Glukóza
Ing. Martina Podborská, Ph.D.
OKB FN Brno
Zpracováno s pomocí přednášek RNDr. Petra Breineka
Školní rok 2015/2016
 FPG (plazmatická
koncentrace glukózy
v žilní krvi nalačno)
2
Glukóza – klinický význam
 Koncentrace FPG (stanovení glykémie) je hlavní
nástrojem pro:
 určení diagnózy diabetu mellitu (DM)
 vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM
 Analyzovaný materiál:
 B, S, P, U, CSF, výpotek
 Preanalytické požadavky:
 pro diagnostiku diabetu mellitu je nevhodný odběr krve bez
antiglykolitických přísad; ČSKB a Čs. diabetol. společnost
(2005) doporučují:
 odběr krve nalačno (min. 8h lačnění)
 stanovení v plazmě žilní krve (EDTA + NaF)
 oddělení plazmy od krevních elementů do 60 min po
odběru
 při sběru moče uchovávat moč do doby analýzy při 4-80C, je
třeba zabránit bakteriální kontaminaci
3
Glukóza
 Odběr krve na stanovení glukózy:
 Žilní krev:
pro diagnostiku DM a pro případ, že jsou potřebná
další laboratorní vyšetření
 Kapilární krev:
pro kontrolu léčby, ne pro diagnostiku
4
Glukóza
 Referenční meze:
S, P-Glukóza: 3,9 – 5,6 mmol/l
CSF-Glukóza: 2,8 – 3,9 mmol/l
dU-Glukóza: 0 - 1,7 mmol/24h
P-Glukóza (oGTT nalačno): 3,9 – 5,6 mmol/l
P-Glukóza (oGTT po 2h): 3,9 – 7,8 mmol/l
 Referenční metoda: ID-GC/MS (izotopová diluce a
stanovení GC s MS)
 Certifikovaný referenční materiál: SRM 909 NIST,
NIST/SRM 917, NIST/SRM 965 (USA)
5
Glukóza
 Diabetes mellitus 1. typu (IDDM, závislý na inzulinu):
 je způsoben absolutním nedostatkem inzulinu v důsledku
zániku b-buněk pankreatu
 Diabetes mellitus 2. typu (NIDDM, nezávislý na inzulinu):
 je způsoben relativním nedostatkem inzulinu – sníženou
citlivostí tkání k inzulinu, hladina inzulinu přitom může být
normální, zvýšená nebo snížená
 Gestační diabetes mellitus:
 vzniká v průběhu těhotenství, po porodu většinou vymizí
 Ostatní specifické typy diabetu mellitu:
 diabetes doprovází jiná onemocnění, např. endokrinní,
genetická, zánětlivá nebo vyvolané některými léky
6
Diabetes mellitus a jeho typy
 Klinické symptomy:
P-Glu (náhodný odběr): ≥ 11,1 mmol/l
P-Glu (nalačno): ≥ 7,0 mmol/l
P-Glu (oGTT) po 2h: ≥ 11,1 mmol/l
 opakované vyšetření
 Rozhodovací meze:
* při diagnostice gestačního diabetu
7
Diagnostická kritéria diabetu mellitu
FPG (mmol/l) Interpretace
< 5,6 (< 5,1)* Vyloučení diabetu mellitu
5,6 – 6,9 Zvýšená FPG (IFG, prediabetes)
˃ 7,0 Diabetes Mellitus
8
Doporučení ČSKB a ČDS
9
Algoritmus pro diagnostiku DM u dospělých
 Doporučení ČDS a ČSKB; vydáno v únoru 2012, aktuální korekce 18.2.2015
10
Požadavky na analytickou kvalitu měření
Mezilehlá preciznost CV < 2,5 %
Pravdivost (Bias) B < 2,0 %
Celková chyba TE < 3,1 %
Metrologická návaznost referenční metoda
Intraindividuální biologická
variabilita
4,9
Preciznost odvozená
z biologických variabilit
2,5
Interindividuální biologická
variabilita
6,9
Pravdivost odvozená z
biologických variabilit
2,2
Celková biologická variabilita 8,9
Celková chyba odvozená
z biologických variabilit
6,9
 www.westgard.cz
 Doporučení ČDS a ČSKB; vydáno v únoru 2012, aktuální korekce 18.2.2015
11
Glukóza – metody stanovení
1. Referenční metody:
a) ID-GC/MS a ID-LC/MS
 standardní přidání značené glukózy C14 (izotopová
diluce) do analyzovaného vzorku, následné rozdělení
plynovou nebo kapalinovou chromatografií a
stanovení glukózy hmotnostní spektrometrií
12
Glukóza – metody stanovení
2. Doporučené rutinní metody – enzymové stanovení:
2.1 Metoda s hexokinázou a glukóza-6-fosfát (HK/G6PD):
glukóza + ATP glukóza-6-fosfát + ADP (HK)
glukóza-6-fosfát + NADP+ glukono-6-fosfát + NADPH
(G6PD)
 vzrůst absorbance NADPH je přímo úměrný koncentraci
glukózy ve vzorku a měří se fotometricky při 340 nm
 první reakce katalyzovaná hexokinázou není specifická pro glukózu (reagují všechny
hexózy), ale specifita stanovení je získaná druhou reakcí, při která se stanovuje pouze
fosforylovaná glukóza
13
Glukóza – metody stanovení
2. Doporučené rutinní metody – enzymové stanovení:
2.2 Metoda s glukózaoxidázou a peroxidázou (GOD/PAP):
b-D-glukóza + O2 b-D-glukonolakton + H2O2 (GOD)
H2O2 + 4-aminoantipyrin + fenol chinonmonoiminové
barvivo + H2O (POD)
 vzrůst absorbance barevného produktu je přímo úměrný
koncentraci glukózy ve vzorku a měří se spektrofotometricky
při 340 nm
 první reakce je specifická, reakce na stanovení peroxidu vodíku však může být více či
méně ovlivněna interferujícími látkami
14
Glukóza – metody stanovení
3. Elektrochemické metody:
 Clarkova kyslíková elektroda
 Biosenzory s membránou se zakotvenou GOD
 Glukometry (POCT)
 automatický stolní analyzátor ke
stanovení glukózy a laktátu (Biosen) lanceta
 glukometry
15
Glukóza – metody stanovení
 Princip: přímé elektrochemické stanovení
1. glukóza + O2 glukonolakton + H2O2
(glukózaoxidáza)
2. elektrochemická redukce H2O2 na H2O
3. vzniklý elektrický proud nebo náboj je úměrný
koncentraci glukózy (amperometrické nebo
coulometrické stanovení)
H2O2 2H+ + O2 + 2e- reakce na anodě
2e- + 2H+ + ½ O2 H2O reakce na katodě
Pt
napětí
16
Glukóza – metody stanovení
 Glukometry:
 jsou určeny k selfmonitoringu pacientů s DM, dále pro
ambulantní měření koncentrace glukózy
 použití glukometrů k dg. DM se nedoporučuje
 proti referenční metodě nesmí chyba měření překročit:
± 0,83 mmol/l pro koncentrace < 5,6 mmol/l
± 15% pro koncentrace ≥ 5,6 mmol/l
 kontroly osobních glukometrů srovnáním s měřením v laboratoři se
doporučuje provádět v pravidelných časových intervalech minimálně
jednou ročně
17
Glukóza v moči
 glykosurie: stanovení ztráty glukózy močí
 pro diagnostiku DM není stanovení doporučeno
 má jen orientační význam
 prakticky byla nahrazena selfmonitoringem glykémií
18
Glukózový toleranční test (oGTT)
 po lačnění (10-14h) je provedeno stanovení glykémie v žilní
plazmě a poté je podáno 75 g glukózy ve 300 ml vody
 po 2h fyzického klidu je proveden další odběr krve ke stanovení
glykémie v žilní plazmě
 u gestačního oGTT: odběr krve před zátěží, 1h po zátěži
a 2h po zátěži
 vyhodnocení oGTT:
Glykémie v žilní plazmě za 2h Klinický závěr
< 7,8 mmol/l Diabetes mellitus vyloučen
7,8 – 11,0 mmol/l Porušená glukózová tolerance
> 11,0 mmol/l Diabetes mellitus potvrzen
19
Glukózový toleranční test (oGTT)
 používá se k potvrzení diagnózy DM v případech:
 stavy IFG (prediabetu) s hodnotami FPG 5,6 až 7,0
mmol/l
 těhotenství u skupin se zvýšeným rizikem vzniku DM
 jedinci se zvýšeným rizikem vzniku DM
 v situacích s FPG < 5,6 mmol/l při podezření na
poruchu tolerance glukózy z předchozích vyšetření
20
Algoritmus pro laboratorní screening GDM
 Doporučení ČDS a ČSKB; vydáno v únoru 2012, aktuální korekce 18.2.2015