ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABNORMALITY zpracovala Mgr. Navaříková vytvořilo CMBG FN Brno [USEMAP] VYŠETŘENÍ ZÍSKANÝCH CHROMOSOMOVÝCH ABERACÍ v důsledku působení mutagenních faktorů prostředí - z periferní krve STANOVENÍ % ABERANTNÍCH BUNĚK [USEMAP] VSTUPNÍ MATERIÁLY K VYŠETŘENÍ periferní krev [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL) příčiny vzniku • působení - fyzikálních faktorů • (ionizující záření) • - chemických látek • (cytostatika, imunosupresiva, oxidační, • alkylační činidla ad. látky používané • v průmyslu) • - biologických faktorů • (virové infekce – pravé neštovice, spalničky, • zarděnky ad.) [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromatidové aberace • •chromatidové gapy (mezery) - chtg (chromatid gap)– příčně slabě se barvící část chromatidy (achromatické léze), také úplné přerušení nepřesahující šířku chromatidy • sejmout000r [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromatidové aberace • •chromatidové zlomy - chtb (chromatid break), oddělení samostatného fragmentu (F) – úplné přerušení chromatidy, pravděpodobně koncová delece (fragmenty mívají různé rozměry, mohou být v ose s původním chromosomem nebo nemusí) • sejmout000k [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromatidové aberace •chromatidové výměny - chte (chromatid exchange)- výměny části chromatid v rámci jednoho nebo více chromosomů • sejmout000z [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromatidové aberace - chromatidové výměny V V1 V2 [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromosomové aberace • •chromosomové gapy - chrg (chromosome gap) -příčně slabě se barvící část chromosomu (achromatické léze), také úplné přerušení chromosomu nepřesahující šířku chromatidy • sejmout000e [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromosomové aberace • •chromosomové zlomy - chrb (chromosome break), oddělení párových fragmentů (DF)- úplné přerušení obou chromatid, pravděpodobně koncová delece (fragment obvykle leží paralelně, mívají různé rozměry, mohou být v ose s původním chromosomem nebo nemusí) • sejmout000i DF tmavý [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromosomové aberace •acentrické ringy, kruhové chromosomy- uzavřené struktury, vznik dvou zlomů na jednom chromosomu, dojde ke spojení – acentrické ringy jsou bez centromery, kruhové chromosomy zahrnují centromeru • • • sejmout000hh R [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL)- typ poškození – chromosomové aberace • •chromosomy zahrnující více než 1 centromeru- • dicentrické, tricentrické chromosomy… • sejmout000dse sejmout000ggg DIC TIC,DF [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (vliv mutagenních faktorů prostředí) •vlivem mutagenních faktorů prostředí dochází na chromosomech ke vzniku aberací (zlomy, di-, tricentrické chromosomy, ring chromosomy ad.) aberantní buňka (mitóza s aberací) • nacházíme různé změny v různých buňkách • v každé buňce může být jiná chromosomová aberace – nejedná se o mozaiku, ale o náhodné změny, v jedné mitóze můžeme nalézt 1 změnu nebo i více) • vyšetřujeme mitózy, které jsou barvené konvenční metodou barvení chromosomů • mitózy, ve kterých je nalezena alespoň jedna chromosomová aberace, nazýváme „aberantní buňky“ [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (vliv mutagenních faktorů prostředí) vyšetření z periferní krve • •rychlejší stárnutí organismu •vznik degenerativních onemocnění •možné maligní zvrhnutí • • Přítomnost aberací v somatických buňkách Přítomnost aberací v gametách •zvýšené riziko narození postiženého dítěte Konvenční barvení chromosomů Stanovení % aberantních buněk – buněk s poškozeným chromosomem aberantní buňka [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (vliv mutagenních faktorů prostředí) Výsledek: stanovení % aberantních buněk •CYTOGENETICKÁ ANALÝZA PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ (CAPL) - skupinové hodnocení - hraniční patologie při skupinovém hodnocení: zvýšená expozice mutagenním faktorům: 2 – 4 % aberantních buněk z 200 – 300 hodnocených vysoká expozice mutagenním faktorům: více než 4% aberantních buněk z 200 – 300 hodnocených •ANALÝZA ZÍSKANÝCH CHROMOSOMOVÝCH ABERACÍ (ZCA) – individuální hodnocení - hraniční patologie při individuálním hodnocení: opakovaný nález 5% ab. buněk ze 100 hodnocených [USEMAP] ZÍSKANÉ CHROMOSOMOVÉ ABERACE (ZCA/CAPL) •Změny na chromosomech jsou náhodné (v různých buňkách různé), •proto identifikujeme pouze typ aberace (např. zlom, ring chromosom •aj.) a není třeba aberaci dále analyzovat (například určovat přesně •místa zlomů, které chromosomy se spojily v dicentrický chromosom, •apod.). Tzn. vyšetřujeme POUZE METODOU KLASICKÉ CYTOGENETIKY – •konvenčním barvením chromosomů směsí barviv Giemsa – Romanowski. •(netřeba vyšetření molekulárně cytogenetickými metodami) [USEMAP] POSTUP ZÍSKÁNÍ PREPARÁTU •odběr materiálu – STERILNÍ ODBĚR! •kultivace – získání dostatečného množství dělících se buněk • (s chromosomy), zastavení dělení buněk kolchicinem • doba kultivace 48 hodin (zachycení 1. buněčného dělení), kratší než u stanovení karyotypu •zpracování suspenze (hypotonizace, fixace) – získání suspenze buněk •vykapání na podložní sklíčka •barvení chromosomů konvenční metodou •hodnocení ve světelném mikroskopu • [USEMAP] METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY konvenční barvení chromosomů • konvenční barvení chromosomů (srovnání s postupem při přípravě chromosomů s G – pruhy – mitózy na sklíčcích po zaschnutí obarvíme v barvě Giemsa-Romanowski bez předchozí inkubace v roztoku trypsinu) přednáška 022 přednáška 065 1 – inkubace preparátu v roztoku trypsinu (natrávení proteinů na povrchu chromosomů) 2 – barvení barvivem Giemsa- Romanowski chromosomy homogenně obarvené po celé délce, bez příčných pruhů [USEMAP] •důležité odlišnosti mezi přípravou preparátů z periferní krve pro: • 1.stanovení karyotypu – chromosomy s G – pruhy • - délka kultivace 72 hodin • - G-pruhování = inkubace v trypsinu + směs barviv Giemsa – • Romanowski • - nalezenou aberaci se snažíme co nejpřesněji definovat • (i za pomoci metod molekulární cytogenetiky) • •2. stanovení % aberantních buněk – chromosomy konvenčně barvené • - délka kultivace 48 hodin (je třeba zachytit 1. buněčné dělení – • později dochází k opravě aberací) • - konvenční barvení = pouze Giemsa – Romanowski bez trypsinu • - konkrétní aberace neupřesňujeme, podstatné je pouze jestli je/není • v dané buňce některá aberace přítomna VROZENÉ ABERACE / ZÍSKANÉ ABERACE (mutagenní faktory) zlomy1 12-8 [USEMAP] Klinické indikace k vyšetření ZCA/CAPL (mutagenní faktory) •práce v riziku (kontakt se škodlivými látkami, zářením), vstupní prohlídky na pracovištích se zvýšeným rizikem •po chemoterapii, po jiné dlouhodobé léčbě •kontrolní vyšetření u zachycených případů • % aberantních buněk se sníží na normu po vitaminizaci antioxidanty (vitamíny A, E, C, event. Se, Zn, doba léčby 3 – 6 měsíců) [USEMAP] •Kontakt pro dotazy: Navarikova.Marta@fnbrno.cz