Praktická cvičení datum____________ jméno___________________ Téma praktika: Seznámit se s konstrukcí a funkcí atomového absorpčního spektrofotometru –plamenová technika. Stanovení Zn ve vzorcích séra a vkontrolním vzorku. Přístroje a pomůcky: Atomový absorpční spektrofotometr PYE UNICAME SP9 Pracovní standard (Zn) 76,47 umol/l 8% n-butanol ( ředící roztok-stand.;vzorky;blank) Pipety, laboratorní sklo Úkoly a) Obeznámení se se základními prvky AAS, jejich funkcí a optimálním nastavením b) Kalibrace přístroje a stanovení koncentrace Zn vkontrolním vzorku a ve vzorcích séra 1.změření absorbancí STD 1; STD 2; STD 3; kontrolní vzorek; vzorky sér. Výpočet faktoru a koncentrace Zn v kontrolním vzorku a ve vzorcích sér 2.vytvoření kalibračního grafu (EXCEL) a odečtení koncentrace Zn ve vzorcích z grafu 3. nastavení módu AAS měřícího přímo koncentrace Zn ve vzorcích (A) Obeznámení se se základními prvky AAS, jejich funkcí a optimálním nastavením PLYNY Acetylén-tlaková nádoba Hlavní uzávěr; redukční ventil k nastavení redukovaného tlaku; uzávěr výstupu redukčního ventilu Vzduch-centrální distribuce Mechanický filtr nečistot; ukazatel tlaku VÝBOJKA S DUTOU KATODOU zapnutí; nastavení žhavícího proudu; centrování paprsku ŠTĚRBINA 0,7 nm; (0,2 nm; 2,0 nm - vliv na odezvu fotonásobiče) VLNOVÁ DÉLKA Nastavení monochromátoru (Zn 213,86 nm; 307,59 nm) HOŘÁK Zapalovač elektrickou jiskrou Délka absorpčního prostředí Ovládací prvky pro nastavení polohy hořáku Vertikální Předozadní V ose paprsku (rotační) kontrola polohy paprsku z výbojky nad rovinou hořáku NEBULIZÉR Nasávací kapilára Příprava analytického vzorku Sérum / kontrolní vzorek 0,2 ml Ředící roztok (dávkovač)1,8ml Zvortexovat MĚŘENÍ Příprava standardních roztoků STD č. Koncentrace [umol/L] Zásobní standard [ml] Ředící roztok 1 15,3 2,0 Doplnit do 100 ml 2 30,6 4,0 Doplnit do 100 ml 3 45,9 6,0 Doplnit do 100 ml Promíchat Z odměrných baněk odlijeme standardy do čistých skleněných zkumavek (čištěné kyselinou dusičnou) a označíme je STD1-3. Do čtvrté zkumavky napipetujeme ředící roztok pro Zn, označíme ji “Blank”. Příprava vzorků Kontrola/vzorek Ředící roztok 200 ul 800 ul Zvortexovat Příprava analyzátoru k práci Zapnout počítač i analyzátor Spuštění obslužného programu WinLab AA Flame Vyvolání metody Zn (Wrkspc - ikonka na liště vlevo) Zapnutí kombinované výbojky s dutou katodou (On/Off) (20 mA) a D2 výbojky (Background corrector) Puštění plynů Zapálení plamene (elektrickou jiskrou) Nasávací kapilárou nasávat deionizovanou vodu (ustálení přístroje cca 5 minut). Kalibrace, analýza a hodnocení kontrol, analýza vzorků Na stoleček si přichystáme stojánek se vzorky a kalibrátory. Vezmeme nasávací hadičku a vložíme ji do zkumavky označené Blank -> stiskneme tlačítko Analyze Blank Přístroj nás vyzve k nasávání standardu -> vložíme nasávací hadičku do STD3 a dáme OK Počkáme než se přístroj automaticky seřídí (optimální optický tok – poloha hořáku, monochromátor) Po chvíli se objeví hlášení, že vše proběhlo v pořádku. Vytáhneme hadičku a opláchneme ji v demiH2O. Potom ji vložíme do zkumavky Blank a odsouhlasíme hlášku. V okně Results se objeví 2 výsledky (měříme v duplikátu). Poté můžeme hadičku vyjmout a vložit do demiH2O. Následně můžeme měřit kalibrační roztoky STD1-3. Vložíme nasávací hadičku do zkumavky s roztokem STD1 a klikneme na tlačítko Analyze Standard. Po zobrazení 2 bodů v okně results můžeme hadičku vytáhnout. Stejně postupujeme i se STD 2 a 3. Vyhodnotíme kalibrační křivku. Pustíme kontrolní vzorky obdobným způsobem, jen klikáme na tlačítko Analyze Sample. Stejně tak i následující vzorky. VYPNUTÍ PŘÍSTROJE Po ukončení práce nechat promývat cca 5 min roztokem 5% HNO[3]. Poté znovu demiH[2]O V tabulce ovládání plamene stiskneme tlačítko OFF. Uzavřeme přívody plynů a zadáme tlačítko Bleed Gases (2x). Vytiskneme výsledky pomocí File -> Utilities -> Data Manager -> vybereme náš soubor vzorků -> Report -> Use Existing Design -> Next -> Preview -> ikonka tiskárny na liště nahoře Nyní můžeme vypnout lampy a poté i přístroj.