-4280 (Arkray) • • zjednodušení provozu • vložíme vzorek a získáme kompletní výsledek IQAX System Front view