Vyšetřované parametry na hematologických analyzátorech a mikroskopicky Bourková L., OKH FN Brno Parametry krevního obrazu ØWBC - leukocyty White Blood Cells (bílé krvinky) ØRBC - erytrocyty Red Blood Cells (červené krvinky) ØHGB Hemoglobin ØHCT Hematocrit ØMCV Mean Cell Volume (střední objem RBC) ØPLT - trombocyty Platelets (krevní destičky) ØNRBC normoblasty ØRETI Reticulocyte Ø ØMCH Mean Corpuscular HGB ØMCHC Mean Corpuscular HGB Concentracion ØRDW RBC distribution width (distribuční šíře velikosti RBC) ØMPV Mean PLT Volume (střední objem PLT) ØPCT Plateletscrit (trombocrit) ØPDW PLT distribution width (distribuční šíře velikosti PLT) ØIPF Immature PLT factor ØIRF Immature RETI factor Diferenciální rozpočet WBC ØNEU (neutrofily) ØLYM (lymfocyty) ØMONO (monocyty) ØBASO (basofily) ØNRBC Parametry KO – pro klinické účely Ø*WBC a *DIF (109/L, %) Ø*RBC (1012/L) Ø*HGB (g/L) ØMCV (fL) přímo (*) měřený nebo počítaný {HCT/RBC} ØHCT (L/L) přímo (*) měřený nebo počítaný {RBCxMCV} ØMCH {HGB/RBC} (pg) průměr celkového HGB na jeden erytrocyt ØMCHC{HGB/HCT}(g/L) průměr koncentrace HGB na jeden erytrocyt ØRDW {z MCV} (%CV) heterogenita velikosti RBC populace Ø*NRBC (109/L, NRBC/100WBC) Ø*PLT (109/L) Ø*MPV (fL) ØPCT {PLTxMPV} (mL/L) ØPDW {z MPV} heterogenita velikosti PLT populace Ø*RETI (109/L, %) ØIRF (podíl) {nezralé RETI/všechny RETI} ØIPF (podíl) {nezralé PLT/všechny PLT} Øpočet krevních buněk dle vybraných *CD znaků (speciální parametr) Poznámka: * = přímo měřené parametry; ostatní parametry jsou počítané Parametry KO – pro laboratorní účely ØWBC üvitalita üpočet buněk predikujících přítomnost / nástup progenotorových buněk CD34+ üsusp.počet: tyčí, nezralých granulocytů (IG), blastů, atypických LY üsuspektní patologická hlášení ØBF (body fluid - tělní tekutiny) üpočet WBC PMN - polymorfonukleáry MN - mononukleáry üpočet RBC ØPLT üpočet malých PLTs üpočet velkých PLTl üsuspektní patologická hlášení nebo sraženiny – ØRBC üpodíl: mikrocytů, makrocytů üpodíl: hypochromních, hyperchromních RBC üHDW (HGB distribution width) heterogenita HGB v RBC üstřední objem RETI üstřední množství HGB v RETI üstřední koncentrace HGB v RETI üpodíly různě vyzrálých RETI ümnožství schistocytů (fragmentů RBC) üsuspektní patologická hlášení Referenční intervaly KO – pro dospělé ØWBC(109/l) 4,0 - 10,0 ØDIF üNE (%) 45 - 70 üTY (%) 0 - 4 üLY (%) 20 - 45 üMO (%) 2 - 12 üEO (%) 0 - 5 üBASO(%)0 – 2 üNRBC – nepřítomny ØRBC (1012/L) ženy 3,8 - 5,4 muži 4,0 - 5,9 ØHGB (g/L) ženy 120 - 160 muži 130 – 176 ØHCT (1/1) ženy 0,35 - 0,46 muži 0,39 - 0,51 ØMCV (fl) 84 – 96 ØPLT (109/l) 150 – 350 ØMCH (pg) 28 – 34 ØMCHC (g/l) 320 – 370 ØRDW (%CV) 10 - 15,2 ØMPV (fl) 7,8 -11,0 ØPCT (ml/L) 1,21 - 3,5 ØPDW (z MPV)15.5 -17.1 ØIPF (%) 1,1 – 6,1 ØRETI (109/l) 25 - 100 ØRETI (%) 0,5 - 2,5 ØIRF (1/1) < 0,3 doporučení ČHS pro děti i dospělé: http://www.hematology.cz/doporuceni/laboratorni_sekce/referencni_meze.php Životnost buněk v krevním oběhu Øerytrocyty: 110 – 120 dní Øleukocyty: několik hodin až dnů, někdy i roky Øneutrofily: 6 – 7 hodin Øeozinofily: 7 – 14 dnů Ølymfocyty: záleží na typu jejich diferenciace – až roky Ømonocyty: 12 hodin až několik dní Øtrombocyty: 9 – 12 dnů Grafické zobrazení analýzy krevních buněk - příklady http://www.abaxis.com/_media/content/hm5_how_impedance.gif http://www.ijpmonline.org/articles/2013/56/3/images/IndianJPatholMicrobiol_2013_56_3_306_120407_f1. jpg http://www.selectscience.net/images/hem_bg_7.jpg Numerické a grafické výsledky KO Obecná pravidla při hodnocení KO Ørespektovat princip a specifika (např. linearitu a přesnost) analýzy daného přístroje Øhodnotit: ünumeriské výsledky (sledovat měřené a počítané parametry) ügrafické výsledky ühlášení analyzátoru ühodnotit KO jako celek - nepřesné stanovení jedné složky ovlivní nepřesné stanovení jiné složky è klinické důsledky Øzohledňovat klinická hlediska: üdiagnóza üléčba ühistorie pacienta üvzhled vzorku (hemolytický, ikterický, chylózní) üsprávný odběr (množství, typ zkumavky) vposuzovat následnou kontrolu mikroskopem VysokéWBC_HCT • •patologický vzorek WBC = 900 x 109/L HCT_normál •normální vzorek s normálním HCT http://f.ptcdn.info/206/027/000/1420600335-dighl901-o.jpg chylózní vzorek http://docplayer.cz/docs-images/13/10116/images/15-0.jpg ikterické vzorky a hemolytické vzorky různé stupně hemolytických vzorků Hodnocení WBC Øpočet WBC Øvyváženost rozpočtu v dif Øpatologická hlášení vinterference - falešné navýšení počtu WBC způsobují : üNRBC (jaderné buňky) ürezistentní RBC (nezlyzované erytrocyty v měřícím systému) üholá jádra (z křehkých rozbitých buněk) üshluky nebo sraženiny PLT http://www.yeec.com/uploadimages1/forum/2006-5/200652122172867897.gif Hodnocení RBC Øparametry: RBC,HGB, HCT, MCV üpřímo měřené hodnoty ünelze sledovat morfologii (MCV je pouze střední objem všech RBC, neinformuje o rozložení celé populace) Øparametry: MCH, MCHC, RDW + disribuční křivka (šířka, vrcholy) üpočítané hodnoty z přímo měřených parametrů üzákladní přístrojové ukazatele morfologie oMCH, MCHC: normochromie, hypochromie, hyperchromie oRDW + křivka: isocytóza, anizocytóza (homogenní, heterogenní populace RBC) vinterference - chybné, nesouvisející výsledky pro měřené a počítané parametry RBC způsobují: üshluky nebo sraženiny PLT üaglutinace RBC (např. chladové protilátky) üextrémně vysoký počet WBC ühemolytický, ikterický, chylózní vzorek Impedanční histogramy RBC- RDW normál (a) - normál (b) - mikrocyty (c) - makrocyty auto0 auto0 Impedanční histogramy RBC - RDW vysoké (a)- příměs makrocytů (b)- vysoký podíl makro (c)- masivně mikrocyty (schistocyty) (d)- mikrocyty + normocyty Morfologie RBC •http://www.sekk.cz/infoservis/2006_Morfologie_erytrocytu.pdf • Obrázek1 leptocyt1 Obrázek80 Obrázek97 aglutinace1 Obrázek5 normocyty anizocytóza, anizochromie, tvarové odchylky RBC penízkovatění RBC aglutinace RBC Obrázek78 http://www.sekk.cz/eqa/2013/DIF413_B13.jpg Obrázek15 Howell-Jollyho tělísko polychromázie bazifilní tečkování Obrázek88 Cabotovy prstence Schistocyty (tvarové odchylky) ANO NE Bite cells („vykousnuté“ buňky) http://vetbook.org/wiki/cat/images/f/fc/Fig1large.jpg mechanismus vzniku Hodnocení PLT Øparametry: PLT, MPV üpřímo měřené hodnoty ünelze sledovat morfologii (MPV je pouze střední objem všech PLT, neinformuje o rozložení celé populace) Øparametry: PDW + disribuční křivky (šířka, rozložení, umístění na ose) üpočítané hodnoty z přímo naměřených parametrů üzákladní přístrojové ukazatele morfologie oisocytóza, anizocytóza (homogenní, heterogenní populace PLT) onetrombocytární elementy vinterference způsobují: üchybné snížení počtu PLT: (SW vyloučí buňky z populace) omakro/gigantické PLT osraženiny oshluky při falešná trombocytopenie (reakce na K2EDTA, satelitóza) üchybné zvýšení počtu PLT: (SW zařadí buňky do populace) omikro RBC obuněčné/nebuněčné fragmenty onetrombocytární příměsy (makromolekuly proteinů, kontaminace reagencií) vkontrola/ověření počtu PLT: üjinou metodou než byla primární analýza oopticky nebo impedančně oimunologicky s antigenem CD 61 ümikroskopicky üanalýza vzorku s jiným protisrážlivým činidlem - s kationtem Mg2+ nebo Ca2+ Impedanční histogramy PLT (a) - dolní intrference (b-d) - horní/dolní interference auto0 auto0 •Impedanční histogram •normál dc61 str http://www.sekk.cz/eqa/2012/DIF212_A01.jpg aniso 09 makro 02 197800-201722-4959 Morfologie PLT hypogran 01 fyziologické PLT anizocytóza PLT sraženiny, shluky PLT makro, gigantické PLT fragmenty PLT satelitóza PLT hypogranulární PLT Vyšetřované parametry a pravidla při mikroskopickém hodnocení preparátů Øhodnotit komplexně celý nátěr (WBC, RBC, PLT) Øv rovnoměrně rozetřeném místě Øzvětšení: ü1000x (morfologie buněk) ü200x (přehledný náhled na preparát) Øhodnotit buňky v kontextu s celým nátěrem Øhodnotit nátěr periferní krve v souvislosti s přístrojovým KO a historií pacienta Øminimální běžný počet hodnocených buněk: üperiferní krev: 100 leukocytů a evt. nalezený počet NRBC/100 leukocytů ükostní dřeň: 500 jaderných elementů Øsubpopulace WBC v krvi i KD se uvádí v % A00807NA9B_001 Hodnocení morfologie •WBC Øvelikost buněk: malé, střední, velké Øcharakteristika jádra: holá jádra, poměr jádra k cytoplazmě, jaderný chromatin, jadérka (přítomnost, nepřítomnost, počet, velikost), členitost a tvar jádra (hypo-, hypersegmentace NE), velikost jádra Øcharakteristika cytoplazmy: granulace, bez granulace, specifická (NE,EO,BA), nespecifická, toxická granulace, barevný odstín cytoplazmy, vakuolizace, barevné inkluze, Auerovy tyče, okraje cytoplazmy (členité, hladké, vlasaté) •RBC Øvelikost buněk (MCV, RDW, distribuční křivka) Øodchylky: übarevné (MCH, MCHC) ütvarové, inkluze, shluky Øjaderné buňky •PLT Øvelikost (MPV, PDW, distribuční křivka) Øgranulace, hypogranulace Øshluky, satelitóza Øfragmenty (RBC, WBC) ØMGK, holá jádra MGK Příklady přístrojové analýzy krevního obrazu a diferenciálního rozpočtu WBC Normální vzorek Normal Infekce Band, IG Starý vzorek Satelitóza trombocytů plt satellitism 2 Monoblasty Mononukleóza Monoblastic cells Mononucleose Chronická lymfatická leukémie typical CLL NRBC ve vzorku b thalassemia and howell jolly bodies Vzorek po dialýze Po odstranění rstRBC rstRBC 1 rstRBC 2 Reakce na EDTA plt clumps plt clmp 2 ALL a fragmenty cytoplazmy all C:\Users\3840\Documents\Databáze-Dif-KO_10-13\F4\A00717R6DB_001.jpg C:\Users\3840\Documents\Databáze-Dif-KO_10-13\F4\A00717R6DB_010.jpg C:\Users\3840\Documents\Databáze-Dif-KO_10-13\F4\A00717R6DB_004.jpg C:\Users\3840\Documents\Databáze-Dif-KO_10-13\F4\A00717R6DB_021.jpg C:\Users\3840\Documents\Databáze-Dif-KO_10-13\F4\A00717R6DB_121.jpg C:\Users\3840\Documents\Databáze-Dif-KO_10-13\F4\A00717R6DB_145.jpg •Fyziologický vzorek 86BDE276 A00776V5AB_006 A00776V5AB_026 A00776V5AB_025 A00776V5AB_072 A00776V5AB_099 A00776V5AB_111 •patologický vzorek • • •MO •BL •LY •anizo ery •sférocyty •anizo, makro PLT •hypogranulace NE •NE •patologický vzorek A00776V5AB_001 •polychromázie •sférocyty patologický vzorek •žena, 30 roků •ambulantní pacientka •diagnóza: dědičná sférocyóza • 86BDE276