Stanovení celkového cholesterolu v séru a krvi

Úvod

Problematika poruch lipidového metabolismu se v posledních letech dostává do popředí zájmu
především v souvislosti s prevencí a léčbou kardiovaskulárních onemocnění.

Základní lipidové vyšetření zahrnuje analýzu triacylglycerolů, celkového cholesterolu,
HDL-cholesterolu a z nich vypočtené koncentrace LDL-cholesterolu a non-HDL cholesterolu. Vyšetření
je doplněno chylomikronovým testem a někdy analýzou fosfolipidů a elektroforézou lipoproteinů.


Cholesterol Oxidase Reaction Enzymové stanovení cholesterolu v séru

Textové pole: Princip Estery cholesterolu jsou štěpeny cholesterolesterázou na cholesterol a mastné
kyseliny. Cholesterol je pak dalším enzymem cholesteroloxidázou oxidován na cholestenon. Současně
vzniká peroxid vodíku, který za katalýzy peroxidázou reaguje s 4-aminofenazonem a fenolem na
červeně zbarvený produkt. Spřažení reakcí, při kterých vzniká peroxid vodíku s následnou
peroxidázovou reakcí s aminofenazonem je jeden z častých principů stavovení analytů v klinické
biochemii.



Textové pole: H2O2 Textové pole: peroxidasa Textové pole: +

Materiál:               Set CHOL firmy Roche Diagnostics^*: Činidlo-cholesterol (obsahující Tris
pufr 100 mmol/l, pH 7,7; Mg^2+ 50 mmol/l; 4‑aminofenazon 1 mmol/l; cholát sodný 10 mmol/l; fenol 6
mmol/l; 3,4-dichlorfenol 4 mmol/l, polyglykolether 0,3%; cholesterolesteráza ³ 6,67mkat/l;
cholesteroloxidáza ³ 4,17 mkat/l; peroxidáza ³ 3,33mkat/l). Kalibrátor-cholesterol (koncentrace je
uvedena na lahvičce), vzorky krevních sér, sada zkumavek, mikropipetory 20 ml a 2–5 ml.
Spektrofotometr Spekol 1300 a software WinAspect, nebo Helios Delta a software VisionLite Fixed.
^*Alternativně mohou být použity testy firmy BioVendor, Pliva-Lachema nebo Human, pak složení
činidla je odlišné.

Vysvětlete význam všech reagencií


Hodnocení

Podle doporučení pro diagnostiku a léčbu hyperlipoproteinemií v dospělosti, vypracované výborem
České společnosti pro aterosklerózu, má být provedeno vyšetření cholesterolu jedenkrát za pět let u
všech dospělých osob mezi 20–75 lety při preventivní prohlídce. Je-li koncentrace celkového
cholesterolu < 5 mmol/l, má být provedena další kontrola cholesterolu za 5 let.

Zjištěné hodnoty koncentrace cholesterolu > 5 mmol/l by měly být důvodem k dalšímu vyšetření
metabolismu lipidů, zvláště rozložení cholesterolu v lipoproteinových frakcích. Zvýšená koncentrace
cholesterolu se často nachází u diabetiků nebo u hypotyreózy, snížená např. u pokročilých jaterních
cirhóz nebo hypertyreózy.