Nátěr krve na skle
Bourková L., OKH FN Brno
Zhotovení nátěru krve
• potřeby:
podložní sklíčko, roztírací sklíško
• roztírací sklíčko položit před kapku krve na
podložním skle pod úhlem cca 30 - 40° (nikdy
ne do kapky krve); po doteku krve a roztíracího
skla se krev rozlije podél hrany skla; po té
rychle krev rozetřít po podložním skle
• sílu nátěru zvažovat – čím větší úhel, tím
silnější nátěr
• nátěr musí být: rovnoměrný, přiměřeně tenký,
dlouhé okraje musí být rovné, na konci
přechází „do ztracena“ (alespoň 1 – 2 cm)
Provedení nátěru
Barvení
• Důležité: správné provedení, zaschnutí, fixování,
barvení nátěrů
• Zamezení vlhkosti v roztocích a na nátěru (již 1%
příměs vody v metanolu může znemožnit správnou
interpretaci vyšetření, zvláště morfologie erytrocytů)
• Nejběžnější metoda barvení:
May-Grűnwald / Giemsa-Romanowski
„MGG“(Papenheimova metoda) - nejpoužívanější metoda,
ve všech směrech zcela uspokojující
• Další metody např.:
Wrightova (jednoduchá), Leishmanova (rychlá,
orientační)
• Správný immerzní olej
• kontroly nabarvených nátěrů
Barvení - MGG
• Základní složky barvení:
– fixace: metanol + barviva
– barvení: metanol +glycerin + fosfátové pufry +
barviva
• pH 6,8 – 7,0
• Kationtové (zásadité) barvy, jako je např. azur B, se váží
na aniontovou složku a dávají modrošedá zbarvení
nukleových kyselin (DNA nebo RNA), nukleoproteinů,
granulí bazofilů a slabě barví granula neutrofilů.
• Aniontové (kyselé) barvy, jako je např. eosin Y, se váží na
kationtovou složku proteinů a dávají oranžovočervená
zbarvení hemoglobinu a eozinofilním granulím
• Celkové barvení se skládá z řady různých
kombinací těchto barev, které nakonec dávají
výsledný vzhled nabarveného nátěru.
Hodnocení
• komplexně celý nátěr (WBC, RBC, PLT)
• v rovnoměrně rozetřeném místě
• zvětšení 1000x, 200x (100x)
• zbarvení nátěru
• zbarvení buněk
• hodnotit buňku v kontextu s celým nátěrem
• hodnotit periferní nátěr v souvislosti s přístrojovým KO
• minimální běžný počet hodnocených buněk:
– periferní krev: 100 leukocytů
– kostní dřeň: 250 jaderných elementů
• vydávané výsledky pro nátěr periferní krve i KD: [%]
Hodnocení nátěru
Místa pro hodnocení nátěrů
špatné místo na sklesprávné místo na skle
Leukocyty
• Velikost buněk: malé, střední, velké
• Charakteristika jádra: jaderné stíny, holá jádra, poměr
jádra k cytoplazmě, jaderný chromatin, jadérka
(přítomnost, nepřítomnost, počet, velikost), členitost a tvar
jádra (variantní lymfocyty, reaktivní lymfocyty), velikost
jádra (tyče, metamyelocyty), hypo-,hyper segmentace NE
• Charakteristika cytoplazmy: granulace, bez granulace,
specifická, nespecifická, toxická granulace, barevný odstín
cytoplazmy (zralost buňky, reaktivní lymfocyty),
vakuolizace, barevné inkluze, Auerovy tyče, okraje
cytoplazmy (členité, hladké, vlasaté)
Velké granulované lymfocyty – LGL (large granular
lymphocytes)
Poznámka
Granulocytární elementy (segmentované leukocyty):
• primární granulace (nespecifická):
- od promyelocytu až po segment
• azurofilní
• sekundární granulace (specifická):
- od myelocytu až po segment
• neutrofily
• eozinofily
• bazofily
Erytrocyty
• Velikost (MCV, RDW, distribuční křivka)
• Barevné odchylky (MCH, MCHC)
• Tvarové odchylky
• Buněčné inkluze
• Shluky
• Rozložení
• Jaderné elementy (NRBC)
Trombocyty
• Velikost (MPV, PDW, distribuční křivka)
• Granulace
• Shluky (satelitóza)
• Fragmenty (RBC, WBC)
• MGK, holá jádra MGK
• Kontrola mikroskopicky pod 100x109/L
• PLT mikroskopicky:
počet PLT na 1000 RBC * RBC(1012/L)
• Odběr do hořčíku (citrátu)
• Imunologické vyšetření PLT s CD61