Přehled histologických barvení BARVENÍ • zviditelnění struktur v řezu – buňka a její součásti vykazují afinitu k barvivům dvou skupin: • zásaditá /bazická/ barviva („jaderná“) – reagují s kyselými strukturami buněk a tkání (NK v jádře aj.) bazofilie – bazofilní struktury • kyselá barviva („cytoplazmatická“) – reakce se zásaditými strukturami acidofilie – acidofilní struktury v buňce - chromofilní = chromatofilní/ x chromofobní - polychromatofilní – afinita k oběma druhům barviv RUTINNÍ BARVENÍ: HEMATOXYLIN – EOSIN (HE) Hematoxylin – zasaditý Eosin – kyselý • Postup: • Odstranění parafinu xylenem • Rehydratace „sestupnou“ řadou alkoholů (100% 96% 80%) • Barvení hematoxylinem  jádra - modro-fialová • Diferenciace kys. alkoholem a vodou (odstranění přebytku barviva) • Barvení eosinem  růžová - cytoplazma, vazivo, svaly • Praní ve vodě (odstranění přebytku barviva) • Dehydratace „vzestupnou“ řadou alkoholů (80% 96%) • Projasnění v xylenu xylen I xylen II 100% 96% H2O hematoxylin kyselý etanol etanol etanol xylen IV xylen III 100% 96% H2O eosin H2O etanol etanol HEMATOXYLIN – EOSIN (HE) deparafinace rehydratace praní barvení diferenciace projasnění dehdyratace praní barvení praní ≈ řada boxů (kyvet) s barvicími médii TYPY BARVENÍ • rutinní, přehledná – HE, AZAN (demonstrují všechny zákl. složky) • speciální – vizualizace vybraných struktur – Massonovy trichromy: žlutý - HEŠ, modrý - AZAN, zelený trichrom (kolag.vlákna) – orcein, aldehydový fuchsin (elast.vlákna) aj. • impregnační – AgNO3 (nervová nebo retikulární vlákna) MONTOVÁNÍ • uzavření preparátu – kapkou montovacího media a krycím sklíčkem  trvalý preparát – rozpustná v xylenu – kanadský balzám – rozpustná ve vodě – glycerin-želatina, arabská guma Hematoxylin Eosin (HE) Výsledek barvení: jádra buněk – modrofialová cytoplazma – růžová kolagenní vlákna – růžová svalové buňky – červené 2 – Apex linguae (HE) Hematoxylin Eosin Šafrán (HEŠ) Výsledek barvení: jádra buněk – modrofialová cytoplazma – růžová kolagenní vlákna – žlutá žlutý Massonův trichrom 11 – Oesophagus (HES) Azokarmin Aniline blue Orange G (AZAN) Výsledek barvení: jádra buněk – purpurová cytoplazma – růžová kolagenní vlákna – modrá erytrocyty – oranžové modrý Massonův trichrom 99 – Pupečník (AZAN) Impregnace AgNO3 68 – Lien (impregnace) Speciální metody barvení Prep. 28 – elastická chrupavka Barvení – orcein Výsledekt – purpurová elastická vlákna Speciální metody barvení Prep. 31 – kůra ledviny Barvení – Weigert-van Giesson Výsledek – třešňově červená kolagenní vlákna Speciální metody barvení Prep. 49 – vagina - glykogen Barvení – Bestův karmín Výsledek – tmavě růžový glycogen Speciální metody barvení Prep. 65 – myocard Barvení – Heidenhain Výsledek – černé kardiomyocyty Speciální metody barvení Prep. 76 – cortex cerebri Barvení – impregnace Výsledek – hnědé buňky, nerv. vlákna hnědočerná Speciální metody barvení Prep 68 – lien Barvení – impregnace Výsledek – černá retikulární vlákna Speciální metody barvení Prep. 78 – cerebellum Barvení – Nissl Výsledek – modře gER, jádro, jadérko Speciální metody barvení Prep. 95 – kost Barvení – Schmorl Výsledek – rezavě hnědá kostní tkáň Speciální metody barvení Prep. 87 – nerv - myelin Barvení – luxolová modř Výsledek – modrý myelin 2 – Apex linguae (HE) 11 – Oesophagus (HEŠ) 99 – Pupečník (AZAN) 68 – Lien (impregnace) 64, 65 – Myokard (HE, Heidenhain) Preparáty : Základní barvicí metody v histologii Čísla u preparátů odkazují na umístění v setu v mikroskopickém sále, ne v online atlasech. Umožní vám se k preparátům snadno vrátit po obnovení výuky.