Reverzní transkripce
• Reverzní transkripce a její objev
• Nobelova cena za fyziologii a lékařství
• Využití a výskyt
• RT-qPCR
• cDNA knihovny
• High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit
• TaqMan Advanced miRNA Assays
Obsah
Reverzní transkripce
• Narušila centrální dogma molekulární
biologie
• Reverzní transkriptázy
Nobelova cena za fyziologii a lékařství, 1975
• D. Baltimore – zkoumal 2
onkogenní viry-virus myší leukémie
a virus Rousova sarkomu, objevil
reverz. transkriptázu a retroviry
• H. Temin – zkoumal virus Rousova
sarkomu, popsal reverzní
transkripci a izoloval reverz.
transkriptázu
• R. Dulbecco – zkoumal onkoviry,
učil H. Temina
Využití a výskyt
• Studium RNA
• cDNA knihovny
• RT-qPCR
• Viry
• Bakterie
• Živočichové a rostliny
RT viru HIV
RT-qPCR
cDNA knihovny
• Studium RNA – porozumění aktivně exprimovaným genům a jejich
funkcím
• cDNA jako templát pro microarraye a sekvenování
• Reprodukce genetické informace bez nekódujících oblastí
• Exprese eukaryotických genů v prokaryotických organismech
• Funkční klonování pro identifikaci genů na základě proteinu
High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit
Thermo Fisher Scientific
• Schéma náhodných primerů
• mRNA a rRNA
• 20 ng - 2 μg RNA
• ss cDNA vhodná ke qPCR i krátkodobému
či dlouhodobému uskladnění
TaqMan Advanced miRNA Assays
Applied Biosystems
• 1 – 10 ng RNA nebo 2 μl plazmy či
séra
• Specifita-jen zralé miRNA a
rozlišuje mezi homologními
miRNA
• Senzitivita-60 kopií vložené
miRNA
https://www.youtube.com/watch?v=bsYQowakt0E