1 Kontroly jakosti v ZTS MVDr. Naďa Poloková TTO FN Brno Kontrola kvality (jakosti) - definice o Kvalita (jakost) je pojmem pro zpravidla kladné vlastnosti výrobku nebo služby. Kvalitní výrobek nebo služba je tak v souladu s požadavky zákazníků nebo standardů. Transfuzní přípravek (TP) musí splňovat určité parametry, abychom ho označili přívlastkem „kvalitní“ - důkaz o tom by měla podat kontrola kvality. 2 Kontrola kvality (jakosti) - definice o oKontrola výrobního procesu o oZajištění neustálého zlepšování o oZavedení opatření k nápravě a prevenci opakovaných problémů o 3 Kontrola kvality – úrovně oPři odběru a zpracování oPři výdeji oNamátková kontrola kvality 4 5 Kontrola kvality – základní parametry jakosti ¡V praxi jsou sledovány parametry jakosti, které jsou určeny vyhláškou 143/2008 Sb. o lidské krvi ¡Požadavky na jakost jsou uvedeny v příloze č.4, část A ¡Ods.9 přílohy č.1 – Kontroly jakosti (popis co všechno je potřeba kontrolovat) 6 Kontrola kvality – základní parametry jakosti oGuide to the preparation, use and quality assurance of blood component osoubor mezinárodních doporučení otabulky pro jednotlivé TP s kontrolovanými parametry a doporučenou četností kontrol Kontrola kvality spočívá v kontrole: 1.Dokumentace 2.Vizuální inspekce 3.Kontrola parametrů jakosti TP •Povinné parametry jakosti •Speciální parametry jakosti 4.Mikrobiologická kontrola •Výrobního prostředí (stěry ploch, vzdušné odkryvy) •Sterilita transfuzních přípravků •Kontrola účinnosti dezinfekce místa venepunkce 7 8 Kontrola kvality spočívá v kontrole - pokračování: •Dokumentace •Správné vyplnění dotazníku dárcem • •Vizuální inspekce •Celistvost vaku •Barva TP •Údaje na štítku 9 Vizuální inspekce TP ¡Kontrola vzhledu vyrobeného TP (při výrobě, při výdeji, vzorkováním) •Barva •Neporušenost obalu ¡Kontrola štítku •Uvedené údaje •Přilnavost štítku ¡U trombocytových TP se hodnotí tzv. ,,swirling“- víření, agregáty ¡U erytrocytových TP se hodnotí hemolýza a přítomnost sraženin Kontrola parametrů jakosti TP •Povinné parametry jakosti • •Vyšetřované u všech jednotek • •Vyšetřované u náhodně vybraných jednotek • 10 11 Kontrola parametrů jakosti TP (povinné parametry jakosti) – pokračování: ¡Vyšetřovány u všech odebraných jednotek limunohematologické parametry (krevní skupiny v ABO systému, RhD a screening nepravidelných protilátek) lvyhledávací testy na krví přenosné infekční choroby (HBV, anti-HCV, HIV 1 a 2, syfilis) lObjem TP, barva, vzhled, celistvost 12 Kontrola parametrů jakosti TP (povinné parametry jakosti) – pokračování: ¡Kontroly jakosti u náhodně vybraných jednotek (metodou vzorkování) l lKontrola procesu výroby TP v ZTS l lJe hodnocen obsah účinné látky: •u RBC hemoglobin, hematokrit, % hemolýzy •u PLT jejich počet v terapeutické dávce, pH •u plazmy: F VIII, celková bílkovina 13 Kontrola parametrů jakosti TP (povinné parametry jakosti) – pokračování: l lBuněčná kontaminace transfuzních přípravků a sterilita lKontrola účinnosti desinfekce místa venepunkce před odběrem krve a jejích složek 14 Podmínky vzorkování TP lPočet kontrol musí odpovídat kvantitě výroby na ZTS •Minimálně 1% z výroby •Vyhodnocení kontrol kvality v měsíčních intervalech l lLaborant nebo VŠ kontroly kvality pracuje samostatně a hlavně nezávisle na ostatních úsecích výroby TP, aby byla zajištěna nezávislost kontroly Výsledky kontrol l lŘešeny na radě jakosti l lVšechny neshody a odchylky od limitů uvedených ve vyhlášce 143/2008 Sb. se řeší okamžitě z důvodu odstranění příčiny co nejdříve, aby kvalita vyrobených TP nebyla ovlivněna 15 Kontrola parametrů jakosti TP (speciální parametry jakosti): •Jedná se o sledování změn v buněčné morfologii, biochemickém stavu buněk, expresi markerů aktivace PLT atd. • •Pro procesní validaci nových postupů je vhodné těchto parametrů využít • •S využitím např. průtokové cytometrie (FCM) nebo jiné vyšetřovací analýzy • 16 Kontrola parametrů jakosti TP (speciální parametry jakosti): Lze využít změn: •Apoptických = řízená buněčná smrt •Morfologické změny •Změny tvaru buňky •Metabolické změny •Změna pH •Spotřeba glukózy •Produkce laktátu •Uvolnění markerů aktivace (u trombocytových TP) 17 18 Phosphatidylserin – marker jakosti: oČasný znak apoptózy oFosfolipid fyziologicky lokalizován na vnitřní straně buněčné membrány oV buňkách podléhající apoptóze se phosphatidylserin translokuje na vnější stranu buněčné membrány a do plasmy 19 Obsah leukocytů v transfuzním přípravku ¡Při skladování TP dochází k rozpadu přítomných WBC, uvolnění cytokinů a intracelulárních enzymů, které mohou indukovat poškození RBC, resp. PLT ¡Zvýšená hladina volných cytokinů v TP může vést u příjemce k febrilní nehemolytické potransfuzní reakci 20 Obsah leukocytů v transfuzním přípravku -pokračování lProto je vhodné již při výrobě TP deleukotizovat, zabránit tím rozpad WBC a uvolnění cytokinů Stanovení cytokinů ve vhodných kombinacích může být vhodným indikátorem jakosti TP. 21 Transfuzní přípravky, přehled a charakteristika ¡Odběry plné krve (PK) lPK je následně zpracována na jednotlivé složky krve s minimální příměsí složek ostatních (erytrocyty,trombocyty, čerstvě zmražená plazma) ¡ ¡Odběry aferetické lPřístrojové odběry pouze určité složky krve, ostatní složky krve se dárci vrací do oběhu (takto se odebírají erytrocyty, trombocyty a plazma) 22 Erytrocytové TP ¡Jsou TP získané z odběru plné krve, s následným odstraněním plazmy a vrstvy buffy-coatu ¡Přidáním resuspenzního roztoku s glukózou a adeninem (SAG-M) ¡ ¡Základní zpracování může být rozšířeno dle požadavků klinik o deleukotizaci, promytí, ozáření či rozdělení na pediatrické dávky 23 Mezi nejčastěji vyráběné erytrocytové TP patří: •Erytrocyty bez buffy-coatu resuspendované (EBR) •Erytrocyty deleukotizované (ERD) –Pre-storage – při výrobě –Post-storage - sekundárně •Erytrocyty promyté (EP) •Erytrocyty deleukotizované z aferézy (ERDA) 24 Vlastní provedení kontroly kvality erytrocytových TP •Namátkový výběr vzorku •Řádné označení vzorku (číslo TP,množství,datum odběru,kdo TP vyrobil,číslo centrifugy,číslo lisu) •Na laboratoři je vzorek naředěn (2x), změřen na hematologickém analyzátoru krevní obraz 25 Vlastní provedení kontroly kvality erytrocytových TP - pokračování • •Mikroskopicky se v Naggeottově komůrce spočítají WBC (jen u deleukotizovaných TP) • •Vše se zapíše do tabulek a přepočítá na transfuzní jednotku (TU) • •Vyšetření hemolýzy se provádí na konci exspirace (po centrifugaci vzorku se odesílá supernatant na OKB) 26 Erytrocytové TP - závěr • •Objem je stanoven dle způsobu skladování tak, aby se dodržely specifikace pro hemoglobin a hemolýzu. • •Exspirace 42 dnů • •Skladování +2 až +6°C v lednici Sledované parametry kvality u erytrocytových koncentrátů: 27 28 Trombocytové TP ¡Jsou TP získané z plné krve nebo technikou aferézy, které obsahují stanovené množství trombocytů v terapeuticky účinné formě ¡ ¡V průběhu přípravy či následně, mohou být ošetřeny deleukotizací, ozářením, méně často promytím 29 Mezi nejčastěji vyráběné trombocytové TP patří: •Z plné krve –Trombocyty z buffy-coatu (TB) –Trombocyty z buffy-coatu směsné deleukotizované v náhradním roztoku (TBsD) – od 4 – 6 dárců •Z aferézy –Získány přístrojovým odběrem od jednoho dárce (TA, TAD, TAD PAS) 30 Vlastní provedení kontroly kvality trombocytových TP • •Namátkový výběr vzorku, odběr homogenního vzorku •Řádné označení vzorku • •Příprava vzorku před měřením (10x ředění), měření krevního obrazu na hematologickém analyzátoru 31 Vlastní provedení kontroly kvality trombocytových TP - pokračování • •Počítání reziduálních leukocytů mikroskopicky v Naggeottově komůrce • •Měření pH vzorku na pH metru • •Vše se zapíše do tabulek a přepočítá na transfuzní dávku 32 Trombocytové TP - závěr •Objem je stanoven dle způsobu skladování tak, aby se dodržely specifikace pro pH. • •pH je měřeno na konci doby exspirace, korigované na 22°C. • •Koncentrace trombocytů má být menší než 1,5 x 109/ml • •Exspirace PLT koncentrátů je 5 dnů. • •Skladování 20 až 24°C za stálého třepání Sledované parametry kvality u PLT koncentrátů: 33 34 Čerstvě zmražená plazma ¡ ¡Jsou TP získány z plné krve nebo aferézou ¡ ¡Zmražení co nejdříve na takovou teplotu, aby byly zachovány přítomné koagulační faktory ve funkčním stavu (na -30°C v jádře během jedné hodiny) 35 Mezi nejčastěji vyráběné plazmové TP patří: •Plazma z plné krve (P) •Plazma z aferézy (PA) •Kryoprotein (KP) –Složka plazmy připravená ze zmrazené čerstvé plazmy precipitací (srážením) bílkovin při tání ze zmrazeného stavu a následnou resuspenzí precipitovaných bílkovin v malém objemu tekuté plazmy 36 Vlastní provedení kontroly kvality plazmových TP • •Namátkový výběr vzorku (před i po zmrazení) • •Řádné označení vzorku • •Příprava vzorku před měřením, měření krev. obrazu na hematologickém analyzátoru 37 Vlastní provedení kontroly kvality plazmových TP - pokračování • •Počítání reziduálních WBC a RBC mikroskopicky v Naggeottově komůrce • •Vyšetření F VIII a celkové bílkoviny • •Vše se zapíše do tabulek a přepočítá na litry 38 Čerstvě zmražená plazma - závěr • •Objem je deklarován +/-10%. • •Exspirace plazmy je 3 roky. • •Skladování: –36 měsíců při méně než -25°C –3 měsíce při -18°C až -25°C Sledované parametry kvality u TP – plazma: 39 40 Mikrobiologická kontrola ¡Sterilita TP ¡Kontrola desinfekce místa venepunkce ¡Mikrobiologická kontrola výrobního prostředí Mikrobiologická kontrola – sterilita TP: 41 •Provádí se u všech druhů TP • •Četnost kontrol je stanovena podle tzv. ,,Bensonova vzorce“ Počet kontrol = 0,4 * √n n = počet vyrobených TP • •Kultivace vzorku TP v tekutých půdách za aerobních i anaerobních podmínek při 37°C (Český lékopis) 42 Mikrobiologická kontrola – kontrola účinnosti dezinfekce místa venepunkce: •Kontrola správného postupu přípravy místa venepunkce a zajištění aseptického postupu (dezinfekce místa vpichu) •Pomocí stěrové soupravy •Po mechanické očistě a dezinfekci loketní jamky Mikrobiologická kontrola výrobního prostředí - legislativa Kontrola prostředí: •Vyhláška č. 143/2008 Sb. Vyhláška o lidské krvi •Pokyny SÚKL: •VYR-36 Čisté prostory •VYR-32 Výroba sterilních léčivých přípravků, kap. 6, Kontrola kvality •VYR -10 Validace aseptických procesů • • 43 Mikrobiologická kontrola výrobního prostředí •Stěry ploch •Pomocí stěrové soupravy •Sterilní šablona 10 x 10cm •Sterilní tampon •Zkumavka se sterilním Ringerovým roztokem •Samolepící štítek na označení zkumavek • 44 Mikrobiologická kontrola výrobního prostředí – pokračování: •Vzdušné odkryvy •4 hodinová expozice Petriho misky s krevním agarem •provedeno za provozu (= stav s probíhajícími procesy a s předepsaným počtem pracovníků) •Limit: třída čistoty D (do 100 kolonií/misku) •Aeroskopické stanovení prašnosti a mikrob. kontaminace 45 Doporučené limity pro mikrob. kontaminaci čistých prostor ve stavu ,,za provozu“ – spadové metody: Třída Petriho miska (průměr 90mm) CFU/4hod. Vzorkování vzduchu CFU/m3 A < 1 < 1 B 5 10 C 50 100 D 100 200 46 A < 1 = laminární box B 5 = pozadí laminárních boxů C 50 = předbox D 100 = ostatní kontrolované prostory výroby 47 SPC – statistická regulace procesu •Pomocí statistiky je vhodné a legislativně doporučené hodnotit ve výrobě meziprodukty a konečné produkty, aby bylo možno co nejdříve zjistit a odstranit vzniklé nežádoucí výkyvy ve kvalitě produktu. · •Zavedení SPC vede k vyšší standardizaci vyrobených TP. SPC - pokračování •Preventivní nástroj řízení jakosti •Vymezení příčin variability procesu: –Náhodné příčiny (přirozené) - Nestejnorodost vstupního materiálu, vlhkost ovzduší atd. –Vymezitelné příčiny (za běžných podmínek na proces nepůsobí) •Sporadické (náhlé a působí krátkou dobu) •Přetrvávající - Poškození nástroje, nové seřízení stroje, nezaškolená obsluha 48 SPC - pokračování •Tvorba regulačních diagramů •Vymezení regulačních mezí –Centrální přímka (CL) •průměrná hodnota –Horní a dolní regulační mez (UCL,LCL) •+/- 3 SD od průměru –Horní a dolní varovná mez (UWL,LWL) •+/- 2 SD od průměru •Tvorba Gausova normálního rozložení 49 SPC – příklad vymezení mezí 50 51 SPC – statistická regulace procesu - pokračování ·Tímto hodnocením lze zjistit: ·Stabilitu procesu ·Kritické parametry ·Vhodné četnosti prováděných kontrol ·Stanovení limitů u některých sledovaných parametrů (objem) Závěr - shrnutí • •Základní parametry jakosti – legislativně dány, nutné kontrolovat • •Speciální parametry jakosti – vhodné je využít při validacích nových metod výroby TP • •SPC – statistické hodnocení napomáhá udržet proces ve stabilním stavu 52 53 Děkuji za pozornost.