Stanovení  mikrobiologických ukazatelů pitné vody, technika vyšetřování, hodnocení

Teoretická část:

Pitná voda

Definice pitné vody, základní pojmy ( mezná hodnota, nejvyšší mezná hodnota, individuální
zásobování, hromadné zásobování, vyhláška 252,2004

Mikrobiologický rozbor pitné vody.

Koliformní bakterie:

Gramnegativní tyčinky z čeledi Enterobacteriaceae, netvořící spory. Mají negativní
cytochromoxidázový test a zkvašují laktózu při 37^0C do 43 hod. za současné tvorby kyselin a
plynu.Mají podobné morfologické i fyziologické vlastnosti jako Escherichia coli. Jsou důležitým
hygienickým indikátorem fekálního znečistění pitné vody.

Mezofilní bakterie:

Mikroorganismy rostoucí na masopeptonovém agaru s optimem růstu při teplotě 37^0C. Jsou indikátorem
znečistění mikroflórou teplokrevných živočichů a člověka.

Psychrofilní bakterie:

Mikroorganismy rostoucí na masopeptonovém agaru s optimem růstu při teplotě 20^0C. Jsou indikátorem
mikrobiálního rozkladu rychle rozložitelných organických látek za nižších teplot.

Enterokoky:

Skupina grampozitivních streptokoků vyskytujících se v zažívacím traktu člověka a živočichů.Jsou
vylučovány fekáliemi do prostředí. Vyznačují se relativně vyšší jak termorezistencí, tak rezistencí
vůči fyzikálním a fyzikálně chemickým podmínkám.

Odběr a příprava vzorků.

·        Odběr provádí pracovník s odborným vzděláním

·        Při odběru nesmí dojít ke kontaminaci vzorku

·        Vzorek se odebírá do sterilní zábrusové láhve

·        Odběrová láhev se otevírá těsně před odběrem.

·        Při odběru není dovoleno dotýkat se zabroušených částí zátky a hrdla, ani se nesmí
odkládat zátka. Po uzavření se zátka překryje hliníkovou folií.

·        Při odběru z vodovodního kohoutku nebo z pumpy se voda nechá odtéct a potom se naplní
odběrová láhev

Praktická část:

1.     úkol:

Samostatný odběr pitné vody ze zdroje podle vlastního výběru.

Odběr bude proveden podle výše uvedených kriterií ze studny, studánky.

2.     úkol:

Stanovení koliformních bakterií metodou membránových filtrů.

Stanovení spočívá v zachycení mikroorganismů na membránovém filtru, kultivací na CCA agaru
(Chromogenic Coliform agar).

Přes membránový filtr se přefiltruje 100 ml vzorku vody určené pro hromadné zásobování, u vzorků
vody určené pro individuální zásobování 10 ml. Po filtraci se membránový filtr přenese pomocí
sterilní pinzety  na uvedenou půdu.Filtr musí k půdě dobře přilnout.Misky se kladou dnem vzhůru do
termostatu a kultivují při teplotě 37^0C 24 hod.

Po kultivaci membránových filtrů se všechny β- D- galaktozidáza pozitivní kolonie ( růžové až
červené) počítají jako presumptivní koliformní bakterie  , které nejsou Escherichia coli.

Všechny β- D-galaktozidáza a β- D- glukuronidáza pozitivní kolonie (tmavě modré až fialové) se
počítají jako Escherichia coli.

           Pro potvrzení presumptivních koliformních bakterií, které nejsou E.coli se

provádí oxidázový test. Použijeme komerčně dostupný oxidázový test. Pozitivní oxidázová reakce se
projeví sytě modrým zbarvením během 30s. Toto zbarvení nelze pozorovat u koliformních bakterií,
protože jsou oxidáza negativní.

3.     úkol:

Stanovení koliformních bakterií kvasnou zkouškou.

Zkouška spočívá v pomnožení koliformních bakterií v tekuté půdě při teplotě 37^0C po dobu 48 hod.
za současné tvorby kyseliny a plynu.

Do dvou zkumavek s plynovkami obsahujících 10 ml tekuté laktozové půdy (Savageova půda) se přidá 10
ml a 1 ml vzorku vody. Inkubují se v termostatu při 37^0C po dobu 48 hod. Za pozitivní výsledek se
považuje současná tvorba kyselin (sežloutnutí půdy) a tvorba plynu (bublina v plynovce), nebo pouhá
tvorba kyselin.

4.     úkol:

Stanovení enterokoků:

Stanovení enterokoků je založeno na počítání kolonií po membránové filtraci a kultivaci při 37^0 C.

Přes membránový filtr se přefiltruje 100 ml vzorku vody určené pro hromadné zásobování nebo 10 ml
vzorku vody určené pro individuální zásobování. Filtry se sterilní pinzetou  kladou do Petriho
misek na agarovou půdu s azidem sodným ( Slanetz – Bartleyova půda). Misky se kultivují 48 hod. při
37^0C.

Po kultivaci se počítají úplně i částečně červeně až tmavohnědě zbarvené kolonie.

5.     úkol:

Stanovení mezofilních bakterií:

 Stanovení je založeno na počítání kolonií mikroorganismů po kultivaci  na masopeptonovém agaru
(Plate count agar) při teplotě 37^0C.

Do dvou Petriho misek se napipetuje po 1 ml vzorku a ihned se zaleje 15 ml agaru, ochlazeného
přibližně na teplotu 45^0C. Miska se uzavře a živná půda se krouživým pohybem opatrně promísí se
vzorkem. Při míchání se půda nesmí dostat přes okraj misky. Po ztuhnutí se misky ukládají do
termostatu dnem vzhůru a kultivují se při teplotě 37^0C 48 hod. Vyrostlé kolonie se na obou Petriho
miskách spočítají, vypočítáme průměrný počet z obou misek., což je počet kolonií  v 1 ml vzorku
vody.

6.úkol:

Stanovení psychrofilních bakterií:

Stanovení je založeno na počítání kolonií mikroorganismů po kultivaci na masopeptonovém agaru při
teplotě 20^0 C.

Postup je stejný jako v úkolu č. k5, kromě toho, že po ztuhnutí se půdy ukládají dnem vzhůru do
termostatu a kultivují při teplotě 20^0 C 72 hod.

7.úkol:

Provedení cytochromoxidázového testu, odečtení výsledků kultivací.

8. úkol:

Vypracování protokolu