Katedra laboratorních metod Bakalářské studium Zdravotní laborant 2.ročník (Z semestr) LF MU Klinická biochemie cvičení Praktické cvičení č. Datum ………………… Jméno ………………………………………….. Téma: Ověření některých vlastností analytické metody Okruhy k nastudování a dotazy: 1. Přečtěte si protokol a zopakujte si, co je to kalibrační křivka. 2. Co je to End point měření? 3. K čemu slouží a jak se provádí orální glukózový toleranční test (o-GTT)? 4. Připravte si princip stanovení bilirubinu s DPD a glukózy s hexokinázou. Úkol: 1. sledování průběhu reakce metody pro stanovení glukózy 2. určení vhodných měřících bodů 3. vymezení horní hranice pracovního rozsahu metody 4. analýza vzorků s koncentrací analytu nad pracovní rozsah metody – rerun funkce analyzátoru – manuální ředění vzorku Přístroje a pomůcky: Automatický analyzátor Cobas 8000 (Roche), Glukosa, reagencie pro stanovení glukózy s hexokinázou Roche, zkumavky, pipety, destilovaná voda Provedení: 1. sledování průběhu reakce metody použité pro stanovení glukózy · v databázi analyzátoru cobas 8000 prohlédněte průběh reakce vzorku sérové glukózy o koncentraci cca 10 mmol/l · z průběhu reakční závislosti určete o jaký typ reakce se jedná Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________ 2. určení vhodných měřících bodů · na základě znalosti průběhu reakce určete body (čas) vhodné pro měření absorbance vzorku Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ 3. vymezení horní hranice pracovního rozsahu metody * ze zásobního standardu glukózy koncentrace 200 mmol/l připravte ředěním destilovanou vodou řadu vzorků o koncentracích uvedených v tabulce 1 tak, aby výsledný objem naředěných vzorků byl 2,0 ml * vzorky dobře promíchejte, rozdělte na dva podíly a oba analyzujte za podmínek určených v bodě 2 * naměřené hodnoty koncentrací a jejich průměrné hodnoty zapište do tabulky 1 (bez opakování po ředění) * v Excelu sestrojte graf závislosti průměrných koncentrací glukózy nalezených ve vzorcích na teoretických koncentracích z tabulky 1 * ze znázorněné závislosti odhadněte horní hranici pracovního rozsahu analytické metody Tabulka 1 Číslo vzorku Koncentrace glukózy Objem zásobního standardu Objem destil. vody Naměř. Konc. gluk. (mmol/l) (mmol/l) (teoretická) 1 2 3 4 5 6 7 8 Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ ____________________________________________________________ 4. analýza vzorků s koncentrací analytu nad pracovní rozsah metody · nařeďte vzorky 2 - 8 manuálně v poměru 1 + 9 destilovanou vodou a k analýze použijte nekorigovaný objem vzorku v kyvetě, výsledky vynásobte stupněm ředění · analyzuje neředěné vzorky 2 – 8, použijte automatického ředění vzorku analyzátorem – funkce rerun => ředění 3,14x. · výsledky obou měření zapište do tabulky 2 a porovnejte je · do grafu přidejte závislost hodnot koncentrací glukózy z tab.2 – rerun na teoretických koncentracích z tabulky 1. Tabulka 2 Číslo vzorku Koncentrace glukózy mmol/l naměř. konc. gluk. (mmol/l) nekorigovaný objem vzorku - vzorky ředěné 1 + 9 korigovaný objem vzorku - rerun 2 3 4 5 6 7 8 Závěr:______________________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ Katedra laboratorních metod Bakalářské studium Zdravotní laborant 2.ročník (Z semestr) LF MU Klinická biochemie cvičení Praktické cvičení č. Datum ………………… Jméno ………………………………………….. Téma: Ověření některých vlastností analytické metody Úkol: 5. sledování průběhu reakce metody pro stanovení celkového bilirubinu 6. určení vhodných měřících bodů 7. vymezení horní hranice pracovního rozsahu metody 8. analýza vzorků s koncentrací analytu nad pracovní rozsah metody – rerun funkce analyzátoru – manuální ředění vzorku Přístroje a pomůcky: Automatický analyzátor Cobas 8000 (Roche), zásobní standard bilirubinu o koncentraci 1566 umol/l, reagencie pro stanovení celkového bilirubinu T Bili (Roche Diagnostic), zkumavky, pipety, destilovaná voda Provedení: 5. sledování průběhu reakce metody použité pro stanovení bilirubinu · na analyzátoru analyzujte vzorek bilirubinu o koncentraci cca 200 umol/l · z průběhu reakční závislosti určete o jaký typ reakce se jedná Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________ 6. určení vhodných měřících bodů · na základě znalosti průběhu reakce určete body (čas) vhodné pro měření absorbance vzorku Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ 7. vymezení horní hranice pracovního rozsahu metody * ze zásobního standardu bilirubinu koncentrace 1566 umol/l připravte ředěním destilovanou vodou řadu vzorků o koncentracích uvedených v tabulce 1 tak, aby výsledný objem naředěných vzorků byl kolem 200 ul. * vzorky dobře promíchejte a oba analyzujte za podmínek určených v bodě 2 * naměřené hodnoty koncentrací a jejich průměr zapište do tabulky 1 (bez opakování po ředění) * sestrojte v Excelu graf závislosti průměrných koncentrací bilirubinu nalezených ve vzorcích na teoretických koncentracích z tabulky 1 * ze znázorněné závislosti odhadněte horní hranici pracovního rozsahu analytické metody Tabulka 1 Číslo vzorku Koncentrace bilirubinu (umol/l) (teoretická) Objem zásobního standardu (ul) Objem destilované vody (ul) Konc. bilirubinu naměřené (umol/l) 1 2 3 4 5 6 7 8 Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ ____________________________________________________________ 8. analýza vzorků s koncentrací analytu nad pracovní rozsah metody · nařeďte vzorky 2 - 8 manuálně v poměru 1 + 9 destilovanou vodou a k analýze použijte nekorigovaný objem vzorku v kyvetě, výsledky vynásobte stupněm ředění · analyzuje neředěné vzorky 2 – 8, použijte automatického ředění vzorku analyzátorem (1,5x) – funkce rerun => do kyvety je pipetován snížený objem vzorku · výsledky obou měření zapište do tabulky 2 a porovnejte je · do grafu přidejte závislost hodnot koncentrací bilirubinu z tab.2 – rerun na teoretických koncentracích z tabulky 1 Tabulka 2 Číslo vzorku Koncentrace bilirubinu umol/l konc. bilirubinu naměřené (umol/l) nekorigovaný objem vzorku - vzorky ředěné 1 + 9 korigovaný objem vzorku - rerun 2 3 4 5 6 7 8 Závěr:______________________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________