Optické metody spektrofotometrie c ν = — λ E = h ν Energie světelného záření je přímo úměrná jeho kmitočtu a nepřímo úměrná jeho vlnové délce I T = — I0 - log I/I0= A Jemná šachovnice I I0 Lambert-Beerův zákon A = ε ℓ c • odchylka absorpčního koeficientu při vysokých koncentracích (>0.01M) vlivem elektrostatických interakcí mezi molekulami • rozptyl světla na částicích přítomných ve vzorku • • fluorescence nebo fosforescence vzorku • nedokonale monochromatické světelné záření • nekoherentní rozptýlené světlo Limitující faktory Lambert-Beerova zákona koncentrace Kalibrační křivka q ověření linearity metody, přístroje q q stanovení neznámé koncentrace Avz cvz = —— x cst Ast cst F = —— Ast spektrofotometr • q q zdroj světelného záření q q monochromátor q q optický systém; štěrbiny, zrcadla, čočky q q absorpční prostředí; kyveta q detekční systém Zdroj světelného záření q wolframová žárovka q halogenová žárovka q xenonová výbojka q rtuťová výbojka q deuteriová lampa q výbojka s dutou katodou Instr_tech_spektrofotom 014a Instr_tech_spektrofotom 019a Instr_tech_spektrofotom 018 Instr_tech_spektrofotom 015a Monochromátor q barevný skleněný filtr q interferenční filtr q optický hranol q difrakční reflexní mřížka Interferenční filtr schema Instr_tech_spektrofotom 002 Instr_tech_ELFO_Reader_mřížka 009 Instr_tech_ELFO_Reader_mřížka 002 ☼ Instr_tech_spektrofotom 008a Instr_tech_spektrofotom 011a Instr_tech_spektrofotom 012 Instr_tech_spektrofotom 005 Absorbční prostředí (kyvety) Instr_tech_spektrofotom 006 Detektor q hradlový selenový fotočlánek q fotodioda q fotonásobič q diodové pole (diode array) Detektor Instrum_tech_foto 034 < ☼ M Vzorek Blank ☼ M Blank Vzorek