Základní metody výzkumuZákladní metody výzkumu Základy metodologie Empirické metodyEmpirické metody Logické metodyLogické metody Metody vyhodnocení získaných dat Nevědecké (alternativní) přístupy v medicíněNevědecké (alternativní) přístupy v medicíně Prof.MUDr. Augustin Svoboda,CSc. Biologický ústav LF MU BrnoBiologický ústav LF MU Brno MetodologieMetodologie pojednává o tom, jak se poznává. Jejím předmětem jsou poznávací metody. Zajímá se o jejich používáníjsou poznávací metody. Zajímá se o jejich používání a o jejich vývoj – tak jak postupuje poznání. Metoda ( z lat. methodus) je způsob, jak se získávají a vyjadřují vědecké poznatky a jak se s poznatkya vyjadřují vědecké poznatky a jak se s poznatky zachází. V užším slova smyslu je metodologie nauka o tom,V užším slova smyslu je metodologie nauka o tom, jak při vědeckém studiu klást správně otázky a jak najak při vědeckém studiu klást správně otázky a jak na ně hledat odpovědi. Metodologie biologických věd,Metodologie biologických věd, mezi něž patří také lékařství, se nezajímá ani tak o předmět biologického studia, aleani tak o předmět biologického studia, ale především o způsob, jak se předmětpředevším o způsob, jak se předmět zkoumá. Metodologie genetiky se tedy nezajímá o dědičnost, ale jak se dědičnost zkoumá:dědičnost, ale jak se dědičnost zkoumá: metody křížení, cytogenetické postupy, metody molekulární genetikymetody molekulární genetiky Metodologie vědy se rozvíjí většinouMetodologie vědy se rozvíjí většinou současně s rozvojem poznání v tom kterém oboruoboru Např. studium struktury a funkce buňky stimulujeNapř. studium struktury a funkce buňky stimuluje vývoj příslušných metod Příklad: mikroskopie v procházejícím světle fázový kontrastfázový kontrast elektronová mikroskopie fluorescenční mikroskopiefluorescenční mikroskopie imunofluorescenční mikroskopie konfokální mikroskopiekonfokální mikroskopie Mikroskopické metody studia kvasinkových buněk – světelný mikroskop Procházející světlo Fázový interferenční Fázový -obrácený fluorescenčníFázový -obrácený fluorescenční Elektronová mikroskopie kvasinkových buněk Ultratenký řez, fixovaná buňka Mrazové lámání, buňka fixovaná reversibilně Ultratenký řez, fixovaná buňka Metodologie biologických věd jeMetodologie biologických věd je ovlivněna dvěma specifickými znaky živých soustav, které mají vliv naživých soustav, které mají vliv na vědeckou přesnost výpovědívědeckou přesnost výpovědí biologických věd: • systémovost• systémovost • proměnlivost a adaptabilita• proměnlivost a adaptabilita (přizpůsobivost) Systémovost:Systémovost: Každá složka živých soustavKaždá složka živých soustav je subsystémem výše organizovaného subsystému:subsystému: Systémová analýza společenstva • molekuly • komplexy molekul Buňky TK • komplexy molekul • organely. • kompartmenty • buňky• buňky • tkáně • orgány Buňky ledvinné tkáně • orgánové soustavy • jedinec • populace • společenstvo Struktura a chování buňky • společenstvo Struktura a chování buňky závisí na jejím okolí – zda je subsystémem tkáně nebo je buňkou samostatnoubuňkou samostatnou 2. Proměnlivost a přizpůsobivost2. Proměnlivost a přizpůsobivost (adaptace)(adaptace) Organismus nebo buňka nemusí reagovat naOrganismus nebo buňka nemusí reagovat na stejný podnět stejným způsobem, jako např. molekula NaCl, která disociuje vždy na Na + Cl.molekula NaCl, která disociuje vždy na Na + Cl. Živý organizmus může v mezích svého genotypu volit některou z alternativ svého chování, svévolit některou z alternativ svého chování, své reakce na podnět: měnit intenzitu, rychlost a směr reakce, přizpůsobit se a učit se..se a učit se.. Sporulace u bakterií v důsledku hladovění Dimorfizmus u kvasinkyDimorfizmus u kvasinky Trigonopsis variabilis: triangulární buňky - v mediu bohatém na aminokyselinybohatém na aminokyseliny Elipsovité buňky – v mediu chudémchudém Mnohé děje v živých soustavách jsouMnohé děje v živých soustavách jsou z hlediska určité rozlišovací úrovně deterministické nebo pravděpodobnostnídeterministické nebo pravděpodobnostní (stochastické )(stochastické ) (poznatky, které určitý děj popisují , jsou pak jednoduše(poznatky, které určitý děj popisují , jsou pak jednoduše definované nebo jsou to poznatky statistické) Příklad: tok genetické informace: DNA → RNA → bílkovina – děj deterministický utváření výšky postavy (170 +- 20 cm) – děj stochastický Poznatek obsahuje informaci o skutečnosti. Může být vyjádřenbýt vyjádřen – slovně (verbálně): slovní tvrzení, závěr z pokusu, hypotéza aj. (každá buňka obsahuje jádro)hypotéza aj. (každá buňka obsahuje jádro) – neverbálně – matematickou rovnicí, grafem, chemickým vzorcem (Na + Cl = NaCl)vzorcem (Na + Cl = NaCl) Základní termíny metodologie biologických věd: Metoda: způsob poznávání, určený souborem pravidel,Metoda: způsob poznávání, určený souborem pravidel, kterými se řídíme (elektronová mikroskopie) Metodika: technika, způsob výkonu určité vědecké činnostiMetodika: technika, způsob výkonu určité vědecké činnosti Např. technika ultratenkých řezů, DNA hybridizace in situ Objekt - předmět výzkumu.Objekt - předmět výzkumu. Objektivní: nalézající se mimo nás, mimo našeObjektivní: nalézající se mimo nás, mimo naše vědomí (např. lymfocyty v mikroskopickém preparátu) Subjekt: člověk a jeho vědomí. Subjektivní: vlastní člověku a jeho vědomí.Subjektivní: vlastní člověku a jeho vědomí. Např. subjektivní chyba v pozorování – popis barvy či tvaruNapř. subjektivní chyba v pozorování – popis barvy či tvaru pozorovaného objektu Vědecký jazyk: množina uspořádaných znaků aVědecký jazyk: množina uspořádaných znaků a termínů, jimiž se vyjadřuje poznaná skutečnost. Např. věta: DNA molekula je tvořena dvěma řetězciNapř. věta: DNA molekula je tvořena dvěma řetězci polynukleotidových řetězců, které jsou spojeny vodíkovými vazbami.vazbami. Termín – odborný název.Termín – odborný název. např. chromosom, DNA, mikroskop,PCR Pojem je myšlenkový obraz určité skutečnosti vyjádřený temínem Termín červená krvinka je odborný termín. Krvinka je myšlenkový obraz pozorovaného erytrocytu doplněný o další poznatky, zjištěné studiemstudiem Definice: vyjadřuje nejpodstatnější, nejcharakterističtější a stálé znaky pojmu, které jej odlišují od pojmů ostatních.stálé znaky pojmu, které jej odlišují od pojmů ostatních. Prokaryont je pojem definovaný cirkulárním chromosomem a nepřítomností mitózy.a nepřítomností mitózy. Bakterie vyhovuje této definici a proto je prokaryont Gen je úsek polynukleotidového řetězce, nesoucí informaciGen je úsek polynukleotidového řetězce, nesoucí informaci pro struktury bílkoviny nebo pro RNA, která nepodléhá translaci Hypotéza (domněnka) je neověřený výrok, založený na ověřitelných předpokladech.založený na ověřitelných předpokladech. Příklad: Mitochondrie vznikly endosymbiózou bakterií Teorie: soubor tvrzení, které popisují a vysvětlujíTeorie: soubor tvrzení, které popisují a vysvětlují jevy v rozsáhlé oblasti skutečnosti Příklad: evoluční teoriePříklad: evoluční teorie Zákon: výpověď, která přesně a jednoznačně vyjadřuje všeobecnou platnost a neměnnost určitévyjadřuje všeobecnou platnost a neměnnost určité skutečnosti Z hlediska závislosti na vnějších podmínkách se rozlišujíZ hlediska závislosti na vnějších podmínkách se rozlišují zákony dynamické a zákony statistické Příklad: Archimedův zákon, Newtonovy zákony – jsou dynamickéPříklad: Archimedův zákon, Newtonovy zákony – jsou dynamické Hardyův a Weinbergův zákon o stálém poměru genotypů v populaci – platí za určitých podmínek – zákon statistický Biologické zákony jsou statistického charakteru – vztahují se na hromadné jevy Skutečnost vnímáme smysly, jejichžSkutečnost vnímáme smysly, jejichž účinnost zesilujeme přístroji (mikroskop, elektroforéza).elektroforéza). Nové poznatky pak získáváme empirickýmiNové poznatky pak získáváme empirickými metodami - pokusem, pozorováním a měřením.měřením. Těmito postupy získáváme objektivníTěmito postupy získáváme objektivní údaje, data. Získaná data hodnotíme metodami teoretickými (logickými) –metodami teoretickými (logickými) – indukcí, dedukcí, analýzou, syntézou, srovnávánímsrovnáváním Empirické metodyEmpirické metody objektivní údaje vědecké poznatky Teoretické metodyTeoretické metody Pomocí empirických metod získávámePomocí empirických metod získáváme objektivní údaje – data Objektivní údaje: informují o skutečnostiObjektivní údaje: informují o skutečnosti existující nezávisle na subjektuexistující nezávisle na subjektu (pozorovateli), takže mohou být kdykoliv a kdekoliv opakovány.kdekoliv opakovány. Empirické poznatky jsou založeny na určitémEmpirické poznatky jsou založeny na určitém počtu pozorování a pokusů Pozorování:Pozorování: - soustředěné, záměrné vnímání tvaru a vlastností předmětů a jevů. Je to odrazvlastností předmětů a jevů. Je to odraz skutečnosti zprostředkovaný smysly a upřesňovaný pomocí přístrojů.upřesňovaný pomocí přístrojů. 50 let věděli bádatelé, že v jádře lidských buněk jsou50 let věděli bádatelé, že v jádře lidských buněk jsou chromosomy, než dospěli k správnému závěru o jejich počtu. V r. 1909 – Winniwater zjistil 47 chromosomů, Painter v r. 1933 48 chromosomů a správný počet – 46 počtu. V r. 1909 – Winniwater zjistil 47 chromosomů, Painter v r. 1933 48 chromosomů a správný počet – 46 byl zjištěn teprve v r. 1955 (Hansen – Melanderová) a definitivně potvrzen v r. 1960definitivně potvrzen v r. 1960 Pozorování zahrnuje subjektivní i objektivní chyby.Pozorování zahrnuje subjektivní i objektivní chyby. Chromosomy v lidských buňkáchChromosomy v lidských buňkách Chromosomy značené technikou FISH Metoda proužkování chromosomů Mitotické chromosomy v elektronovém mikroskopu Měření: určování kvantitativních vlastnostíMěření: určování kvantitativních vlastností biologických objektůbiologických objektů rozměry, počty - výška, váha, tepová frekvence, počty krevních buněk atd.krevních buněk atd. Upřesňuje se pomocí přístrojů Bürkerova komůrka se nahrazuje různými cytometry podobně jako hladiny různých molekul v plasmě – nikolivpodobně jako hladiny různých molekul v plasmě – nikoliv např. vážením ale sofistikovanými přístroji Experimentování – pozorování nebo měření za podmínek, které určuje výzkumný pracovníkurčuje výzkumný pracovník Má 2 podoby: • buď měníme jednu z vnějších podmínek nebo působíme novým faktoremnebo působíme novým faktorem (promýváme červené krvinky od plasmy- vodou nebo solným roztokem a pozorujeme změnu tvarunebo solným roztokem a pozorujeme změnu tvaru ery.) • nebo zevní podmínky zůstávají stejné a měníme určité vlastnosti objektuměníme určité vlastnosti objektu (nejprve ozařujeme určitou dávkou záření mladé krysy a pak staré, nebo samce a pak samičky)krysy a pak staré, nebo samce a pak samičky) Kontrolní pokus: probíhá současně s vlastním pokusem . Nepůsobíme vlastním faktorem ale např.Nepůsobíme vlastním faktorem ale např. neutrálním. Účinek antibiotika na bakterie – antibiotikum je rozpuštěno v metanolu a tak v kontrolním pokuserozpuštěno v metanolu a tak v kontrolním pokuse zjišťujeme, zda samotný metanol nepůsobí na bakterie Pokus heuristický – odpovídáme naPokus heuristický – odpovídáme na otázku: co se stane, když... Pokus ověřovací - stane se skutečně to, když udělám to a to...?když udělám to a to...? Např. Fleming si všiml, že kolonie bakterií se neobjevují v blízkosti kolonií plísně Peniciliumneobjevují v blízkosti kolonií plísně Penicilium notatum“, zjišťoval pak, jak na bakterie působí lyzát plísnílyzát plísní Když zjišťujeme citlivost izolovaného bakteriálního kmene na paletu antibiotik,děláme zpravidlakmene na paletu antibiotik,děláme zpravidla ověřovací pokus Schema pokusuSchema pokusu 1. Studium literatury 2. formulace problému (otázky) 3. zvolení metodiky, materiálu3. zvolení metodiky, materiálu 4. provedení pokusu a zjišťování výsledků 5. hodnocení výsledků 6. závěr – vlastní odpověď na položenou6. závěr – vlastní odpověď na položenou otázku Např. podstata krevních skupin systému AB0Např. podstata krevních skupin systému AB0 Teoretické (logické) metodyTeoretické (logické) metody Údaje zjištěné empirickými metodami – empirické výsledky – jsou pouze výchozím materiálem, který se dále– jsou pouze výchozím materiálem, který se dále zpracovává teoretickými (logickými metodami. Žádná empirická věda se nemůže spokojit pouze s registrováním poznatků. Pomocí logických metod z nich vyvozuje obecněji platné závěry.vyvozuje obecněji platné závěry. Vědecké poznání používá dva logické postupy pro dalšíVědecké poznání používá dva logické postupy pro další zpracování dat: indukce a dedukce V konkrétní aplikaci se oba postupy doplňují a hovoříme oV konkrétní aplikaci se oba postupy doplňují a hovoříme o induktivně – deduktivní metodě vědy Indukce:Indukce: vyvozování závěrů z jednotlivých méně obecnýchvyvozování závěrů z jednotlivých méně obecných dat: Induktivní postup probíhá podle schématu:Induktivní postup probíhá podle schématu: 1. Hodnocení dat získaných pozorováním a pokusy 2. Předběžné zhodnocení výsledků v podobě pracovní2. Předběžné zhodnocení výsledků v podobě pracovní hypotézy 3. Ověřování hypotézy novým pozorováním a pokusy 4. vyvození obecného závěru případně stanovení zákona4. vyvození obecného závěru případně stanovení zákona Příklad: Buněčná teorie, Rozdělení buněk na prokaryota aPříklad: Buněčná teorie, Rozdělení buněk na prokaryota a eukaryota Dedukce – logický postup, kdy vyvozujeme z obecných– logický postup, kdy vyvozujeme z obecných předpokladů závěry jiné obecné závěry nebo ipředpokladů závěry jiné obecné závěry nebo i dílčí závěry , které se vztahují na jednotlivé případypřípady Příklad: V 19. stol. mikrobiologie prokázala bakteriální původce některých chorob a induktivně bylo zobecněno,původce některých chorob a induktivně bylo zobecněno, že všechny choroby určitého typu jsou vyvolány bakteriemi. Deduktivním postupem bylo usuzováno, žebakteriemi. Deduktivním postupem bylo usuzováno, že bakterie jsou původcem i dalších infekčních chorob. To bylo u některých chorob potvrzeno, u jiných chorob sebylo u některých chorob potvrzeno, u jiných chorob se našly jiné mikroorganismy plísně, prvoci, resp. virusy Při induktivně deduktivních postupech sePři induktivně deduktivních postupech se uplatňují i další méně obecné metody: Metoda srovnávání Analýza a syntézaAnalýza a syntéza Analogická metoda Modely a modelování Modelové organismy: zvířata, tkáně, buňky Zákony, hypotézy a teorieZákony, hypotézy a teorie Vztahy mezi poznanými vědeckými poznatkyVztahy mezi poznanými vědeckými poznatky mají různý charakter, který vyjadřujeme uvedenými termíny.uvedenými termíny. Zákon, vědecký zákon, vyjadřuje určitý, konstantní vztah mezi věcmi a procesykonstantní vztah mezi věcmi a procesy v určité oblasti skutečnosti, který vyplýváv určité oblasti skutečnosti, který vyplývá z jejich struktury a uspořádání a který se projevuje v jejich interakci.projevuje v jejich interakci. Vědecký zákon vyžaduje přesnou formulaci z přesných dat.z přesných dat. V přírodních vědách existují 2 typy zákonůV přírodních vědách existují 2 typy zákonů zákony dynamické (podmínky relativně stálé,zákony dynamické (podmínky relativně stálé, nezávislé na jiných:nezávislé na jiných: Newtonovy zákony pohybu těles ve sluneční soustavě, Archimedův zákon)Archimedův zákon) zákony statistické – vztahují se na hromadné jevy v celku, neplatí pro jednotlivé případyv celku, neplatí pro jednotlivé případy hromadného jevu. Mendlovy zákony: při křížení homozygotů se objeví znakyMendlovy zákony: při křížení homozygotů se objeví znaky homozygotních rodičů v poměru 3:1, dědičnost pohlaví 1:11:1 Metody vyhodnocování vědeckých faktMetody vyhodnocování vědeckých fakt Variabilita (proměnlivost živých organismů je příčinou nejednoznačné odpovědi v pozorování a pokuse Při měření hodnoty určitého znaku (výšky postavy) vPři měření hodnoty určitého znaku (výšky postavy) v souboru jedinců dostaneme množinu dat, které se pohybují v určitém rozsahu. Tuto variabilitu lze měřitpohybují v určitém rozsahu. Tuto variabilitu lze měřit statistickými postupy: • Měření průměrných hodnot• Měření průměrných hodnot • Charakteristiky variability Průměrné hodnoty:Průměrné hodnoty: Aritmetický průměr je dán vztahem: ∑ n 1 ∑= = n i ix n x 1 1 n … počet provedených paralelních měření sledované veličiny xi … naměřená hodnota sledované veličiny pro i-té měření medián - střední hodnota z výběru seřazeného podle velikosti - při jeho určení z velkého souboru dat zcelavelikosti - při jeho určení z velkého souboru dat zcela ztrácíme informace obsažené ve všech výsledcích kromě jednoho či dvou výsledkůjednoho či dvou výsledků modus – nejčetnější hodnota znaku Směrodatná odchylkaSměrodatná odchylka Směrodatná odchylka je jednou z nejpoužívanějších měrSměrodatná odchylka je jednou z nejpoužívanějších měr kolísavosti výkonnosti fondu. Vyjadřuje rozptyl hodnot kolem střední hodnoty, tj. vypovídá o tom, jak se hodnotykolem střední hodnoty, tj. vypovídá o tom, jak se hodnoty od této střední hodnoty (průměru) liší, resp. jak hustě jsou kolem tohoto průměru seskupeny.kolem tohoto průměru seskupeny. Obecně se vypočítá dle vzorce: ( ) n ( ) 1 2 − = ∑= xx n i i σ 1 1 − = = n i σ kde xi je hodnota i-tého pozorování, n je počet pozorování a je průměrná hodnota všech pozorovánía je průměrná hodnota všech pozorování ModusModus Medián VariačníVariační šíře Gaussova křivka Gaussova křivka – křivka charakterizující normální rozdělení statistické veličiny, tj. např. některých kvantitativních znaků v populaci výšky, tlakuveličiny, tj. např. některých kvantitativních znaků v populaci výšky, tlaku krve aj.. Má charakteristický „zvonovitý“ tvar s maximem výskytu průměrných veličin a s poklesem směrem k oběma extrémům Hladina cholesterolu u zdravých lidí a lidí se zvýšeným rizikemHladina cholesterolu u zdravých lidí a lidí se zvýšeným rizikem arteriosklerózy Při všech měřeních vznikají chyby, jimiž jsou výsledkyPři všech měřeních vznikají chyby, jimiž jsou výsledky zatíženy Chyby se dělí na:Chyby se dělí na: chyby náhodné - vyskytují se nepravidelně, lze je statisticky vyhodnotit chyby systematické - lze je předvídat a vypočítat,chyby systematické - lze je předvídat a vypočítat, provést korekci výsledků chyby hrubé - lze jim zabránit pečlivou pracíchyby hrubé - lze jim zabránit pečlivou prací Systematické chyby se nejčastěji dělí podle svých zdrojů na:Systematické chyby se nejčastěji dělí podle svých zdrojů na: chyby přístrojů - všechna zařízení mají určitou konečnou hranici přesnostihranici přesnosti chyby chemikálií - všechny chemikálie obsahují určitá malá množství nečistot chyby metod - způsobené například určitou rozpustnostíchyby metod - způsobené například určitou rozpustností sraženiny chyby subjektivní - způsobené například špatným odečtemchyby subjektivní - způsobené například špatným odečtem spotřeby na byretě Nevědecké (alternativní) přístupy v medicíněNevědecké (alternativní) přístupy v medicíně Homeopatie Akupunktura Jiné metody léčitelství a diagnostikyJiné metody léčitelství a diagnostiky Psychotronika, aurikulodiagnostika, iridodiagnostika ajiridodiagnostika aj Homeopatie je založena přibližně na deseti principech. Mezi nejdůležitější z nich patříprincipech. Mezi nejdůležitější z nich patří • Léčba podobného podobným (similia similibus curentur • Velmi malé dávky, případně až princip nekonečně malého dávkování• Velmi malé dávky, případně až princip nekonečně malého dávkování resp. infinitezimálního ředění • Metody a léčiva se volí podle příznaků bez zkoumání patologických• Metody a léčiva se volí podle příznaků bez zkoumání patologických procesůÚčinky přípravků musí být testovány na zdravých lidech, protože na nemocných je nelze rozlišit od projevů nemoci • Skeptický výkladový slovník (J.Heřt) označuje homeopatii za absurdní výmysl, který dnes nemá žádné opodstatnění, její principy jsou v příkrém rozporu s přírodními zákony i s vědeckými poznatky a lze je snadno vyvrátit věcnými ivědeckými poznatky a lze je snadno vyvrátit věcnými i logickými argumenty Happening 10:23Happening 10:23 30. ledna 2010 v 10:23 uspořádali britští skeptici po celé Anglii protestní happeningskeptici po celé Anglii protestní happening 10:23, během kterého se veřejně10:23, během kterého se veřejně "předávkovali" údajně velmi silnými homeopatickými léky - demonstrativněhomeopatickými léky - demonstrativně spolkli celé balení (až 100 cukrovýchspolkli celé balení (až 100 cukrových tabletek). Bez jakýchkoli účinků. Empiricky tak prokázali neexistenciEmpiricky tak prokázali neexistenci proklamovaných účinků.proklamovaných účinků. Akupunktura je léčebná metoda, která patří doAkupunktura je léčebná metoda, která patří do systému tradiční čínské medicíny. Jedná se o nabodávání jehel do akupunkturníchJedná se o nabodávání jehel do akupunkturních bodů na lidském těle. Podle tradiční čínské nauky leží tyto body na akupunkturních drahách nebolileží tyto body na akupunkturních drahách neboli drahách energie, tzv. meridiánech. Těmi podle této nauky proudí životní energie čchi a jsou spojeny s jednotlivými orgány. Akupunktura sespojeny s jednotlivými orgány. Akupunktura se snaží předcházet nerovnováze v toku této hypotetické energie a odstraňovat ji.hypotetické energie a odstraňovat ji. Vědecky se dosud nikdy nepodařilo prokázat existenci akupunkturních bodů a drah.existenci akupunkturních bodů a drah. AurikulodiagnostikaAurikulodiagnostika Na povrchu boltce lze najít aktivní body o velikosti asi 0,2 mm, které odpovídají tělesným orgánům. Drážděním těchtomm, které odpovídají tělesným orgánům. Drážděním těchto bodů lze orgány aktivovat, zklidňovat atd. Irisdiagnostika:projekce orgánů lidského těla do duhovky Změny barvy a struktury duhovky mohou upozornit na nemocný orgán a naZměny barvy a struktury duhovky mohou upozornit na nemocný orgán a na povahu jeho postižení