Laboratorní vyšetření v alergologii Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Imunopatologické reakce dle Coombse a Gella • I. typ – časná přecitlivělost IgE • II. typ – cytotoxická reakce ADCC • III. typ – imunokomplexy • IV. typ – pozdní přecitlivělost • Hypersenzitivita (přecitlivělost) přítomnost projevů vyvolaných expozicí definovaným podnětům v dávce, která je u normálních jedinců tolerována • Atopie dispozice stát se přecitlivělým a tvořit IgE v odpovědi na setkání s běžnými antigeny • Alergie klinické projevy specifické imunologické přecitlivělosti zprostředkované IgE protilátkami Candreva A et al. Caseins: Properties, Functions and Health Implications. 2016 http://foodexposed.co.za/genetically-modified-food-increases-the-risk-of-allergies/ Kožní testy • Prick testy - zlatý standard - nanesení kapek alergenů na předloktí, lancetou se naruší povrch kůže, odečtení po 15min. - pyly, roztoči, zvířata • Intradermální testy - alergen se aplikuje jehlou intradermálně - vyšší riziko systémové reakce Další vyšetření • Měření FeNO – oxidu dusnatého ve vydechovaném vzduchu • - pacienti s neléčeným astmatem mají zvýšené koncentrace vydechovaného oxidu dusnatého, což vypovídá o přítomnosti eozinofilního zánětu v dýchacích cestách • Spirometrie • - funkční vyšetření kapacity plic, diagnostika obstrukce v dýchacích cestách • Bronchomotorické testy • - bronchodilatační test – vyšetření reverzibility obstrukce dých. cest po podání bronchodilatacia (reverzibilita ukazuje na astma) • - bronchoprovokační testy – ověření, zda jsou průdušky schopné konstrikce pod vlivem určitého podnětu (metacholin, fyzická zátěž) – což svědčí pro zánět průduškové stěny Laboratorní diagnostika Serologické vyšetření Buněčné vyšetření (Test aktivace bazofilů) Serologické vyšetření • Celkové IgE • Specifické IgE (= alergen-specifické IgE) • Koncentrace tryptázy • Stanovení počtu eozinofilů • ECP Celkové IgE • pouze pomocné vyšetření • zvýšená konc. IgE – alergie, parazitární onemocnění, polypy, hyper-IgE syndrom, AIDS atd. • normální hodnoty < 100 IU/ml (volné IgE) • měření - nefelometricky • 1 IU/ml = 2,4 ng/ml • 100 IU/ml odpovídá cca 0,0002 g/l Specifické IgE • IgE protilátky namířené proti konkrétním alergenům • výsledky - ve standardizovaných třídách (I-VI) • alergen ve formě extraktu (směs proteinových antigenů) nebo rekombinanty (přesná definice alergenu) Immulite 2000 - detekce chemiluminiscence - měří se počet fotonů / s - stanovení spec. IgE, ECP Unicap 100 - detekce fluorescence - až 50x větší kapacita k navázání alergenu - stanovení spec. IgE proti rekombinantním alergenům, stanovení tryptázy Alex macro array - více než 280 alergenů - enzymová imunoanalýza - princip podobný jako imunoblot MJ Goikoetxea at al. J Investig Allergol Clin Immunol 2013; Vol. 23(7): 448-454 ECP (eozinofilní kationický protein) • koncentrace ECP odráží intenzitu eozinofilního zánětu • monitorování alergického zánětu v plicích (bronchiální astma) • zvýšení ECP – také při atopické dermatitidě, parazitárních onemocněních, cystické fibróze, atd. Stanovení počtu eozinofilů • obrana organismu před mnohobuněčnými parazity • při alergickém zánětu • absolutní a relativní počet – diferenciální rozpočet leukoctů • eozinofily < 5% (<0,7 x 109 /l) leukocytů • monitorování alergického zánětu v plicích (bronchiální astma) • zvýšený počet eozinofilů - alergická a parazitární onemocnění Tryptáza • mediátor uvolňující se z mastocytů při jejich aktivaci a následné degranulaci (při anafylaktická reakci) • delší poločas rozpadu než histamin • krev se odebírá 30min – 3h po reakci (kontrola poklesu hladiny za 1-2 týdny) • zvýšená koncentrace tryptázy – při mastocytóze (nahromadění žírných bb v kůži či jiných orgánech – vyšší riziko anafylaktické reakce po bodnutí hmyzem) Test aktivace bazofilů (bazotest) funkční test umožňující vyšetření aktivace basofilů po setkání se s určitým alergenem in vitro Cytometrické obrázky převzaty z prezentace MUDr. Zity Chovancové PhD., FNUSA ÚKIA Brno na povrchu bazofilů - FcεRI (receptor pro IgE) - CD203c založen na expresi aktivačního znaku (CD63) na povrchu periferních bazofilů po jejich expozici alergenem in vitro ohraničímesubpopulacibazofilů (IgE pozitivní) - sledujeme expresi CD63 (viz.obr.)a CD203c (není uvedeno) Sledujemeexpresi CD63 na povrchu bazofilů negativní pozitivní Reakce přecitlivělosti jsou podstatou alergických onemocnění. Reakce přecitlivělosti I. typu neboli IgE mediovaná alergie - je zprostředkovaná protilátkami IgE. IgE se naváže na bazofily ve fázi senzibilizace. Při dálším setkání s alergenem – alergen přemostí IgE, to vede k aktivaci bazofilů - masivnímu uvolnění produktů degranulace bazofilů a mastocytů zvýšená exprese CD63 a CD203c na aktivovaných bazofilech.