CYTOLOGIE
OBECNÉ PRINCIPY
Iva Staniczková Zambo 1
CYTOLOGIE
▪ patří mezi bioptické metody
▪ odběry:
▪ neinvazivní (moč, stěry z čípku, sputum)
▪ minimálně invazivní (FNAC)
▪ význam cytologie
▪ screeningové vyšetření
▪ prebioptické vyšetření (může biopsii vyloučit – např. benigní nálezy na ŠŽ)
▪ v některých lokalizacích plně nahrazuje biopsii (pankreas, žlučové cesty atp.)
▪ upřesňuje stádium malignity (peritoneální cytologie u CA vnitřního genitálu ♀)
▪ … molekulárně diagnostické/prediktivní vyšetření (tam, kde není možno provést biopsii)
2
CYTOLOGIE … VÝZNAM
▪ dg. závěry ze stále menších vzorků
• snaha minimalizovat dyskomfort a morbiditu pacienta při odběru materiálu
 ale rostou požadavky na stále podrobnější diagnostické závěry
▪ roste počet patologem reportovaných prognostických faktorů, které ovlivňují
následnou terapii
 je vyvíjen tlak na zkrácení časového úseku nezbytně nutného pro
stanovení správné dg.
▪ CYTOLOGIE JE RYCHLÁ, LEVNÁ, ale MÉNĚ PŘESNÁ
▪ histopatologie a cytopatologie jsou KOMPLEMENTÁRNÍ
3
CYTOLOGIE … VÝZNAM
▪negativní cytologie neznamená absenci malignity !!!
▪nediagnostická cytologie bez onkol. susp. bb.
4
TYPY CYTOLOGICKÝCH VYŠETŘENÍ
Exfoliativní cytologie
(stěr, otisky)
SLIZNIČNÍ POVRCHY
• čípek
• GIT (jícen, žlučovody)
• bronchy
• …kůže…
FNAC
(aspirace)
Z ČÁSTEČNĚ
CYSTICKÝCH LÉZÍ
• ŠŽ
• mamma
• LU
• cysty…
Tělní tekutiny
(punkce, laváž)
VOLNÁ TEKUTINA
• peritoneum, pleura,
perikard
• likvor
• klouby
• moč
• BAL
• …sputum…
LBC (liquid based cytology) 5
EXFOLIATIVNÍ CYTOLOGIE
1. bb. jsou odloupnuty /seškrábnuty /
setřeny z epiteliálního povrchu
2. materiál natřen na označené
podložní sklíčko
3. nátěr fixován 95%
alkoholem nebo
zaschnutím na vzduchu
6
F N A C
2. kapka na podložní sklíčko→ dalším
podložním sklíčkem kapka rozetřena
(kolik kapek, tolik nátěrů)
3. nátěr fixován 95% alkoholem nebo
zaschnutím na vzduchu (dle zvyklostí:
např. ½ skel alkoholem, ½ na
vzduchu)
1. bb. jsou aspirovány
tenkou jehlou (pod
zrakovou / UZV
kontrolou)
7
PUNKCE / LAVÁŽ TĚLNÍCH TEKUTIN
1. tekutina je punktována/
drénována
2. centrifuga (cytospin)
3. sediment je nanesen na
podložní skla („terčík“)
4. sediment je vložen do kazetky
→ cytoblok (parafínu ... řezy ...
HE + lze i IHC) 8
LBC, THINPREP (CYTOLOGIE V TENKÉ VRSTVĚ)
3. homogenizace → na
podložní sklíčko
„terčík“ (+rezervní
materiál pro IHC/genetiku...)
1. bb. jsou setřeny z epiteliálního
povrchu
2. kartáček vymyt v mediu®
▪ v laboratoři:
▪ zhotovení cytobloku,
nátěrů po centrifugaci
▪ barvení
▪ montování pod krycí
sklíčko/fólii
▪ odběr cytologického
materiálu
▪ nátěry na podložní skla
(+ fixace)
▪ tekutý materiál (stříkačky,
zkumavky, sputovky…
nativně ale v CHLADU – ne
mrazu!!!!)
▪ vyhodnocení
nálezu
cytologem-
patologem
požadavky na manipulaci se vzorky
stanovuje laboratoř v Laboratorní
příručce
9
ZPRACOVÁNÍ V LABORATOŘI
▪ cytospin
→ „terčík“ na podložní sklo
→ cytoblok
▪ barvení - záleží na předchozí fixaci a zvyklostech laboratoře
▪ May-Grünwald-Giemsa-Romanovsky (MGG)
▪ po fixaci zaschnutím
▪ = eozin-methylen modř+ dtto chlorid + eozin
▪ Hematoxylin-eozin (H&E)
▪ Papanicolau (Pap)
▪ po fixaci alkoholem (cytofixativ)
▪ = modifikovaný HE (hematoxylin – oranž G – polychrom)
▪ montování pod krycí sklo / folii
10
BARVENÍ
zaschnutí → MGG alkohol → PAP
extracelulární materiály
CYTOPLAZMA
krvetvorné buňky a jejich granula
bakterie
ale horší barvitelnost jader (struktura
chromatinu, vzhled jadérek atp.)
transparence buněk
hematoxylin barví JÁDRO → detailní
pozorování chromatinu
oranž G zdůrazní keratinizaci
ale horší detaily cytoplazmy
11
IHC (resp. ICC)
▪lze provést na:
▪ nebarvených nátěrech/cytospinových sedimentech (= přímo na
podložním skle)
▪ nátěrech barvených MGG (nejsou montovány)
▪ na řezech z cytobloku
▪CAVE!!!
▪ imunoreaktivita cytologických vzorků může být odlišná od
histologických preparátů (falešně + i -)
▪ často chybí vnitřní pozitivní kontrola
12
OBECNÉ PRINCIPY HODNOCENÍ CYTOLOGIE
ALGORITMUS pro hodnocení cytologických vzorků
(stěrových a aspiračních)
sjednocení postupu sjednocení terminologie
statistické hodnocení
reproducibilita mezi pracovišti
13
PRINCIPY HODNOCENÍ
MEZINÁRODNÍ KLASIFIKACE
14
CYTOLOGIE …OBECNÉ PRINCIPY HODNOCENÍ
▪ kvalita a kvantita odebraného materiálu
▪ hodnotitelný
▪ nehodnotitelný, ale zpracovaný (limitovaně diagnostický)–proč?
▪ nehodnotitelný (= nediagnostický) vzorek – proč?
▪ popis nenádorových změn
▪ zánětlivé bb., ery (tzv. buněčné pozadí)
▪ případná mikrobiální infekce
▪ reaktivní změny epitelií …
▪ popis případných cytonukleárních atypií
▪ dlaždicových bb. / žlázových bb. / urotelií / mezotelií / lymfoidních bb. /
stromálních elementů…
15
CYTOLOGIE …OBECNÉ PRINCIPY HODNOCENÍ
▪buňka jako celek:
• velikost, tvar, N/C poměr
▪jádro:
• velikost, tvar, struktura, distribuce a denzita chromatinu, mitózy
• nukleoly - velikost, počet
▪cytoplazma:
• množství, tvar, charakteristiky dané barvením, textura, přítomnost
inkluzí (vakuoly, pigmentová granula)
▪vztahy mezi buňkami:
• buněčná koheze, tvorba plachtovitých trsů, papil, duktů, apod.
16
CYTOLOGIE …OBECNÉ PRINCIPY HODNOCENÍ
▪ZÁVĚR:
• nelze diagnostikovat (u nediagnostických vzorků, proč?)
• onkologicky negativní
• atypie nejistého významu (buňky nejisté biologické povahy)
• pozitivní nález:
▪ dysplastické změny
▪ suspektní neoplázie
▪ vysoce susp. z malignity
▪ maligní
kategorie I.
kategorie II.
kategorie III.
u ŠŽ i IV.
kategorie IV.
u ŠŽ V.
kategorie V.
u ŠŽ VI.
17
OBECNÉ PRINCIPY HODNOCENÍ CYTOLOGIE:
Co je nutno reportovat?
▪DIAGNOSTICKÁ KATEGORIE
▪ nediagnostický
▪ negativní na malignitu
▪ atypie nejistého významu/buňky nejisté biologické povahy
▪ suspektní z malignity (jaké?)
▪ maligní (co nejpřesnější typizace)
▪(komentář, doporučení klinikovi = co z cytologického závěru
vyplývá?)
18
s RT a CHT ASOCIOVANÉ ZMĚNY
▪akutní fáze:
• buňky se zvětší
• v cytoplazmě vakuoly
• jádra zvětšená až bizarní, ale chromatin jemný
+zánětlivé pozadí:
▪ nepříznivá odpověď: neutrofily a histiocyty
▪ příznivá odpověď: lymfocyty a fibroblasty
▪chronická fáze:
• atrofie epitelu, ale i obrovské epitelie
19
POSTRADIAČNÍ ZMĚNY - ČÍPEK
20
spinoCA (plic)
21
adenoCA (plic)
22
nekrotizující
pankreatitida
23
neuroendokrinní tumor
pankreatu
24
duktální adenoCA
pankreatu
25
Papilární uroteliální CA
26
LSIL
AGC-NOS
ASC-H
AGC-NEO,
adenoCA
SpinoCA
27
folikulární neoplázie
štítné žlázy
28
papilární CA štítné žlázy
29