Kalibrace, kontroly kvality v
koagulační laboratoři
Kalibrační materiálKalibrační materiál
Komerční kalibrační plazmyKomerční kalibrační plazmy
přesně udaná hladina vyšetřované složkypřesně udaná hladina vyšetřované složky
naváznostnaváznost na mezinárodní referenčnína mezinárodní referenční
materiálymateriály
některé parametry návaznost na „některé parametry návaznost na „poolpool““
normální plazmu (normální plazmu (aPTTaPTT, PT,..), PT,..)
Směsná normální plazma (PT,Směsná normální plazma (PT, aPTTaPTT))
KalibraceKalibrace
1/1/ VyšetřeníVyšetření
Různých ředění kalibrační plazmy s udanou hladinouRůzných ředění kalibrační plazmy s udanou hladinou
parametru(100%, 50 %, 25 %….)parametru(100%, 50 %, 25 %….)
Několika kalibračních materiálů s různou hladinouNěkolika kalibračních materiálů s různou hladinou
parametruparametru
a vynesení naměřených hodnot (čas, A…) pro jednotlivéa vynesení naměřených hodnot (čas, A…) pro jednotlivé
hladiny do grafuhladiny do grafu
ZávislostZávislost linlin//linlin,, linlin/log, log/log,nelineární(polynom)/log, log/log,nelineární(polynom)
2/2/ Vyšetření referenčního času (času normálu) proVyšetření referenčního času (času normálu) pro
výpočet R, INRvýpočet R, INR
3/3/ Načtení kalibraceNačtení kalibrace čarovýmčarovým kodemkodem uu
předkalibrovanýchpředkalibrovaných metodmetod
ŘŘedění kalibrační plazmyedění kalibrační plazmy
AutomatickéAutomatické
naprogramovánonaprogramováno
ManuálníManuální
Typy ředěníTypy ředění
Geometrickou řadouGeometrickou řadou
100 %100 % 100 % plazma (neředěná/ředěná)100 % plazma (neředěná/ředěná)
50 %50 % 1 díl 100% plazmy + 1 díl1 díl 100% plazmy + 1 díl pufrupufru
25 %25 % 1 díl 50 % plazmy + 1 díl1 díl 50 % plazmy + 1 díl pufrupufru
12,5 %12,5 % 1 díl 25 % plazmy + 1 díl1 díl 25 % plazmy + 1 díl pufrupufru
6,25 %6,25 % 1 díl 12,5 % plazmy + 1 díl1 díl 12,5 % plazmy + 1 díl pufrupufru
Typy ředěníTypy ředění
Jiný způsobJiný způsob
1:11:1 100 % plazma (neředěná/ředěná) 100%100 % plazma (neředěná/ředěná) 100%
1:21:2 1díl 100% plazmy + 1 díl1díl 100% plazmy + 1 díl pufrupufru 50 %50 %
1:41:4 1díl 100 % plazmy + 3 díly1díl 100 % plazmy + 3 díly pufrupufru 25 %25 %
1:81:8 1díl 100 % plazmy + 7 dílů1díl 100 % plazmy + 7 dílů pufrupufru 12,5 %12,5 %
1:161:16 1díl 100 % plazmy + 15 dílů1díl 100 % plazmy + 15 dílů pufrupufru 6,25 %6,25 %
Kalibrační křivkaKalibrační křivka
Grafická závislost měřeného parametru na hladiněGrafická závislost měřeného parametru na hladině
vyšetřované složkyvyšetřované složky
měřený parametr (osa y)měřený parametr (osa y)
koagulační čas (s)koagulační čas (s)
absorbanceabsorbance (A, ∆A/min)…..(A, ∆A/min)…..
hladina vyšetřované složky (osa x)hladina vyšetřované složky (osa x)
aktivita (%, IU/ml…)aktivita (%, IU/ml…)
koncentrace (g/l,koncentrace (g/l, µµg/mlg/ml……))
Kalibrační křivkaKalibrační křivka -- požadavkypožadavky
minimálně tříbodováminimálně tříbodová
závisí na typu vyšetřenízávisí na typu vyšetření
musí pokrýt rozsah normálních i patologickýchmusí pokrýt rozsah normálních i patologických
hodnothodnot
linearita kalibrační křivky (ideální r = 1,00)linearita kalibrační křivky (ideální r = 1,00)
pokudpokud naměřená hodnota mimonaměřená hodnota mimo kalibrovanoukalibrovanou
oblast v oblasti s klinickým významemoblast v oblasti s klinickým významem jeje
nezbytné opakovat vyšetření s jiným ředěnímnezbytné opakovat vyšetření s jiným ředěním
(menším nebo větším(menším nebo větším)) vyšetřované plazmyvyšetřované plazmy
Odečtení výsledkuOdečtení výsledku
AutomatickéAutomatické
ManuálníManuální
přímé odečtenípřímé odečtení
stejné ředění kalibrační i vyšetřované plazmystejné ředění kalibrační i vyšetřované plazmy
odečtení + vynásobeníodečtení + vynásobení dilučnímdilučním faktoremfaktorem
odlišné ředění kalibrační a vyšetřované plazmyodlišné ředění kalibrační a vyšetřované plazmy
Provedení kalibraceProvedení kalibrace
při změně šarže setupři změně šarže setu
při změně šarže jednotlivých reagencií, vpři změně šarže jednotlivých reagencií, v
případě že nejsou součástí jednoho setupřípadě že nejsou součástí jednoho setu
po kalibraci musí následovat provedení kontrolpo kalibraci musí následovat provedení kontrol
správnosti v normálním i patologickém rozsahusprávnosti v normálním i patologickém rozsahu
Kalibrace rutinních koagulačníchKalibrace rutinních koagulačních
vyšetření PT, APTT,vyšetření PT, APTT, FbgFbg, AT, D, AT, D--DIDI
Kalibrační materiálKalibrační materiál
Komerční kalibrační plazmyKomerční kalibrační plazmy
Směsná normální plazma (PT, aPTT)Směsná normální plazma (PT, aPTT)
Provedení kalibraceProvedení kalibrace
Při změně šarže setuPři změně šarže setu
Při změně šarže jednotlivých reagencií,Při změně šarže jednotlivých reagencií,
v případě, že nejsou součástí jednoho setuv případě, že nejsou součástí jednoho setu
Kalibrace speciálních koagulačníchKalibrace speciálních koagulačních
vyšetřenívyšetření
Kalibrační materiálKalibrační materiál
Komerční kalibrační plazmyKomerční kalibrační plazmy
Provedení kalibraceProvedení kalibrace
S každou sérií vyšetření vzhledem k omezenéS každou sérií vyšetření vzhledem k omezené
stabilitě reagencií a vysoké citlivostistabilitě reagencií a vysoké citlivosti
Za obzvláště citlivé metody vyžadující kalibraci sZa obzvláště citlivé metody vyžadující kalibraci s
každou sérií jsou považována vyšetření FF VIII, IX,každou sérií jsou považována vyšetření FF VIII, IX,
XI a XII, PC a PSXI a XII, PC a PS
Typy kontrolTypy kontrol
Správnost/pravdivostSprávnost/pravdivost
Přesnost v čase/ reprodukovatelnostPřesnost v čase/ reprodukovatelnost
Přesnost v sérii/ opakovatelnostPřesnost v sérii/ opakovatelnost
Porovnatelnost přístrojů/metodPorovnatelnost přístrojů/metod
Požadavky na kontrolní vzorkyPožadavky na kontrolní vzorky
Měření v jednom běhu současně se vzorkyMěření v jednom běhu současně se vzorky
pacientůpacientů
Analyzované složky musí být dostatečně stabilníAnalyzované složky musí být dostatečně stabilní
Složení co nejvíce podobné vyšetřovanýmSložení co nejvíce podobné vyšetřovaným
vzorkůmvzorkům
Zcela nezávislé na kalibračních materiálechZcela nezávislé na kalibračních materiálech
MateriálMateriál nesmínesmí být použit ke kalibracibýt použit ke kalibraci
analytických metodanalytických metod
Kontrolní vzorkyKontrolní vzorky
Firemní komerční plazmy (Firemní komerční plazmy (lyofilizovanélyofilizované))
V referenčních mezích („normální“V referenčních mezích („normální“ –– N) a mimoN) a mimo
referenční meze (patologickéreferenční meze (patologické –– P)P)
Atestované a neatestovanéAtestované a neatestované
Plazmy připravené laboratoří (čerstvé iPlazmy připravené laboratoří (čerstvé i
zamražené pozamražené po alikvotechalikvotech))
„Normální“ a patologické„Normální“ a patologické
Kontrolní vzorky atestovanéKontrolní vzorky atestované
Atestované (=certifikované) kontrolní materiályAtestované (=certifikované) kontrolní materiály
Mají přesně udanou hladinu měřenéhoMají přesně udanou hladinu měřeného
parametru s udáním povolených odchylekparametru s udáním povolených odchylek
Nutno použít více kontrolních vzorků s různouNutno použít více kontrolních vzorků s různou
hladinou měřeného parametru, aby byl pokrythladinou měřeného parametru, aby byl pokryt
celý měřený rozsahcelý měřený rozsah
Odlišné hladinyOdlišné hladiny nelzenelze získat různým ředěnímzískat různým ředěním
téhož kontrolního materiálu!!!téhož kontrolního materiálu!!!
Kontrolní vzorky neatestovanéKontrolní vzorky neatestované
Neatestované kontrolní materiályNeatestované kontrolní materiály
Komerční kontrolní materiály, kteréKomerční kontrolní materiály, které
Nemají udanou hladinu měřeného parametruNemají udanou hladinu měřeného parametru
Mají uvedeno pouzeMají uvedeno pouze
Parametry, pro které je kontrolní materiál určenParametry, pro které je kontrolní materiál určen
Orientační vymezení hladiny měřenéhoOrientační vymezení hladiny měřeného
parametruparametru
„Normální“ a patologické„Normální“ a patologické
Správnost / pravdivostSprávnost / pravdivost
Vyjadřuje těsnost shody mezi naměřenouVyjadřuje těsnost shody mezi naměřenou
hodnotou a „pravou hodnotou“ udanouhodnotou a „pravou hodnotou“ udanou
výrobcem kontrolního materiáluvýrobcem kontrolního materiálu
Číselným vyjádřením = absolutní chyba (d)Číselným vyjádřením = absolutní chyba (d)
d=d=xxii –– xxss
Správnost / pravdivostSprávnost / pravdivost
Relativní chyba (e)Relativní chyba (e)
100 x d100 x d
e =e = -------------------------------------- (%)(%)
XXss
KoKontrolní materiály s přesně udanou hladinountrolní materiály s přesně udanou hladinou
stanovované složky a s udáním povolenýchstanovované složky a s udáním povolených
odchylek/rozmezíodchylek/rozmezí
Správnost / pravdivostSprávnost / pravdivost
Atestovaný komerční kontrolní materiálAtestovaný komerční kontrolní materiál
Použít minimálně dva nezávislé kontrolní vzorkyPoužít minimálně dva nezávislé kontrolní vzorky
NormálníNormální
PatologickýPatologický
Odchylky/rozmezí uvedené na kontrolníchOdchylky/rozmezí uvedené na kontrolních
materiálech nesmí být překročenymateriálech nesmí být překročeny
Pokud k tomu dojde, je nutné hledat příčinu a aPokud k tomu dojde, je nutné hledat příčinu a a
celý běh analýz včetně analýzy kontrolníhocelý běh analýz včetně analýzy kontrolního
vzorku zopakovatvzorku zopakovat
Správnost / pravdivostSprávnost / pravdivost
Rutinní koagulaceRutinní koagulace
Při změně šarže reagenciePři změně šarže reagencie
Po kalibraciPo kalibraci
1x měsíčně minimálně1x měsíčně minimálně
Speciální koagulaceSpeciální koagulace
Po kalibraciPo kalibraci
S každou sérií vyšetřeníS každou sérií vyšetření
Správnost / pravdivostSprávnost / pravdivost
VyhodnoceníVyhodnocení
Porovnání s deklarovanými hodnotamiPorovnání s deklarovanými hodnotami
Vedení protokolůVedení protokolů
výsledky měřenívýsledky měření
deklarované rozmezídeklarované rozmezí
autorizaceautorizace
schváleníschválení
PřesnostPřesnost
je vyjádřením těsné shody mezi výsledkyje vyjádřením těsné shody mezi výsledky
opakovaných měření téhož vzorkuopakovaných měření téhož vzorku
číselným vyjádřením = směrodatnáčíselným vyjádřením = směrodatná
odchylka(SD) ododchylka(SD) od aritmetaritmet. průměru (x). průměru (x)
ΣΣ((xxii -- x)x)22
SD =SD = √√ ------------------------------
nn--11
PřesnostPřesnost
relativní směrodatná odchylka = variačnírelativní směrodatná odchylka = variační
koeficientkoeficient
SD x 100SD x 100
CV =CV = ---------------------- (%)(%)
xx
Stanovení přesnostiStanovení přesnosti
Opakovaná analýza stejného kontrolníhoOpakovaná analýza stejného kontrolního
materiálu, který nemusí mít udaný obsahmateriálu, který nemusí mít udaný obsah
stanovovaných složek (neatestovaný kontrolnístanovovaných složek (neatestovaný kontrolní
materiál)materiál)
zajištění dostatečného množství kontrolníchzajištění dostatečného množství kontrolních
vzorkůvzorků
zajištění stability vyšetřovaných parametrůzajištění stability vyšetřovaných parametrů
Stanovení přesnostiStanovení přesnosti
Přesnost metody v sériiPřesnost metody v sérii
je to souhlas mezi výsledky opakované analýzyje to souhlas mezi výsledky opakované analýzy
téhož kontrolního vzorku, analyzovanýchtéhož kontrolního vzorku, analyzovaných
opakovaně (opakovaně (napřnapř. 10x) stejnou metodou ve. 10x) stejnou metodou ve
stejném časestejném čase
Přesnost metody v časePřesnost metody v čase
liší se od přesnosti v sérii tím, že se kontrolníliší se od přesnosti v sérii tím, že se kontrolní
vzorek analyzuje každý den v provozníchvzorek analyzuje každý den v provozních
podmínkách současně s ostatními vzorkypodmínkách současně s ostatními vzorky
Přesnost v čase/reprodukovatelnostPřesnost v čase/reprodukovatelnost
Rutinní koagulaceRutinní koagulace (PT,APTT,(PT,APTT,FbgFbg,TČ,AT),TČ,AT)
Kontrolní materiálKontrolní materiál
komerční neatestovanýkomerční neatestovaný
připravený laboratořípřipravený laboratoří
Vhodné dva kontrolní vzorkyVhodné dva kontrolní vzorky
NN
PP
Provádět minimálně 1Provádět minimálně 1--2x denně2x denně
Před zahájením denního provozu (a před pohotovostníPřed zahájením denního provozu (a před pohotovostní
službou)službou)
Pro každý parametrPro každý parametr
Pro každý přístroj, který je v provozuPro každý přístroj, který je v provozu
Přesnost v časePřesnost v čase -- vyhodnocenívyhodnocení
Statistické programyStatistické programy
koagulační automatkoagulační automat
LISLIS
samostatnésamostatné
výstup navýstup na LeveyLevey -- JenninsonovyJenninsonovy grafygrafy
WestgardovaWestgardova pravidlapravidla
není běžnénení běžné
Přesnost v časePřesnost v čase -- vyhodnocenívyhodnocení
Nutno provádět průběžněNutno provádět průběžně
Průměr, SD, CV (%CV doporučené neboPrůměr, SD, CV (%CV doporučené nebo
vlastní)vlastní)
kontrolní rozmezí (průměrkontrolní rozmezí (průměr ±± 2 SD)2 SD)
varovné rozmezí maxim.(průměrvarovné rozmezí maxim.(průměr ±± 3 SD)3 SD)
Přesnost v časePřesnost v čase -- vyhodnocenívyhodnocení
Pokud výsledek mimo povolené mezePokud výsledek mimo povolené meze
musí se najít příčina a celou sérii včetně kontrolmusí se najít příčina a celou sérii včetně kontrol
zopakovatzopakovat
Pokud výsledky na jedné straně od x neboPokud výsledky na jedné straně od x nebo
vykazují stoupající nebo klesající trend, velkývykazují stoupající nebo klesající trend, velký
rozdíl oproti předchozímu výsledku...rozdíl oproti předchozímu výsledku...
je nutno analytickou metodu opravitje nutno analytickou metodu opravit
Přesnost v čase/reprodukovatelnostPřesnost v čase/reprodukovatelnost
Vedení protokolůVedení protokolů
průběžněprůběžně
výsledky měření, kontrolní a varovnévýsledky měření, kontrolní a varovné
rozmezí,CV, autorizace, schválenírozmezí,CV, autorizace, schválení
závěr (šarže kontroly, reagencie, kalibrace)závěr (šarže kontroly, reagencie, kalibrace)
CV, (počet překročení kontrolního rozmezí)CV, (počet překročení kontrolního rozmezí)
Primární dokumentacePrimární dokumentace
tisk výsledků kontrol, grafůtisk výsledků kontrol, grafů
Kontroly přesnosti pro ATKontroly přesnosti pro AT -- NN
54,4
69,4
84,4
99,4
114,4
129,4
144,4
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Kontroly přesnosti ATKontroly přesnosti AT -- PP
15,1
31,7
48,3
64,9
81,5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Přesnost v čase/reprodukovatelnostPřesnost v čase/reprodukovatelnost
Speciální koagulaceSpeciální koagulace
Kontrolní materiálKontrolní materiál
Komerční atestovanýKomerční atestovaný
V případě více měření v rámci kontroly správnostiV případě více měření v rámci kontroly správnosti
Připravený laboratoříPřipravený laboratoří
Provádět s každou sérií vyšetřeníProvádět s každou sérií vyšetření
VyhodnoceníVyhodnocení
Průměr, SD, CV (%CV doporučené nebo vlastní)Průměr, SD, CV (%CV doporučené nebo vlastní)
kontrolní rozmezí (průměrkontrolní rozmezí (průměr ±± 2 SD)2 SD)
Přesnost v sérii /opakovatelnostPřesnost v sérii /opakovatelnost
Nepatří mezi běžnéNepatří mezi běžné kontroly v koagulacikontroly v koagulaci
Provádí seProvádí se
Při validaci přístrojePři validaci přístroje
Pro ověření správné funkce přístrojePro ověření správné funkce přístroje
Při zavádění nových metodPři zavádění nových metod
Počet měření 5Počet měření 5 –– 1010
VyhodnoceníVyhodnocení
Průměr, SD, CV (%CV doporučené)Průměr, SD, CV (%CV doporučené)
Porovnatelnost přístrojůPorovnatelnost přístrojů
Rutinní koagulaceRutinní koagulace (PT,APTT,(PT,APTT,FbgFbg,AT),AT)
Čerstvě odebrané vzorky pro dané parametryČerstvě odebrané vzorky pro dané parametry
(N a P)(N a P)
Vzorky změřit 1x denně na všechVzorky změřit 1x denně na všech
přístrojích,které jsou v provozupřístrojích,které jsou v provozu
Komerční atestované kontroly (N a P)Komerční atestované kontroly (N a P)
Vzorky změřit na všech přístrojíchVzorky změřit na všech přístrojích
Po kalibraciPo kalibraci
Při změně šarže reagenciePři změně šarže reagencie
VyhodnoceníVyhodnocení
CV (%CV doporučené nebo vlastní)CV (%CV doporučené nebo vlastní)
Porovnatelnost přístrojůPorovnatelnost přístrojů
Speciální koagulaceSpeciální koagulace
Běžně se nedělá vzhledem k prováděníBěžně se nedělá vzhledem k provádění
kalibrace s každou sérií vyšetřeníkalibrace s každou sérií vyšetření
Neprovádí se u všech speciálních testůNeprovádí se u všech speciálních testů
VyhodnoceníVyhodnocení
CV (%CV doporučené nebo vlastní)CV (%CV doporučené nebo vlastní)