Novější či méně běžné metody Mirka Beňovská NGAL •Neutrofilní s gelatinázou asociovaný lipocalin • •Přítomen v tkáni plic, žaludku, tenkého střeva a ledvin •Při poškození ledvin NGAL vylučován do moči a plazmy •Časný ukazatel akutního poškození ledvin - hladina stoupá v moči a krvi během dvou hodin od vzniku poškození ledvin • NGAL •Metody: •Imunoanalýza – Abbott, Roche •Imunoturbidimetrie – zesílená na polystyrénových • částicích •ELISA – firma Bioporto (dodává Lab Mark) • •Materiál: U,P,S NGAL • • •Cut off - moč:132 ng/ml Presepsin •nový specifický marker septických stavů •rozpustný N-terminální fragment CD14 •CD14 je glykoprotein exprimovaný na povrchu membrány monocytů a makrofágů •CD 14 je receptorem pro lipopolysacharidy bakterií, navázáním se aktivuje TLR4 prozánětlivá signalizační kaskáda a zánětlivá reakce •mechanizmus vzniku presepsinu – rozštěpení membrány CD14 lysozomálními enzymy granulocytů •CD14 je uvolňován do krve a vlivem plazmatických proteáz štěpen na sCD14-ST = PRESEPSIN • • https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcR6FwKoJs9RiYS1pw17URl5KBcvW-okZZjRXHoz1hNWhcx odLKiPg Presepsin •zvyšuje se při systémové i lokální bakteriální infekci • •rychlý vzestup hladiny v krvi (cca za 2 hodiny) • •důležitá je dynamika koncentrace • •uplatnění trendu ve dnech 1-7 při předpovědi 30 denní mortality • https://encrypted-tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcShCBuN0atoEmBMd1TstfnFnXbJ6_AW7rjyATyiaV_Ae5r 7itXdGg Použitý princip • • •stanovení presepsinu na přístroji PATHFAST, Mitsubishi Chemical (dodává Medesa) • Použitý princip • • •stanovení presepsinu na přístroji PATHFAST, Mitsubishi Chemical (dodává Medesa) ochemiluminiscenční enzymová imunoanalýza o s MAGITRATION technologií oodběrový materiál – heparinát litný ocena 350 Kč/test, souprava 21000 Kč na 60 testů oneproplácen pojišťovnou • Referenční rozmezí • • Presepsin 0 - 337 pg/ml • Presepsin • •marker sepse pro diagnostiku, monitorování i prognózu podobně jako PCT • •presepsin a PCT se nechovají zcela totožně • •snižuje se pomaleji než PCT, při špatné prognóze zůstává vysoký • •jeví se jako lepší ukazatel negativní prognózy • •důležitý je trend, ne absolutní hodnota (uplatnění při • předpovědi 30 denní mortality) • •výhodné kombinovat více markerů sepse dohromady • • • • Lp-PLA2 •- fosfolipáza A2 asociovaná s lipoproteiny • •- výskyt plazma nebo sérum, •- enzym hydrolyzující oxidované fosfolipidy • uvolňuje lyzofosfatidylcholin s prozánětlivými účinky • podporuje protržení aterosklerotického plátu •- vázána na lipoproteiny o nízké hustotě • • -vysoká hladina Lp-PLA2 poukazuje na nestabilní • atrosklerotický plát, může vést k IM nebo CMP •- nízká hladina Lp-PLA2 - stabilní aterosklerotický plát • prokázána negativní prediktivní hodnota • • Stanovení Lp-PLA2 - PLAC test • •ELISA a) •Fotometrická metoda Cut off •Hodnoty Lp-PLA2 menší než 200ng/ml - nízké riziko • •Hodnoty Lp-PLA2 v rozmezí 200-235ng/ml – hraniční •riziko • •Hodnoty Lp-PLA2 větší než 235ng/ml - považovány za •vysoké riziko • Predikční markery preeklampsie, Roche •PlGF - placentární růstový faktor •zodpovědný za normální funkci placenty •u fyziologické gravidity koncentrace PlGF narůstá během • prvních dvou trimestrů a klesá na konci gravidity •u preeklampsie nižší • •sFlt-1 - rozpustná tyrozinkináza-1 •má vliv na ukončení těhotenství •hladina zůstává stabilní v prvních dvou trimestrech, pak narůstá až do porodu •u preeklampsie se sFlt-1 zvyšuje již v časných fázích gravidity •zvýšení je spojeno s ischémií a hypoxií • •Poměr sFlt-1/PlGF •citlivější ukazatel •při preeklampsii vyšší • • • Aktivita sFlt-1 a PlGF na endotelu cév během normálního těhotenství a při preeklampsii Sdělte stručný přehled prezentace. Popište hlavní záměr prezentace a v čem spočívá její důležitost. Uveďte každé z hlavních témat. Aby se posluchači dokázali v prezentaci orientovat, můžete tento snímek s přehledem opakovat během celé prezentace vždy se zdůrazněním konkrétního tématu, které se chystáte probírat jako další. Princip stanovení sFlt-1, PlGF •Heterogenní nekompetitivní imunoanalýza na systémech Roche •Protilátka značená rutheinovým komplexem •Separace na mikročásticích •Elektrochemiluminiscenční reakce - substrát tripropylamin •Oxidace na platinové elektrodě •Vznik chemiluminiscenčního záření • • • Princip stanovení sFlt-1 ROC křivka pro poměr sFlt-1/PlGF – 16.-20. týden gravidity Zdravé 81 Preeklamptičky 39 AUC = 0,863 Časná PE Zdravé 81 Preeklamptičky 16 AUC = 0,970 Očekáváné hodnoty, Roche Očekáváné hodnoty – 16.-20. týden gravidity Údaje firmy Roche Vypočítané hodnoty OKB FN Brno (81 zdravých) sFlt-1 (pg/ml) 5. perc. 708 527 95. perc. 2807 2333 PlGF (pg/ml) 5. perc. 66,2 56,6 95. perc. 289 252 sFlt-1/PlGF 5. perc. 3,5 4,4 95. perc. 25,7 22,9 Žlučové kyseliny •Hlavním produkt metabolismu cholesterolu •Různé hydroxyderiváty kyseliny cholanové •Základními žlučovými kyselinami jsou cholová a chenodeoxycholová •V organismu se zapojují do trávení, vstřebávání a metabolismu lipidů • Transportují se společně se žlučí do střeva, kde jsou z 95 % znovu resorbovány a vrací se do jater •Jsou ukazatelem správné funkce hepatocytů •Zvýšený obsah žlučových kyselin v séru je zaznamenán u pacientů s akutní hepatitidou, chronickou hepatitidou, jaterní steatózou a rakovinou jater • Indikace k vyšetření žlučových kyselin (S) • •Význam pro diagnostiku intrahepatální cholestázy těhotných (poruchu vylučování žluči do duodena) • •Ta zvyšuje riziko předčasného porodu či intrauterinní úmrtí plodu • •Sleduje se u pacientů s jaterní cirhózou • •Stanovení lze použít při studiu exkreční schopnosti jater nebo při studiu vrozených defektů metabolismu žlučových kyselin • Metody stanovení •Fotometrické stanovení o 3-α-hydroxysteroiddehydrogenasa (3-α-HSD) •žlučové kyseliny + NAD+ -->3-oxo žlučové kyseliny + NADH + H+ • NADH + NBT --> NAD + + formazan • •Formazan je měřen fotometricky při 405 nm, je přímo úměrný koncentraci žlučových kyselin •(NBT - nitrotetrazoliová modř) • •ELISA • Referenční rozmezí •M, Ž: 0-150 let do 8 µmol/l •Těhotné: do 11 µmol/l • • proGRP •Pro-Gastrin-Releasing Peptide • •Nádorový marker pro malobuněčný karcinomem plic (SCLC) •SCLC představuje agresivnější formu plicních karcinomů •ProGRP je prekurzorem GRP (GRP je neuropeptid) • proGRP - nejvhodnější marker SCLC •: •Uvolňován jen ve velmi malém množství u lidí, kteří trpí nenádorovými plicními chorobami a jinými zhoubnými nádory •Uvolňování proGRP stoupá již v ranném stádiu SCLC --> význam pro časnou detekci tumoru •Dále sledování průběhu choroby, účinnosti terapie a odhalení recidivy •Lepší než embryonální antigen (CEA) • • Rozdíly v koncentracích ProGRP u různých klinických stavů: Zdraví lidé 2 – 60 pg/ml Benigní onemocnění Většinou < 100 pg/ml (nejčastěji 15 – 80 pg/ml) Výjimka: pacienti s poruchou funkce ledvin - ProGRP zvýšeny i výrazně nad 100 pg/ml, a vzácně u některých onemocnění gastrointestinálního a urogenitálního traktu Nemalobuněčné plicní karcinomy a ostatní tumory (vyjma SCLC) < 100 pg/ml Malobuněčné plicní karcinomy > 100 pg/ml (za předp. norm. fce ledvin) při hodnotách kolem 150 pg/ml je téměř 100% jistota existence tumoru při hodnotách > 200 pg/ml se v 99% případů jedná právě o SCLC Metody stanovení •Imunoanalyticky - analyzátor Architect i 2000 SR firmy Abbott • •Dvoukroková chemiluminiscenční analýza, separace pomocí paramagnetických mikročástic • •Materiál pro analýzu: plazma, sérum • AMH (Anti- Műllerianní hormon) •Műllerian inhibiting faktor •Glykoprotein, patří mezi růstové transformující faktory (regulace tvorby a růstu malých ovariálních folikulů) •Produkován granulózními buňkami folikulů •Jeho role a množství se mění v závislosti na pohlaví a věku • Stanovení AMH •Biochemický ukazatel ovariální rezervy– hladina v krvi je odrazem „biologického věku“ vaječníků •Predikce nástupu menopauzy •Diagnostika polycystického ovariálního syndromu •Tumormarker některých typů karcinomů •Vyšetření u nejasného genitálu u novorozenců • • Význam v asistované reprodukci •Korelace hladiny AMH s počtem rostoucích folikulů a ziskem oocytů ve stimulovaných cyklech •Predikce odpovědi na kontrolovanou ovariální stimulaci (COS) •Vyšetření potenciálních dárkyň oocytů • • Metody stanovení •Automatická imunoanalýza – systémy Beckman • •ELISA Příklad interpretace hodnot AMH Prognosticky špatné AMH < 0,7 ng/ml Zdroj: www.advancedfertility.com Aktivní vitamín B12 •Vitamin B12 je esenciální pro různé buněčné funkce (syntéza DNA) • •Deficience vitaminu B12 způsobuje únavu, perniciózní anémii, zhoršení neurologických funkcí • •Příčinou deficience vitaminu B12 bývá malabsorpce, chronická závislost na alkoholu, dieta vegetariánská nebo veganská, věk nad 60 let Aktivní vitamín B12 •Přibližně 20 % cirkulujícího B12 vázáno na transportní protein transkobalamin (TC) • •Komplex se nazývá holotranskobalamin • (holoTC) • •Představuje metabolicky aktivní formu B12 • •Podle recentních studií je holoTC lepší marker než celkový B12 •Slouží k detekci subklinické deficience vitaminu B12 • •Časnější ukazatel vyčerpání zásob B12 v organismu Metoda stanovení akt. B12 • • •Elektrochemiluminiscence, cobas 6000 nebo cobas 8000,Roche • •Chemiluminiscence, Advia Centaur, Siemens Stanovení tau proteinu celkového, tau proteinu fosforylovaného a beta amyloidu v likvoru • •Využívá se u pacientů •S neurodegenerativním onemocněním, zejména s Alzheimerovou chorobou •S hydrocefalem • •Počítá se také poměr tTau/Abeta42 a pTau/Abeta42 • •Klinika: •V mozku pacientů s tímto onemocněním je tau protein hyperfosforylovaný •Beta amyloid (1-42), bývá u Alzheimerovy choroby naopak snížený vzhledem k jeho agregaci a ukládání v placích • Stanovení tau proteinu celkového, tau proteinu fosforylovaného a beta amyloidu v likvoru • • •Stanovení • •ELISA stanovení •Pomocí automatizovaných imunochemickch metod firmy Roche • GDF-15 (Growth diferentiation factor) •Zvyšuje se u kardiovaskulárních onemocnění • •Marker celkové mortality, mortality z kardiovaskulárních příčin • •Monitoruje srdeční selhávání a atriální fibrilaci • •Zvyšuje se rovněž u pacientů s některým druhem karcinomu • •Má prognostický význam a je součástí ABC skóre rizika krvácení u pacientů se srdečním selháváním GDF-15 • •Stanovení • •ELISA stanovení •Pomocí automatizovaných imunochemickch metod firmy Roche • •