PROTILÁTKY
• třídy, normální hladiny Ab
• základní charakteristika reakce Ag – Ab
• afinita , avidita
• polyklonální, monoklonální Ab
PROTILÁTKY (Ab)
Fab
Fc
Izotypová třída protilátek
• dána konstantní oblastí těžkého řetězce
Interakce Ag s Ab
• EPITOP – část Ag, na kterou se váže Ab
• vazebné místo protilátky – hypervariabilní
oblasti (CDR – complementarity determining
region)
• zprostředkována slabými vazebnými
interakcemi (nekovalentní vazba):
vodíkové můstky, iontové vazby,
hydrofóbní interakce, van der Waalsovy síly
Normální hladiny Ab v séru
(dospělého člověka)
• IgG 7,5 - 15,6 g/l
• IgA 0,8 - 4,5 g/l
• IgM 0,5 – 3 g/l
• IgD < 30 mg / l potřeba citlivé
• IgE < 2 mg / l detekční techniky
Vyšetření Ab
• IgG, A, M, D, E – turbidimetrie, nefelometrie
• specifické IgE (proti alergenům) – vzhledem k
nízké hladině jsou třeba citlivé
imunochemické metody (např.
chemiluminiscence – analyzátor Immulite,
EIA, RIA)
• specifické IgG (proti patogenům) - ELISA
Afinita, avidita
AFINITA
• síla vazby mezi jedním vazebným místem Ab a
jedním epitopem Ag
• čím větší specificita Ab, tím větší afinita
AVIDITA
• síla vazby mezi Ab a mutlivalentním Ag
• 1 molekula Ab má 2 vazebná místa
• IgM – pentamer, sekreční IgA – dimer
(ze sterických důvodů se nemohou vázat všechna
vazebná místa současně, IgM – max. 6 vazeb)
Polyklonální Ab
• obsahují směs protilátek různé specificity, avidity
• Připravují se imunizací zvířat (myš, králík, koza,
ovce...) požadovaným antigenem
• po určité době se zvířeti odebere sérum a vyizolují se
z něj protilátky
• jsou levnější než monoklonální
• pro některé aplikace výhodnější
• Využití v diagnostice:
nefelometrie, turbidimetrie,
konjugát ELISA, imunofluorescence
Monoklonální Ab
• obsahují jen protilátky 1 specificity (proti 1 Ag)
• připravují se hybridomovou technologií
• HYBRIDOM – buňka vzniklá fúzí myšího B-lymfocytu
a myelomové buňky
• selekce hybridomů (úspěšně fúzované buňky rostou
na médiu HAT, mají enzym HGPRT)
• selekce klonu, který produkuje protilátky
požadované specificity
• Využití v diagnostice: průtoková cytometrie,
histologie
MAb II.
HGPRT = hypoxantin-guanin fosforibozyl transferáza
MAb III.
HAT
medium
HAT obsahuje Hypoxantin, Aminopterin, Tymin
MAb IV.
PEG
MAb
POUŽÍVANÉ
K TERAPII
• Myší (celé) -momab
• Chimérické (myší VH VL ) -ximab
• Humanizované (myší hypervar.úseky) -zumab
• Lidské (připravené technikami mol.biol. dle
knihoven)