Automatické imunochemické analyzátory •Automatizace koncem 80. let •Uplatnění pro analyty s nízkou koncentrací (nmol/l, pmol/l) •Využití reakce antigen – protilátka •Značená protilátka (případně antigen) •Většinou heterogenní imunoanalýza (imunokomplex či jeho část se naváže na paramagnetické částice, případně kuličku) •Doba analýzy 15 – 60 min •Detekce s vysokou citlivostí (chemiluminiscence, elektrochemiluminiscence, fluorescence..) • • • • Automatické imunochemické analyzátory •Základní postup: • smíchání komponent • inkubace – vznik imunokompexu antigen - protilátka • separace (v případě heterogenní imunoanalýzy, • časté využití magnetu) • reakce značenky komplexu antigen – protilátka • s chemickou látkou startující reakci s detekovatelným • efektem • detekce (př. chemiluminiscence) Automatické imunochemické analyzátory • •Jedná se o zcela uzavřené systémy – pouze pro reagencie výrobce přístroje • •Kazetový systém reagencií - ready to use (ve většině případů) • •Jsou opatřeny čtečkou čárového kódu, detekcí sraženiny, zpracovávají vzorky po pacientech - Random Access • •Reagenční nádobky na jedno použití • •Cena imunochemických vyšetření poměrně vysoká - běžně mezi 50 – 200 Kč • •Principy jednotlivých firem se liší typem značenky, separace a detekce • • Analyzátory na heterogenní imunoanalýzu Advia Centaur (Siemens) • ADVIA Centaur je plně automatizovaný chemiluminiscenční analyzátor • • Výkon: 240 stanovení za hodinu, analýza trvá15 minut • • Princip měření: Chemiluminiscence • - Vytvoří se imunokomplex, značí se acridinium esterem (chemiluminiscenční látka) a naváží se na něj paramagnetické částice (Fe2O3). • - Komplex se od nezreagovaných částí oddělí magnetickou separací. • - Značka (acridinium ester) se v alkalickém prostředí • oxiduje H2O2 za vzniku chemiluminiscenční reakce. • - Systém měří kvantitativní množství • emitovaného světla (citlivost 10-15 ). • • • centaur Advia Centaur (Siemens) •Reagencie: • Kazetový chlazený zásobník s 30 pozicemi - neustále • promíchávány • Vkládání reagencií za provozu • Automatická kontrola hladiny reagencie • •Reagenční nádobky: akrylové, na jedno použití • •Kalibrace: Kalibrační křivka se vkládá do analyzátoru pomocí čtečky čárového kódu načtením. Master křivky z příslušného setu. Attelica (Siemens) • \\fnbrno.cz\tree\home\27232\My Pictures\Atellica ic.png Atellica (Siemens) • •Integrovaný systém pro imuno i klinickou chemii – nová řada Siemens, jméno Atellica pro všechny analyzátory (hematologie, močová analýza) • •Mohou být spojeny až 3 Atellica IM (imunochemické) analyzátory • •Atellica IM 1300 analyzátor : až 220 testů/ hod. • Atellica IM 1600 analyzátor: až 440 testů/ hod. • •Posun vzorků (Sample Handler) pomocí patentované Atellica Magline™ - posun vzorků na magnetickém polštáři • •Při pipetování se vytvoří vnitřní alikvot s objemem dle požadovaných testů a vzorek hned pokračuje dál k další analýze a systém potom z vnitřního alikvotu pipetuje pro jednotlivé imunochemické metody. • • Atellica (Siemens) • •Kontroly a kalibrátory jsou chlazené na palubě, automaticky prováděné dle nastavení a mohou je využívat všechny spojené analyzátory • •Třídící plocha (rozdělí vzorky na ty, které mají požadavky pro Atellicu a ty další) • •Připravuje se: odzátkovač • cobas e411 (Roche) • •Imunochemické systémy Roche jsou založeny na elektrochemiluminiscenci (ECL)- mimořádná citlivost, široký měřící rozsah a rychlost stanovení • •Jedná se o benchtop analyzátor s kapacitou 86 t/hod • •Operační systém je založen na vkládání dat prostřednictvím dvourozměrného čárového kódu E2010 cobas e411 (Roche) •přístroj je vybaven funkcí detekce hladiny, sraženiny či pěny • •kontinuální promíchávání magnetických mikročástic • •jednorázové špičky - minimalizují kontaminaci • •18 pozic pro reagenční soupravy a předzpracující reagencie a diluenty --> maximálně 15 různých metod cobas e411 (Roche) • • Inkubační jednotka (37 ± 0,5 oC): • •Zde probíhá imunochemická reakce (reakce s protilátkou - případně antigenem - značenou rutenium(II) tris-bipyridylovým komplexem a paramagnetickými částicemi • •Délka inkubace – 9 , 18 nebo 27 minut (časy prakticky odpovídají délce reakce – 9 minut pro statimové metody,18 rutina, 27 metody, při kterých se analyt nejprve musí uvolnit z endogenních vazeb – př. B12 ) • •Po ukončení reakce je reagenční cup s reakční směsí nadávkován do měřící cely cobas e411 (Roche) •Měřící jednotka: • •Obsahuje fotonásobič, průtokovou měřící celu, magnetickou jednotku a zesilující obvod (teplota 28 ± 0,5 oC) • •K elektrochemiluminiscenci dochází po vložení napětí na elektrodu a reakci imunokomplexu značeného Ru2+ s přidaným substrátem (tripropylamin -TPA) • •Při elektrochemiluminiscenci - vysocereaktivní látky reagují na povrchu elektrody a produkují světlo • • • Další imunochemické systémy Roche - princip elektrochemiluminiscence (stejný jako cobas e411) • •moduly e601 s výkonem 170 testů/hod. (přístroj cobas 6000) • •moduly e602 s výkonem 170 testů/hod. (cobas 8000) • •moduly e801 viz dále (cobas 8000, cobas pro) Modul e801 (Roche) • •• Imunochemický modul série • cobas 8000 (momentálně • nejmodernější) • •• 48 pozic pro reagencie • •• Výkon až 300 testů/hod. • •• Doplňování reagencií za • provozu • • • Architekt i 2000 SR (Abbott) sejmout0016 ARCHITECT i2000/i2000SR •Až 25 metod na palubě, chlazený karusel • •Velikost reagenčních souprav 100 a 500 testů (výhodné pro různě velké laboratoře) • •Automatické opakované testování, ředění a reflexe • •Detekce kapaliny, detekce sraženin • •Možnost integrace s biochemickým analyzátorem ARCHITECT c8000 • •Možnost spojit až čtyři jednotky dohromady – viz.výkon • •Výkon systému je až 200 testů za 1 hodinu (400 pro i4000, 600 pro i6000 a 800 pro i8000) • • Architect i 2000 SR (Abbott) – detail distribučního systému sejmout0014 Architect i 2000 SR (Abbott) •Technologie ChemiFlex CMIA (chemiluminiscenční •imunoanalýza na paramagnetických mikročásticích) •- značení patentovaným akridiniem •- měření vyzařovaných chemiluminiscenčních emisí v • reakční nádobce • •Stručný postup: • 1. Změření pozadí po přídavku peroxidu vodíku • 2. Přidání NaOH do reakční nádobky • 3. Zachycení emitovaného světla a jeho odvedení světlovodem do fotonásobiče (PMT) • [USEMAP] Aliniti (Abbott) •Integrovaný systém pro imuno (Aliniti i) i klinickou chemii (Aliniti c) • •Novinka firmy, dostává se na trh • •Princip stejný jako u imunochemických systémů Architect •Až čtyři moduly v jedné sestavě •Zabírá malou plochu • •Léky nejsou v nabídce (jsou na Aliniti c – klinický modul) \\fnbrno.cz\tree\home\27232\My Pictures\alinity-i-instrument-image-450x240.png \\fnbrno.cz\tree\home\27232\My Pictures\Abbott-Alinity-ci-crop640.jpg Axsym (Abbott) •Systém již stažen z trhu – byl velmi rozšířený •80-120 testů/ hod •Měřící principy – MEIA, FPIA •Robustnost •Dotyková obrazovka •Doba analýzy 15 - 20 min •Technologie zabraňující tvorbě pěny image: AxSYM / AxSYM Plus 5.0 Axsym - procesní centrum Axsym - reakční nádobka Axsym (Abbott) •MEIA (Microparticle Enzyme Immunoassay) •- Enzymová analýza na mikročásticích • •Vzorek se smíchá s reagenciemi, pak se inkubuje •Separace probíhá na skleněných vláknech matrice ve válečku (jeden váleček pro jeden test) •Přídavek konjugátu s alkalickou fosfatázou •Přídavek substrátu – 4-methylumbelliferylfosfát (MUP) •Hydrolýza MUP alkalickou fosfatázou •Vznik fluorescence methylumbelliferonu + její vyhodnocení • Axsym (Abbott) •FPIA – Fluorizační polarizace • •Polarizační fluorescenční záření emitováno ze značky, kterou je fluorescein, kterým je označen přidávaný stejný analyt jako je ten, který stanovujeme •Hodnota polarizace emitované fluorescence je úměrná rychlosti rotace molekuly •Rotace odpovídá velikosti molekuly – malé analyty rotují rychleji než komplexy •Měří se změna v polarizaci emitované fluorescence po vytvoření komplexu analyt-protilátka •Pripcip je vhodný pro malé molekuly jakou mají např. léky Unicel Dxl 800 (Beckman Coulter) • •kompaktní plně automatický uzavřený systém umožňující provádění imunoanalytických stanovení •jako značku využívá alkalickou fosfatázu •paramagnetických mikročástic jako nosiče protilátek resp. antigenů •chemiluminiscenční detekci využívající přeměny dioxetanfosfátu na dioxetan DXI800 Unicel Dxl 800 (Beckman Coulter) •Výkon: Až 400 testů /hodinu Rychlé uvolnění vzorku ze systému zajišťuje interní alikvot, z kterého jsou následně pipetovány jednotlivé metody •Jednoduchá obsluha: Minimální „kontakt“ obsluhy s řídícím softwarem. •Nepřetržitý provoz Doplňování reagencií a spotřebního materiálu za plného provozu • Minimální údržba (5min.denně) Unicel Dxl 800 (Beckman Coulter) • • •Kontrola integrity vzorků – detekce sraženiny a bublin • •Až 50 metod na palubě •Kompatibilita s biochemickými analyzátory a s preanalytickou automatizací – Power Processor® •Široká nabídka testů Immulite 2000 (Siemens) • Účinnost: •Výkon 200 testů •Random Access •24 chlazených reagencií •Automatické opakování vzorků s hodnotou mimo technický limit • • Maximální integrace: •Primární zkumavky •LIS interface • • Immulite 2000 (Siemens) • •Detekce sraženin • •Enzymově zesílená chemiluminiscence • •Stanovení 3. generace • •Dotyková obrazovka • •Nevýhodou je dlouhá doba inkubace – 35 nebo 70 minut • • Immulite 2000 (Siemens) • •Princip měření: • •Ke konjugátu (jeho součástí je analyt, který stanovujeme) vázanému na reakční kuličce a značenému alkalickou fosfatázou je přidán luminogenní substrát (adamantyl dioxetan fosfát) • •Dojde k odštěpení fosfátu a ze substrátu vzniká nestabilní anion, při jehož rozkladu dojde k emisi fotonů (chemiluminiscenční reakce) • Immulite 2000 Chemická reakce substrátu LIAISON XL (DiaSorin) •Více než 100 metod •Chemiluminiscenční detekce •Separace na paramagnetických mikročásticích •Až 180 testů/hod •V poslední době rozšířený CL-960i (mindray) •Malý, plně automatizovaný imunoanalyzátor •Až 180 testů/hod, 15 reagenčních pozic •Superparamagnetické mikročástice, magnetická separace •Reagencie značené ALP •Substrát – AMPPD (derivát 1,2-dioxo-cyclohexanu) • • •Firma mindray má k dispozici i vetší imunoanalyzátory – CL-1200i, CL-2000i AIA-2000 (TOSOH) •Fluorometrická enzymo-immunoanalýza (FEIA) •Unikátní balení reagencií – suché (bez odpadu) - v reagenčních • kelímcích s Al folií k propíchnutí (jeden kelímek/ test se stabilitou 1 • rok) – nestane se, že otevřená reagencie proexpiruje •200 testů/hod •20 minutové testy (většina) •Automatizovaná denní údržba •Stabilita kalibrace 90 dnů • • • C:\Users\Mirka\Desktop\aia-2000b-large.jpg C:\Users\Mirka\Desktop\cup.png Maglumi 800 (Snibe) •CLIA •Značka-ABEI •Separace na magnetických mikročásticích •180 testů/hod •Délka testu -17 min •154+ parametrů (včetně • aldosteronu, gastrinu atd.) •K dispozici různé velikosti • přístrojů MAGLUMI 600 - 4000 Elisys Quattro (HUMAN) •Plně automatický ELISA analyzátor středního výkonu Elisys Quattro (HUMAN) Více než 40 ELISA testů Až 7 desek naráz 4 nezávislé inkubátory Čtečka čárového kódu zkumavek Automatická kontrola množství reagencií Noveos (Hycor) \\fnbrno.cz\tree\Home\27232\My Pictures\Noveos.jpg Nový přístroj na alergeny •140 alergenů v systému současně • •Balení každého alergenu po 75 testech • •Princip ELISA Analyzátory na homogenní imunoanalýzu Kryptor (Brahms) •Využívá homogenní imunoanalýzu •Odpadají promývací a separační kroky • •Princip měření: •Při reakci probíhá neradioaktivní přenos energie z donoru (kryptátová struktura s iontem europia v centru) na akceptor (chem. modif. protein) • •Měřený vzorek je ozářen dusíkovým laserem, následně donor (kryptát) emituje fluorescenční signál, po něm emituje signál akceptor • •Měříme signál emitovaný z imunokomplexu s časovým zpožděním • Dimension Vista 1500 (Siemens) •Integrovaný systém - (klin. chem., ISE, imuno) •Technologie LOCI - založena na přenosu kyslíku • •První homogenní imunoanalýza s chemiluminiscenční detekcí •Vysoká citlivost • /siemens/en_GLOBAL/gg_diag_FBAs/images/product_images/Dimension_Vista/DimensionVista1500_wBarcode_v 2_ca6.jpg /siemens/en_GLOBAL/gg_diag_FBAs/images/product_images/Drug_Testing_Diagnostics/Viva_E_Drug_Testing_ System_ca6.jpg VIVA-E (Siemens) systém na testování drog VIVA – E (Siemens) •Princip: •Technika EMIT - homogenní enzymatická imunoanalytická technika - 10 min. test, 65 testů/hod • •Test založen na kompetici mezi stanovovanou látkou ve vzorku a stejnou látkou značenou enzymem glukoso-6-fosfát dehydrogenázou (G6PDH) o vazebná místa na protilátce • •Aktivita enzymu klesá při vazbě na protilátku- koncentrace látky ve vzorku je tedy úměrná změně aktivity enzymu • •Aktivní enzym mění nikotinamidadenindinukleotid (NAD) na NADH --} změna absorbance (spektrofotometricky vyhodnocujeme) • •(Endogenní sérová G6PDH neinterferuje, koenzym NAD působí pouze s bakteriálním enzymem (Leuconostoc mesenteroides) použitým v testu) • •Metoda je semikvantitativní – skupinový test