Stopová analýza prvků v Klinické biochemii Zn, Cu, Fe, Mn, Se. . . Cd, Hg, Pb, Al . . . A A S Atomová Absorpční Spektrofotometrie I C P Inductively Coupled Plasma (Indukčně vázané plazma) A A S Atomová Absorpční Spektrofotometrie Kirchhoffův zákon Volné atomy v základním stavu jsou schopny absorbovat takovou vlnovou délku, kterou by vyzářily při přechodu z excitovaného stavu (elektrony ve vyšší energetické hladině) do základního stavu (elektrony v původní energetické hladině). A T O M I Z A C E účinkem vysoké teploty A A S Elektrotermická technika atomizace teplotou elektrické energie (grafitová kyveta) Plamenová technika atomizace teplotou plamene (acetylén/vzduch; acetylén/N2O) Výbojka s dutou katodou M D Výbojka s dutou katodou M D plamen grafitová kyveta výbojky s dutou katodou (HCL - Hollow Cathode Lamp), bezelektrodové výbojky (EDL – Electrodeless Discharge Lamp) superlampy. Jako velmi perspektivní zdroj se ukazují laserové diody Xenonové výbojky ve spojení s vysokorozlišovacím optickým systémem (Echelle monochromátor) Zdroje primárního záření společné pro plamenovou i elektrotermickou techniku sejmout0013 dutá katoda Instrum_tech_foto 041 Instrum_tech_foto 044 P l y n y a c e t y l é n v z d u c h o x i d d u s n ý (N2O) sejmout0008 Stechiometrie plamene Instr_tech_AAS_Infolab 014 Instrum_tech_foto 010 Instr_tech_AAS_Infolab 013 Elektrotermická technika atomizace teplotou elektrické energie (grafitová kyveta) Instrum_tech_foto 047 sejmout0009 Instrum_tech_foto 038 Instrum_tech_foto 011 Přídavná zařízení grafitové kyvety Ø Mikrokamera Ø Ø Přívod inertního plynu (argon) Ø Ø Pyrometr (křemíková fotodioda) Ø Ø Chladící blok Instr_tech_AAS_Infolab 001 Instr_tech_AAS_Infolab 003 sejmout0014 Instr_tech_AAS_Infolab 006 Instr_tech_AAS_Infolab 039 Teplotní režim grafitové kyvety Fáze teplota [°C] čas [s] rampa [°C/s)] inert.plyn průtok [l/min] sušení 1 95 45 10 0,2 2 110 20 5 0,2 3 130 15 10 0,2 mineralizace 4 1100 20 150 0,2 atomizace 5 2300 3 0 0 vypálení kyvety 6 2700 3 0 0,2 sejmout0009 Izotermická atomizace Lvovská platforma Korekce pozadí při A A S Deuteriová lampa Zeemanův princip Korekce pozadí pomocí zdroje kontinuálního záření (deuteriová lampa) Základním principem je střídání čárového zdroje a kontinuálního zdroje záření v optické cestě spektrometru. V reálném případě, kdy se vyskytuje jak specifická absorpce tak absorpce pozadí, bude absorpce čárového zdroje odpovídat absorpci celkové, zatímco absorpce změřená kontinuálním zdrojem bude odpovídat pouze absorpci pozadí. Odečtením obou hodnot se získá specifická absorpce, která odpovídá koncentraci analytu v absorpčním prostředí. celková absorbance absorbance pozadí korigovaná absorbance Zeemanova korekce pozadí Původní vlnová délka zaznamenává specifickou i nespecifickou absorpci pozadí Rozdíl mezi těmito dvěma hodnotami absorbance poskytuje „čistou, specifickou“ absorpci působenou atomy stanovovaného prvku bez absorpce pozadí. Odštěpená vlnová délka zaznamenává pouze nespecifickou absorpci pozadí Silné magnetické pole působí částečné rozštěpení a posun vlnové délky paprsku vycházejícího z výbojky s dutou katodou Zeeman_schema.jpg celková absorbance absorbance pozadí korigovaná absorbance I C P Inductively Coupled Plasma (Indukčně vázané plazma) (ta)…to plazma… Skupenství pevné kapalné plynné plazma molekuly atomy pevně vázané volně vázané volné rozdělené jádra+ elektrony - Při proudění Argonu hořákem působí vysokonapěťový výboj (jiskra), který ionizuje část atomů argonu za vzniku jader a elektronů (ionizace). RF generátor dodává energii do indukční cívky a vytváří vysokofrekvenční střídavý proud, který indukuje elektromagnetické pole v hořáku. Jádra a elektrony Argonu v hořáku jsou ovlivněny elektromagnetickým polem a jsou urychlovány a srážejí se s dalšími atomy argonu. ….vzniká argonové plazma Pohyb elektronů a iontů v „hořáku“ vytváří obrovské množství tepla 5000 - 10.000° C atomizace a excitace atomů I C P - O E S Inductively Optical Coupled Emission Plasma Spectrometry I C P - M S Inductively Mass Coupled Spectrometry Plasma difrakční reflexní mřížka optický hranol