OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno KLINICKÁ CYTOGENETIKA SEMINÁŘ Mgr.Hanáková OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno ODDĚLENÍ LÉKAŘSKÉ GENETIKY FN BRNO •ambulance cytogenetické laboratoře laboratoř molekulární genetiky laboratoře klasické cytogenetiky laboratoř prenatální cytogenetiky laboratoř postnatální cytogenetiky laboratoř molekulární cytogenetiky stanovení karyotypu G – pruhování chromosomů metody – FISH, SKY, CGH, MLPA OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno ROZDÍLY MEZI VYŠETŘENÍMI V JEDNOTLIVÝCH TYPECH LABORATOŘÍ OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno SCHEMA LIDSKÉ BUŇKY •buněčné jádro •(DNA + proteiny, RNA) img003 cytoplasma s organelami (DNA je v mitochondriích) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno interf buňka ZMĚNA ORGANIZACE GENETICKÉHO MATERIÁLU BĚHEM BUNĚČNÉHO CYKLU SOMATICKÝCH BUNĚK mitóza (metafáze) chromosomy = spiralizované molekuly DNA 46 chromosomů lidí s normálním karyotypem jádro v interfázi – despiralizované molekuly DNA (různé stupně spiralizace) mitóza OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno MOŽNOSTI VYŠETŘENÍ GENETICKÉHO MATERIÁLU (v různých typech laboratoří) •vyšetření chromosomů • – metodami klasické cytogenetiky • (G-pruhování chromosomů) • vyšetření celého karyotypu (všech chromosomů) • rozlišovací schopnost nejnižší (do10 Mb) • •vyšetření chromosomů, interfázních • jader i izolované DNA • - metodami molekulární cytogenetiky • (vyšetření pomocí fluorescenčně značených sond, PCR) • vyšetření celého karyotypu • vyšetření konkrétních oblastí • rozlišovací schopnost vyšší (až po rozdíly v jednotlivých • nukleotidech – závisí na konkrétní metodě) • •vyšetření izolované DNA • - metody molekulární genetiky • rozlišovací schopnost nejvyšší (rozdíly v sekvenci DNA) 12-8 Zemna tel 11 DNA+ +21 fish dvoušroubovice DNA chromosom s fluorescenčně značenými sondami (vlevo), interfázní jádro (vpravo) chromosom s G-pruhy OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VSTUPNÍ MATERIÁLY K VYŠETŘENÍ •postnatální materiály: periferní krev •prenatální materiály: plodová voda, choriové klky, • krev plodu, kůže potracených plodů • - laboratoře klasické cytogenetiky – specializované na konkrétní typ vstupních materiálů – odlišné kultivační postupy - laboratoře molekulární cytogenetiky a molekulární genetiky – vyšetřují genetický materiál ze všech typů vstupních materiálů OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VYŠETŘENÍ CHROMOSOMŮ vyšetření v laboratořích klasické (postnatální a prenatální) cytogenetiky a molekulární cytogenetiky OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno SPIRALIZACE CHROMOSOMŮ •během buněčného cyklu •se chromatin nachází •v různých fázích spiralizace •(v interfázi nízký stupeň •spiralizace, během mitózy •postupná kondenzace, •maximální v metafázi •mitózy) • spiral DNA OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno CHROMOSOMY V PRAXI • dvouchromatidový metafázní chromosom • schema chromosomu chromosom s G- pruhy 12-8 zlomy1 img001 chromosom obarvený po celé délce q dl ram text p kr ram text centrom text sest chromatidy text OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY zpracování suspenze • vykapání suspenze na podložní sklíčka přednáška 090 kapání2 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY pruhování chromosomů • pruhování chromosomů přednáška 022 přednáška 066 přednáška 065 přednáška 069 1 – inkubace preparátu v roztoku trypsinu (dochází k natrávení chromosomových proteinů) 3 – oplach ve vodě (C) A B C 2 – oplach preparátu v Sörensenově fosfátovém pufru (A), barvení barvivem Giemsa- Romanowski (B) 4 – sušení sklíček na sušící plotýnce OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY hodnocení •chromosomy s G-pruhy hodnotíme ve světelném mikroskopu •zdroj světla - viditelná část spektra (halogenová žárovka) • (stanovení karyotypu) kongo4 přednáška 038 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY hodnocení zvětšení přibližně 1000x dlouhý2 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno přednáška 059 METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY hodnocení •světelný mikroskop •s CCD kamerou •napojený na počítač přednáška 054 přednáška 056 ke třídění chromosomů a sestavení karyotypu lze využít počítačového programu Lucia OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY zpracování suspenze • vykapání suspenze na mokrá podložní sklíčka (pro některá vyšetření (FISH)) přednáška 090 kapání2 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY MOLEKULÁRNÍ CYTOGENETIKY hodnocení •chromosomy fluorescenčně značené hodnotíme ve fluorescenčním •mikroskopu, zdroj světla - krátkovlnná část spektra (např. rtuťová •výbojka) zdroj krátkovlnného vysokoenergetického záření speciální filtry OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno CHROMOSOMY V PRAXI karyotyp •soubor chromosomů jedince nebo buňky, označujeme počet chromosomů, typ • pohlavních chromosomů a případné • aberace (zápis karyotypu např. 46,XY) • •normální lidský karyotyp se skládá • ze 46 chromosomů, z toho 22 párů • autosomů (nepohlavních chromosomů) • a 2 gonosomů (pohlavních chromosomů) • •chromosomový pár je tvořen homologními • chromosomy, z nichž jeden je zděděn • od otce a druhý od matky, nepárové • chromosomy jsou nehomologní (somatické • diploidní buňky) • norm mužský obrázek = utříděný soubor chromosomů jednoho jádra, který vypovídá o chromosomech i v ostatních buňkách pacienta OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno CHROMOSOMY V PRAXI normální mužský karyotyp 46,XY norm mužský OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno CHROMOSOMY V PRAXI normální ženský karyotyp 46,XX norm OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno CHROMOSOMOVÉ ABERACE (CHA) Cílem cytogenetického vyšetření je zjištění přítomnosti / nepřítomnosti patologických chromosomových změn (aberací) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE stanovení karyotypu ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (v souvislosti s onkologickým onemocněním) stanovení karyotypu maligních klonů u obou typů vyšetření je metodou 1. volby vyšetření karyotypu / karyotypu maligních klonů metodou G – pruhování chromosomů. 12-8 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ/ZÍSKANÉ ABERACE vrozené – vznik de novo - poruchy v procesu meiózy (tvorby gamet z primárních oocytů a spermatocytů) - zděděné – potomci rodičů – nositelů balancovaných přestaveb získané u onkologických pacientů – souvisí se vznikem a progresí onkologického onemocnění (poruchy dělení somatických buněk), vyšetřujeme buňky postižené nádorovým bujením Získané v souvislosti s působením mutagenních faktorů prostředí na člověka – práce v riziku (záření, chemické látky), léky, virové infekce - speciální typ vyšetření, bude vysvětleno samostatně v závěru prezentace chromosomy obarvené po celé délce, metoda klasické cytogenetiky zlomy1 12-8 12-8 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno STRUKTURNÍ ZMĚNY (aberace) počet chromosomů většinou zachován, ale změna struktury chromosomů (změna lokalizace, ztráta, nadbytek genetického materiálu) POČETNÍ ZMĚNY (aberace) počet chromosomů v karyotypu jiný než 46 lze spolehlivě odhalit metodou G – pruhování chromosomů lze odhalit metodou G-pruhování chromosomů u větších aberací (v rámci rozlišovací schopnosti metody), menší změny (např. mikrodelece) lze detekovat metodami molekulární cytogenetiky OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno POČETNÍ A STRUKTURNÍ ABERACE vrozené a získané u onkologických pacientů •početní abnormality •polyploidie (hypo – hyper – ploidie) – získané (onko), • vrozené (krátké přežití) •abnormality počtu chromosomů v páru • - aneuploidie (trisomie, monosomie)- vrozené i získané (onko) • •strukturní abnormality • translokace, inverze, delece, duplikace, inzerce, zvláštní • typy chromosomů – vrozené i získané (onko) • amplifikace (mnohonásobné zmnožení onkogenu, detekovatelné cytogeneticky) • – pouze získané (onko) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno ROZDÍLY MEZI VROZENÝMI CHA A ZÍSKANÝMI CHA U ONKOLOGICKÝCH PACIENTŮ Většinu změn lze zařadit do stejných kategorií chromosomových aberací (aneuploidie, translokace….), ale konkrétní změny jsou specifické (jiné) u pacientů, které vyšetřujeme v souvislosti s dědičnými změnami v karyotypu a u onkologických pacientů Rozdílný význam vyšetření vrozených aberací a získaných v souvislosti s onkologickým onemocněním: - u pacientů s poruchami fertility a u pacientů se stigmatizací či zdravotními, vývojovými ad. problémy nás zajímá otázka dědičnosti chromosomových změn (jsou možnosti léčby příznaků onemocnění, ale samotné vrozené chromosomové aberace léčbou nevymizí) - u onkologických pacientů vyšetřujeme buňky postižené nádorovým bujením, v souvislosti s onemocněním vznikají chromosomové změny. Cytogenetické vyšetření pomáhá zpřesnit diagnózu, stanovit prognózu onemocnění a monitorovat úspěšnost léčby (záchrana života pacienta, otázka dědičných genetických predispozic – jiná problematika) – některé translokace – vznik fúzních genů, jejichž produkty mají změněnou funkci podporující nebo způsobující nádorové bujení - některé chromosomové změny souvisejí s horší/ lepší/ střední prognózou OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno KARYOTYP BALANCOVANÝ (genetický materiál nechybí ani nepřebývá) - balancované strukturní přestavby (translokace, inverze) KARYOTYP NEBALANCOVANÝ (část genetického materiálu chybí a část přebývá, event. je možné pouze chybění nebo pouze nadbytek genetického materiálu) - početní imbalance (celé chromosomy) - nebalancované strukturní přestavby (nebalancovaní potomci rodičů s balancovanou přestavbou, delece, duplikace vzniklá de novo) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ / ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE - příklady početní změny – aneuploidie – trisomie, monosomie nebalancovaný karyotyp • Downův syndrom 47,XX,+21 •vrozená chromosomová aberace Down 46,X,-X,+8, t(8;21),t(19;21) onkologický pacient získané chromosomové aberace 46,X,-X,,+8,t(8;21),t(19;21) G-pruhování chromosomů (klasická cytogenetika) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) - příklady strukturní změny – balancované přestavby – např. reciproká translokace balancovaný karyotyp Hitra 1151-06wcp 46,XY,t(5;19)(q15;p12) G-pruhování chromosomů metoda FISH nositelé vrozených balancovaných přestaveb většinou nemají žádné změny fenotypu OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – vztah mezi balancovanou a zděděnou formou nebalancované přestavby – přenos na potomky - reciproká translokace, inverze •translokace a pericentrické inverze u svých nositelů většinou nezpůsobují abnormální fenotyp •vysoké riziko vzniku nebalancovaných gamet – samovolné aborty •narození postižených dětí (nebalancovaný karyotyp - parciální monosomie jednoho a parciální trisomie druhého chromosomu) Možné typy gamet rodiče s balancovanou translokací : - bez přestavby (normální haploidní sada chromosomů) - s balancovanou přestavbou (oba translokované chromosomy) - s nebalancovanou přestavbou (1 část translokace) !!!!!!!!!!!! - OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – např. translokace - derivovaný chromosom vztah mezi balancovaným karyotypem a zděděnou formou nebalancovaného karyotypu • dítě s nebalancovaným • karyotypem • 46,XY,der(21)t(16;21)mat •nebalancovaný karyotyp (parciální monosomie jednoho a parciální trisomie •druhého chromosomu) – potomek rodiče – nositele balancované translokace Škrdlová 16 Škrdlová 21 karyotyp matky 46,XX,t(16;21) chromosomy, které se zúčastnily translokace 21 16 21 Škrdlová 21 OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno •46,XX,t(16;21)(q22;q22.1) 46,XY,der(21)t(16;21)(q22;q22.1)mat • Škrdlová Škrdla rodič potomek VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – např. translokace - derivovaný chromosom vztah mezi balancovaným karyotypem a zděděnou formou nebalancovaného karyotypu G-pruhování chromosomů (klasická cytogenetika) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – např. translokace - derivovaný chromosom vztah mezi balancovaným karyotypem a zděděnou formou nebalancovaného karyotypu 127-06 Škrdlová potvrzení translokace u matky a derivovaného chromosomu u dítěte metodou molekulární cytogenetiky - FISH Skrdla 1 Skrdla 2 matka potomek OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – nebalancované aberace – např. koncová delece de novo • 46,XX,del(5)(p14.1) • syndrom Cri du Chat Křížová G-pruhování chromosomů (klasická cytogenetika) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – nebalancované aberace – např. koncová delece de novo metoda MLPA (metoda molekulární cytogenetiky) – potvrzení nálezu OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – nebalancované aberace mikrodelece (pod rozlišovací schopností vyšetření chromosomů s G – pruhy) vyšetření metodami molekulární cytogenetiky – vyšší rozlišovací schopnost (FISH) vyšetření metodami klasické cytogenetiky G-pruhování chromosomů 46,XX normální karyotyp 46,XX nalezena delece na 22. chromosomu v oblasti 22q11-13 (Di George syndrom – VSV) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) strukturní změny – suspektně balancované přestavby (apparently balanced rearrangement) Přestavby se jeví jako balancované (dostupnými metodami nebyla nalezena ztráta ani nadbytek genetického materiálu), ale pacient je postižen. Možný důvod – vyřazení genu z funkce, ovlivnění regulačních oblastí genu, přítomnost kryptických komplexních chromosomových přestaveb v místech zlomů na chromosomech. OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) komplexní strukturní přestavby 46,XX,der(2)t(2;5),der(5)t(2;5;10),der(10)t(2;10)de novo suspektně balancovaná translokace Le Huyen karyotyp Diskrétní stigmatizace, těžká PMR, neprospívání OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno FISH: WCP 2, 5 899-03upravtom OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno SKY: t(2;5),t(2;5;10),t(2;10) Le Huen Trang SKY OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno HR-CGH: negativní suspektně balancovaná chromosomová přestavba Le Huen Trang HR-CGH OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno der(2)t(2;5) der(5)t(2;5;10) der(10)t(2;10) chrom2 chrom5 chrom10 Le Huyen der(2) Le Huyen der(5) Le Huyen der(10) 2b 5 5 2b 10 10 2b OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno CHROMOSOMOVÉ ABERACE komplexní strukturní přestavby ZÁVĚR •složité (komplexní) chromosomové přestavby nelze vyšetřit • pouze metodami klasické cytogenetiky (G – pruhování • chromosomů), nutné vyšetřit metodami molekulární cytogenetiky (SKY, CGH) 46,XX,der(2)t(2;5),der(5)t(2;5;10),der(10)t(2;10)de novo suspektně balancovaná translokace OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno kalab-CYTO kalab-SKY ONKOCYTOGENETIKA komplexní karyotyp 56,XY,der(X)t(X;5),+der(1),add(2),+3,der(4)t(4;?),+6?,+8, +10,der(11),+der(11)t(11;21)?,+der(11),+der(12)t(7;12) qdp(12p),+17,der(18) smíšený germinální tumor OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS •má – li osoba chromosomovou abnormalitu, bývá většinou aberace přítomna ve všech jejích buňkách •mozaicismus = v těle jedince jsou přítomny 2 nebo více linie buněk s odlišnou chromosomovou konstitucí • - nejčastější výskyt mozaiky gonosomů (poruchy fertility) • 45,X[6]/47,XXX[4]/46,XX[190] • - mozaika autosomů • - mozaika linie s normálním karyotypem s linií s Downovým syndromem • 47,XY,+21[172]/46,XY[28] • - např. linie s normálním karyotypem s linií s monosomií • chromosomu 18 45,XX,-18[10]/46,XX,r(18)[190] – velmi zřídka •ve formě mozaiky mohou být přítomny numerické aberace i strukturní přestavby, početní se vyskytují častěji •nejčastější příčinou mozaicismu je nondisjunkce v časném postzygotickém mitotickém dělení (např. ztráta chromosomu č.21 • z buňky zygoty s trisomií tohoto chromosomu) • OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) DEFINICE MOZAIKY •Jedinec nebo tkáň obsahuje 2 nebo více geneticky odlišných •buněčných klonů pocházejících z jediné zygoty, které vznikly •v důsledku mutace nebo nondisjunkce na různých úrovních •postzygotického dělení (mitotického dělení). • •(Chiméra – buňky jedince pocházejí z více zygot.) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno • 45,X[6]/46,XX[194] •10-30 mitóz hodnotíme z chromosomů s G-pruhy, zbytek vyšetření metodou FISH •z interfázních jader VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS - gonosomy 46,XX 45,X 3% hraniční patologický nález OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS - gonosomy Mozaika X • 45,X[6]/46,XX[194] • vyšetření % zastoupení jednotlivých linií buněk v periferní krvi • pacientky metodou FISH z interfázních jader • (3% zastoupení buněčné linie 45,X) 1 signál (přítomen 1 chromosom X v jádře buňky) 2 signály (přítomny 2 chromosomy X v jádře T-lymfocytu) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – kombinace početní a strukturní aberace Kapitančík1 kap4 buněčná linie 46,X,r(Y)? OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – kombinace početní a strukturní aberace Kapitančík2 1461-08 g foto buněčná linie 46,X,mar(Y)? OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – kombinace početní a strukturní aberace Kapitančík4 1461-08 b foto buněčná linie 46,X,t(Y;9)(p11?;q12?) t(Y;?), přítomna oblast SRY buněčná linie kap1a OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – kombinace početní a strukturní aberace Kapitančík3 1461-08 d foto buněčná linie 45,X OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – kombinace početní a strukturní aberace Karyotyp – chromosomy s G - pruhy: 46,X,r(Y)?[5]/46,X,t(Y;9)(p11.32?;q12?)[4]/45,X[1] Nálezy metodou FISH: Vyšetření na interfázních jádrech: XY [120] X [70] Vyšetření na mitózách: t(Y;?), přítomna oblast SRY [26] X + marker z chromosomu Y, oblast SRY přítomna [17] X [7] složitý zápis i interpretace složitých karyotypů v mozaice OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS - význam •je obtížné posoudit význam nálezu mozaiky • - záleží na typu chromosomové abnormality • - význam má % zastoupení linie s patologickým karyotypem • - % zastoupení jednotlivých buněčných linií může být v různých • tkáních rozdílné (vyšetření z periferní krve, stěru z bukální sliznice • pro ověření a porovnání) • - v mitózách získaných z T-lymfocytů periferní krve lze pozorovat • ztrátu jednoho chromosomu X u žen a chromosomu Y v buňkách • u mužů v souvislosti s věkem • • • OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – prenatální diagnostika •riziko vzniku pseudomozaiky kultivačního původu, potíže při interpretaci (kultivace 2 paralelních kultur, opakovaný odběr) •vyšetření choriových klků – extraembryonální tkáň, častý výskyt mozaikových karyotypů (mitotická nondisjunkce) – diskrepance v nálezech u embrya a extraembryonální tkáni (embryo má kontrolní mechanismy limitující dělení abnormálních buněk, v choriu se abnormální buňky dělí) • • • OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno VROZENÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (VCA) MOZAICISMUS – prenatální diagnostika • • • mozaika CVS – diskrepance v karyotypu embrya a extraembryonální tkáně - vznik mozaiky v blastocystě před diferenciací na embryo a extraembryonální tkáň – mozaika přítomna v obou - vznik mozaiky v pozdějším stádiu v embryu nebo v extraembryonální tkáni (častěji) – mozaika přítomna jen tam, kde vznikla placentární mozaicismus – zdroj falešně pozitivních výsledků OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (u onkologických pacientů) MOZAICISMUS •nádorové buňky tvoří klony •klon - skupina geneticky identických buněk • (v organismu pacienta se může nacházet více buněčných klonů) (stanovení karyotypu maligních klonů) OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (vliv mutagenních faktorů prostředí) •vlivem mutagenních faktorů prostředí dochází na chromosomech ke změnám (zlomy, vznik di-, tricentrických chromosomů, ring chromosomů ad.) • – nacházíme různé změny v různých buňkách • (v každé buňce jinou – nejedná se o mozaiku, ale o náhodné změny) (stanovení % aberantních buněk, hraniční patologie opakovaně 5% ab. b.) DIC DF tmavý zlomy1 dic chrb vyšetření z periferní krve OLG_obloha dnbrno logo-FNB logo-MU Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno chromozomy děkuji za pozornost