Kalibrace, referenční meze, jednotky, standardizace Mgr. Ondřej Wiewiorka, Ph.D. Kalibrace Činnost, která za specifikovaných podmínek v prvním kroku stanoví vztah mezi hodnotami veličiny s nejistotami měření poskytnutými etalony (standardy) a odpovídajícími indikacemi s přidruženými nejistotami měření a ve druhém kroku použije tyto informace ke stanovení vztahu pro získání výsledku měření z indikace. TNI 01 0115:2009. Mezinárodní metrologický slovník - Základní a všeobecné pojmy a přidružené termíny (VIM). Kalibrační funkce určuje vztah mezi signálem přístroje a analytu ve vzorku. Kalibrováním zajistíme návaznost mezi standardem a měřeným analytem. Demmingova regrese Kde vzít etalon / standard? ISO 15193:2009 ISO 15194:2009 ISO 17511:2020 Standardizace Standardizace •Ekvivalence výsledků měření skrze metrologickou návaznost, referenční systém a kalibrační hierarchii lNelze uplatnit u metod, kde neexistují referenční materiály a referenční metody lDle JCTLM standardizováno zhruba 110 analytů • • • • • Když nemáte CRM? lHarmonizace lZískání ekvivaletního výstupu pro pacienta navzdory rozdílným výrobcům, platformám a dodavatelům reagencií. Ekvivalentní postupy pro pre-, post- i analytiku. • • • Kvalitní infrastruktura návaznosti lMetrologie lStandardizace lAkreditace lVyhodnocení konformity lDohled nad IVD trhem Návaznost lDefinice SI jednotky lCertifikovaná hodnota referenčního materiálu lVýsledek referenčního měřícího systému lHodnota přiřazená mezinárodnímu kalibrátoru lHodnoty přiřazené mezinárodním harmonizačním protokolem Kalibrační funkce Funkční kapacita detektoru Horwitzova křivka (vztah) Kalibrační funkce Lineární Nelineární spline logit-log-1, logit-log-2, logit-log-3 RCM2T2 exponenciální funkce kvadratický model kubický model Provedení kalibrace •Jednobodová •Dvoubodová (bracketing) •Vícebodová kalibrace lMetoda standardních přídavků Referenční hodnoty výsledků – biologický referenční interval lLze je získat analýzou zdravé populace, musí být dobře definovaní a v dostatečném počtu (n > 120) - přímý způsob l„Těžením dat“ z nemocničních databází po vyloučení nevhodných jedinců (s chorobou) – nepřímý způsob – v současnosti není doporučený CLSI EP28-A3c -Statistické rozlišení rozdílů mezi skupinami – muži, ženy, dospělí, děti…. -Biologická variabilita, geografická lokalita, kulturní zvyklosti -Obvykle 95% rozpětí (horní a dolní 2,5 % se vyloučí) -Může záviset na použité analytické metodice Biologický referenční interval Sikaris KA. Physiology and its importance for reference intervals. Clin Biochem Rev. 2014 Feb;35(1):3-14. PMID: 24659833; PMCID: PMC3961997. Biologický referenční interval Sikaris KA. Physiology and its importance for reference intervals. Clin Biochem Rev. 2014 Feb;35(1):3-14. PMID: 24659833; PMCID: PMC3961997. Biologický referenční interval Sikaris KA. Physiology and its importance for reference intervals. Clin Biochem Rev. 2014 Feb;35(1):3-14. PMID: 24659833; PMCID: PMC3961997. Biologický referenční interval lNemá příliš smysl tam, kde je inter-individuální variabilita větší než intra-individuální variabilita -CVI / CVG < 0,6 -Poměr lze někdy zvýšit -členěním na -podskupiny • Cut-off / Diskriminační hodnota Diagnostická efektivita analýzy -Senzitivita metody -Schopnost měřícího postupu zachytit i malé množství analytu • -Ceněna obzvlášť u screeningových testů pro včasný záchyt onemocnění a onemocnění kde by byl pacient bez intervence značně poškozen • Diagnostická efektivita analýzy •Specificita metody -Schopnost měřícího postupu detekovat pouze cílený analyt • -Ceněna obzvlášť u testů pro stanovení konečné diagnózy a závažných onemocnění (intervence značně poškozuje pacienta) • • ROC křivka (Receiver operating characteristic plot) lGrafické vyhodnocení diskriminačních schopností testu. lSestrojuje se vynesením hodnot klinické citlivosti (osa y) proti hodnotám klinické nespecifičnosti (osa x) pro všechny rozhodovací úrovně. ROC křivka (Receiver operating characteristic plot) •citlivosti,specifičnosti, pozitivní a negativní prediktivní hodnoty a klinická věrohodnost •AUC kvantifikuje diagnostickou správnost zkoušky Výsledky • lKvalitativní – charakteristika vlastnosti – negativní/pozitivní • lKvantitativní – hodnota vlastnosti – •1200 kopii/ml Výsledky - škály lNominální – konkrétní příslušnost ke kategorii – reaktivní/nereaktivní; pozitivní/negativní lOrdinální – pořadová – Hb v moči - 0, +++ lIntervalová – Ery v moči 50-200/ul lPoměrová – elfo bílkovin [„0,00-1,00“], %; HbA1c - %, „mmol/mol“ • Jednotky l% nemají být používány pro výsledky (pouze nejistoty CV% apod.) – místo toho bezrozměrné j. 0,00-1,00 lLéky v hmotnostní koncentraci, vyjma methotrexátu, Li lPb při intoxikaci také v hmotnostní koncentraci Jednotky lNepoužívat prefixi u jednotek ve jmenovateli – tzn. místo ng/mL používat ug/L; vyjma kg (základní SI jednotka) lPro označení litru lze používat l i L (u L ale nehrozí záměna s 1) Jednotky Jednotky Děkuji za pozornost •