Kultivace hematopoetických
buňek
L. Bourková, OKH FN Brno
Multipotent /
Prekurzopry
Progenitory
Prekurzory
Hematopoetické kmenové buňky
 v kostní dřeni i periferní krvi ve velmi nízké koncentraci
 pro svoji podobnost s lymfocyty se nedají morfologicky
rozpoznat.
 morfologicky jsou rozpoznatelné až jejich další vývojová
stádia - myeloblast, proerytroblast, megakaryoblast…..
 kmenové buňky se stanovují např. imunologicky pomocí
povrchových antigenů a nebo funkčními testy, na
základě proliferační aktivity
– sebeobnova: schopnost buňky dát buněčným dělením
vznik dvěma dceřiným elementům, které jsou
identické s buňkou mateřskou
– diferenciace: schopnost buňky vyvíjet se dále ve
funkčně i morfologicky odlišná vyzrálejší vývojová
stádia
Základní pojmy
 Totipotentní kmenové buňky: jsou schopné vytvořit jakýkoliv
typ buňky, který se v organismu vyskytuje. Každá totipotentní buňka
obsahuje kompletní gentickou informaci pro celý organismus a má
jedinečnou schopnost diferenciace.
 Pluripotentní kmenové buňky: jsou schopny diferenciace
(dělení) do mnoha různých typů. Speciálním případem pluripotence
je multipotence, kde je pluripotentní schopnost kmenové buňky
omezena na určitý typ tkáně (případně na určitý orgán).
 Multipotentní kmenové buňky: jsou schopny diferenciace
(dělení) do mnoha typů buněk, ale pouze v rámci jednoho typu
tkáně (resp. orgánu). Např. hematopoetická kmenová buňka, která
se dále vyvíjí přes progenitorové a prekurzorové buňky k vyzrálým
stádiím.
– progenitorové b.: CFU-GEMM (colony-forming unit-granulocyte, erythrocyte,
-monocyte, and –megakaryocyte), CFU-GM (colonyforming
units-granulocyte/macrophage), BFU-E (burst-forming
units erythrocyte)
– prekurzorové b.: myeloblast, proerytroblast, megakaryoblast…..
Metoda tkáňových kultivací
 Princip metodiky:
Kultivační metoda sleduje funkční schopnosti krvetvorných buněk,
které odpovídají na růstové faktory v kultivační půdě tvorbou
kolonií.
 Kultivační prostředí:
Kultivační média představují sterilní vybalancované chemické
prostředí, z něhož buňky čerpají složky pro svůj metabolismus.
Kultivační atmosféra má 100% vlhkost a 5% obsah CO2
v inkubátoru.
 Schéma metodiky:
mononukleární buňky + médium + atmosféra (14 dnů)  kolonie
 Hodnocení:
mikroskopem
kolonie vznikají z progenitorových buněk
kolonie CFU-GM obsahují minimálně 40 buněk
kolonie BFU-E obvykle více jak 200 erytroblastů
 Využití:
diagnostika (hematologické malignity), monitorování léčby, k
terapii…
Pracovní prostředí
Tkáňové kultivace
BFU-E kolonie
CFU-GM kolonie
CFU-GM kolonie