- lze zachytit pouze hrubé změny: hypergamaglobulinémii, hypogamaglobulinemii či monoklonální gamapatie (paraproteinémie) Imunofixace - Imunofixace slouží především k identifikaci typu paraproteinu – monoklonální imunoglobulin – těžké řetězce IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, lehké řetězce kappa, lambda - Paraprotein a jiné změny lze zachytit už při elektroforéze proteinů séra: PARAPROTEIN Obrázek převzat z http://www.sebia-usa.com/products/reagents.html (únor 2007) Elektroforéza proteinů séra Imunofixace • metoda umožňující identifikaci a typizaci monoklonálních imunoglobulinů v séru, moči nebo mozkomíšním moku. • dvoustupňová metoda: • první fáze: směs bílkovin se rozdělí podle elektroforetické pohyblivosti. • druhá fáze: identifikace typu bílkoviny pomocí specifických protilátek, barvení imunoprecipitační reakce. Imunofixace • Elektroforéza směsi bílkovin se uskutečňuje většinou v agarosovém nebo acetátcelulosovém gelu • v gelu se zhotoví obvykle 6 startů, do nichž se aplikuje vzorek téhož pacienta • Po skončení elektroforézy se na povrch gelu přiloží šablona s vyříznutými proužky v zónách elektroforetickýc hdrah Imunofixace • Do prvního proužku, který je určen pouze pro elektroforézu, se aplikuje fixační roztok • Do ostatních vyříznutých proužků se nanášejí specifické protilátky proti IgG, IgA, IgM a proti lehkým řetězcům κ nebo λ • difundují do gelu a v místě, kde reagují s příslušným antigenem vytvářejí imunokomplexy ve formě precipitátu. Imunofixace • Promytím vhodným pufrem se odstraní jak antigeny nereagující s aplikovanou protilátkou, tak i nadbytek protilátky. • Po promytí v gelu zůstanou pouze nerozpuštěné imunokomplexy, vytvářející ohraničný pruh, který se zvýrazňuje obarvením. Imunofixace Imunofixace Imunofixace Imunofixace Imunofixace Imunofixace Imunofixace Imunofixace Pozn. 75 – 80% nemocných mnohočetným myelomem má v moči přítomny monoklonální lehké řetězce (Bence-Jonesova bílkovina/paraprotein). BJB poškozuje buňky proximálních tubulů ledvin. MGUS monoklonální gamapatie nejasného původu Imunofixace