Vliv vnějších a vnitřních faktorů na růst

mikroorganismů, kultivační vyšetření


Teoretická část:

Způsob odběru vzorků pro mikrobiologické zkoušení:

Vzorky se odebírají: původní spotřebitelská balení

                                 určitý počet kusů u kusových výrobků

                                 určitá hmotnost (objem) u nekusových výrobků

Způsob odběru vzorků kusových, tekutých a kašovitých, sypkých a výrob-

ků smíšené konzistence – musí být vyloučena druhotná mikrobiální konta-

minace

Označení a přeprava vzorků do laboratoře

Příprava vzorků pro mikrobiologické zkoušení:

Otevírání obalů vzorků potravin

Odběr návážky, stupeň ředění

Homogenizace, vytřepání – výchozí ředění

Zhotovení řady ředění

Kultivace mikroorganismů:

Kultivační vyšetření – důkaz nebo stanovení počtu mikroorganismů. Živ-

né půdy se očkují serií  nejméně tří po sobě jdoucích destinásobných ředění navážky vzorku nebo
tekutého vzorku.

Výsledky kultivace hodnotíme kvalitativně nebo kvantitativně. Počet mikroorganismů se stanoví podle
počtu kolonií vyrostlých na pevných

půdách.

Výpočet a vyjadřování výsledků:




Praktická část:

1.úkol:

         Vliv pH na růst mikroorganismů:

Do 6 zkumavek s 2,5 ml živného bujonu a 2,5 ml příslušného pufru ( pH 3,

4, 5, 6, 7, 8) naočkujeme 2 kličky bakteriální kultury Escherichia coli. In-

kubujeme 24 hod. při 37^0C. Po inkubaci odečteme nárůst mikroorganismu ve zkumavkách – zakalení
půdy a nárůst na Endově půdě.

Do 6 zkumavek s 2,5 ml sladinkové půdy a 2,5 ml příslušného pufru ( pH 3,4, 5, 6, 7, 8) naočkujeme
2 kličky kvasinky Saccharomyces cerevisiae. Inkubujeme 48 hod. při 25^0C. Po inkubaci odečteme
nárůst mikroorganismu ve zkumavkách – zakalení půdy a nárůst na Malt agaru.

Do Petriho misky vložte dva papírky Phan ke stanovení pH. Na jeden kápněte pipetou sterilní bujon,
na druhý bakteriální bujonovou kulturu. Srovnejte pH bujonu a pH bujonové kultury bakterií

2.úkol:

         Růst bakterií v tekutých půdách:

Popište charakter růstu kultury Escherichia coli v živném bujonu.

3.úkol:

         Vliv tepla na přežití bakterií:

Kultury Escherichia coli, Bacillus cereus a Staphylococcus haemolyticus byly vystaveny níže
uvedeným podmínkám a potom vyočkovány na krevní agar a Endo agar a kultivovány při 37^0 C 24 hod.
Označte, zda bakterie po vystavení uvedeným teplotám rostou, nebo ne. Které podmínky bakterie ničí
a které ne?

            50^oC -  30 min. (vodní lázeň)

            70^oC -  30 min. (vodní lázeň)

            Proudící pára – 30 min.

            120^0C – 15 min. (autokláv)


4. úkol:

          Stanovení celkového počtu životaschopných buněk:

Životaschopností bakterie se  obecně rozumí schopnost buňky vytvářet na

agarovém živném prostředí viditelné kolonie. Každá tato kolonie vzniká z jedné bakteriální buňky.

Inokulum dané bakteriální kultury Kocuria rhizophilla (kultivace 24 hod. při 37^oC) naneseme
sterilní pipetou v množství 0,1 ml příslušného  desítkového ředění (10^-4 – 10^-7) na povrch
agarové půdy v Petriho miskách. Rozetíráme pomocí sterilní zahnuté tyčinky ze skla nebo plastu
(hokejky) po povrchu agaru.

Každé ředění kultury se dávkuje samostatnou sterilní pipetou souběžně na dvě agarové misky,
k rozetírání použijeme vždy jinou sterilní hokejku.Po kultivaci (dnem vzhůru) v termostatu (24 hod.
37^oC) se počítají vyrostlé kolonie. Z jejich počtu a příslušných ředění ( vypočítává se jako
průměr ze dvou po sobě jdoucích ředění) se potom vypočítá počet mikroorganismů v objemové jednotce
původní suspenze. Pro tyto buňky je běžně používána zkratka CFU/ml nebo KTJ / ml.

Výpočet:


5. úkol:

          Protokol