Glukóza Ing. Martina Podborská, Ph.D. OKB FN Brno Školní rok 2017/2018 qFPG (plazmatická koncentrace glukózy v žilní krvi nalačno) q 2 Glukóza – klinický význam qKoncentrace FPG (stanovení glykémie) je hlavní nástrojem pro: ü určení diagnózy diabetu mellitu (DM) ü vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM ü q qAnalyzovaný materiál: üB, S, P, U, CSF, výpotek qPreanalytické požadavky: üpro diagnostiku diabetu mellitu je nevhodný odběr krve bez antiglykolitických přísad; ČSKB a Česká diabetol. společnost (2005) doporučují: üodběr krve nalačno (min. 8h lačnění) üstanovení v plazmě žilní krve (EDTA + NaF) üoddělení plazmy od krevních elementů do 60 min po odběru üpři sběru moče uchovávat moč do doby analýzy při 4-80C, je třeba zabránit bakteriální kontaminaci 3 Glukóza qOdběr krve na stanovení glukózy: qŽilní krev: üpro diagnostiku DM a pro případ, že jsou potřebná další laboratorní vyšetření qKapilární krev: üpro kontrolu léčby, ne pro diagnostiku 4 Glukóza qReferenční meze: üS, P-Glukóza: 3,9 – 5,6 mmol/l üCSF-Glukóza: 2,8 – 3,9 mmol/l üdU-Glukóza: 0 - 1,7 mmol/24h üP-Glukóza (oGTT nalačno): 3,9 – 5,6 mmol/l üP-Glukóza (oGTT po 2h): 3,9 – 7,8 mmol/l qReferenční metoda: ID-GC/MS (izotopová diluce a stanovení GC s MS) qCertifikovaný referenční materiál: SRM 909 NIST, NIST/SRM 917, NIST/SRM 965 (USA) ü ü ü ü ü ü ü ü q 5 Glukóza qDiabetes mellitus 1. typu (IDDM, závislý na inzulinu): üje způsoben absolutním nedostatkem inzulinu v důsledku zániku b-buněk pankreatu qDiabetes mellitus 2. typu (NIDDM, nezávislý na inzulinu): üje způsoben relativním nedostatkem inzulinu – sníženou citlivostí tkání k inzulinu, hladina inzulinu přitom může být normální, zvýšená nebo snížená qGestační diabetes mellitus: üvzniká v průběhu těhotenství, po porodu většinou vymizí qOstatní specifické typy diabetu mellitu: üdiabetes doprovází jiná onemocnění, např. endokrinní, genetická, zánětlivá nebo vyvolané některými léky ü ü ü ü 6 Diabetes mellitus a jeho typy qKlinické symptomy: üP-Glu (náhodný odběr): ≥ 11,1 mmol/l üP-Glu (nalačno): ≥ 7,0 mmol/l üP-Glu (oGTT) po 2h: ≥ 11,1 mmol/l ü opakované vyšetření qRozhodovací meze: ü ü ü ü • •* při diagnostice gestačního diabetu 7 Diagnostická kritéria diabetu mellitu FPG (mmol/l) Interpretace < 5,6 (< 5,1)* Vyloučení diabetu mellitu 5,6 – 6,9 Zvýšená FPG (IFG, prediabetes) ˃ 7,0 Diabetes Mellitus 8 Doporučení ČSKB a ČDS 9 Algoritmus pro diagnostiku DM u dospělých qDoporučení ČDS a ČSKB; vydáno v únoru 2012, aktuální korekce 18.2.2015 10 Požadavky na analytickou kvalitu měření Mezilehlá preciznost CV < 2,5 % Pravdivost (Bias) B < 2,0 % Celková chyba TE < 3,1 % Metrologická návaznost referenční metoda Intraindividuální biologická variabilita 4,9 Preciznost odvozená z biologických variabilit 2,5 Interindividuální biologická variabilita 6,9 Pravdivost odvozená z biologických variabilit 2,2 Celková biologická variabilita 8,9 Celková chyba odvozená z biologických variabilit 6,9 q www.westgard.cz qDoporučení ČDS a ČSKB; vydáno v únoru 2012, aktuální korekce 18.2.2015 11 Glukóza – metody stanovení •1. Referenční metody: • •a) ID-GC/MS a ID-LC/MS • üstandardní přidání značené glukózy C14 (izotopová diluce) do analyzovaného vzorku, následné rozdělení plynovou nebo kapalinovou chromatografií a stanovení glukózy hmotnostní spektrometrií 12 Glukóza – metody stanovení •2. Doporučené rutinní metody – enzymové stanovení: •2.1 Metoda s hexokinázou a glukóza-6-fosfát (HK/G6PD): • • glukóza + ATP glukóza-6-fosfát + ADP (HK) •glukóza-6-fosfát + NADP+ glukono-6-fosfát + NADPH (G6PD) üvzrůst absorbance NADPH je přímo úměrný koncentraci glukózy ve vzorku a měří se fotometricky při 340 nm üprvní reakce katalyzovaná hexokinázou není specifická pro glukózu (reagují všechny hexózy), ale specifita stanovení je získaná druhou reakcí, při která se stanovuje pouze fosforylovaná glukóza ü 13 Glukóza – metody stanovení •2. Doporučené rutinní metody – enzymové stanovení: •2.2 Metoda s glukózaoxidázou a peroxidázou (GOD/POD): • • b-D-glukóza + O2 b-D-glukonolakton + H2O2 (GOD) •H2O2 + 4-aminoantipyrin + fenol chinonmonoiminové barvivo + H2O (POD) üvzrůst absorbance barevného produktu je přímo úměrný koncentraci glukózy ve vzorku a měří se spektrofotometricky při 340 nm üprvní reakce je specifická, reakce na stanovení peroxidu vodíku však může být více či méně ovlivněna interferujícími látkami 14 Glukóza – metody stanovení •3. Elektrochemické metody: qClarkova kyslíková elektroda qBiosenzory s membránou se zakotvenou GOD qGlukometry (POCT) q • q automatický stolní analyzátor ke stanovení glukózy a laktátu (Biosen) q lanceta q glukometry 15 Glukóza – metody stanovení qPrincip: přímé elektrochemické stanovení • 1. glukóza + O2 glukonolakton + H2O2 (glukózaoxidáza) • 2. elektrochemická redukce H2O2 na H2O • 3. vzniklý elektrický proud nebo náboj je úměrný koncentraci glukózy (amperometrické nebo coulometrické stanovení) • H2O2 2H+ + O2 + 2e- reakce na anodě • • 2e- + 2H+ + ½ O2 H2O reakce na katodě • Pt napětí 16 Glukóza – metody stanovení qGlukometry: qjsou určeny k selfmonitoringu pacientů s DM, dále pro ambulantní měření koncentrace glukózy qpoužití glukometrů k dg. DM se nedoporučuje qproti referenční metodě nesmí chyba měření překročit: • ± 0,83 mmol/l pro koncentrace < 5,6 mmol/l • ± 15% pro koncentrace ≥ 5,6 mmol/l qkontroly osobních glukometrů srovnáním s měřením v laboratoři se doporučuje provádět v pravidelných časových intervalech minimálně jednou ročně • 17 Glukóza v moči qglykosurie: stanovení ztráty glukózy močí qpro diagnostiku DM není stanovení doporučeno qmá jen orientační význam qprakticky byla nahrazena selfmonitoringem glykémií q q • 18 Glukózový toleranční test (oGTT) qpo lačnění (10-14h) je provedeno stanovení glykémie v žilní plazmě a poté je podáno 75 g glukózy ve 300 ml vody qpo 2h fyzického klidu je proveden další odběr krve ke stanovení glykémie v žilní plazmě qu gestačního oGTT: odběr krve před zátěží, 1h po zátěži a 2h po zátěži qvyhodnocení oGTT: q q • Glykémie v žilní plazmě za 2h Klinický závěr < 7,8 mmol/l Diabetes mellitus vyloučen 7,8 – 11,0 mmol/l Porušená glukózová tolerance > 11,0 mmol/l Diabetes mellitus potvrzen 19 Glukózový toleranční test (oGTT) qpoužívá se k potvrzení diagnózy DM v případech: üstavy IFG (prediabetu) s hodnotami FPG 5,6 až 7,0 mmol/l ütěhotenství u skupin se zvýšeným rizikem vzniku DM üjedinci se zvýšeným rizikem vzniku DM üv situacích s FPG < 5,6 mmol/l při podezření na poruchu tolerance glukózy z předchozích vyšetření ü ü q q q • 20 Algoritmus pro laboratorní screening GDM qDoporučení ČDS a ČSKB; vydáno v únoru 2012, aktuální korekce 18.2.2015 Děkuji za pozornost.