Praktické cvičení č.2 datum____________ jméno___________________ Téma praktika: Laboratorní preanalytická fáze * Laboratorní informační systém * Příprava analytického vzorku Okruhy k nastudování a otázky: 1. Typy rotorů u centrifug, možnosti funkcí programů. 3. Zahušťování močí. 4. Typy odběrových nádobek, antikoagulační prostředky, separační gel – vlastnosti. Přístroje a pomůcky: Terminál LIS INFOLAB, LIS Steiner Tiskárna čarových kódů Hettich Rotanta 460 R Hettich ROTOFIX 32A Hettich – cytofuga (cytospin) Eppendorf 5810R Centrifuga MPW 352 Úkoly: a) Preanalytická laboratorní fáze · Příjem a identifikace biologického materiálu · Centrifugace · Zadání identifikace pacienta a požadavků na biochemické vyšetření do LIS Infolab a LIS Steiner · Tisk štítků s čarovým kódem · Nalepení štítků na zkumavky s krevní plazmou (po centrifugaci) · Vložení odběrových nádobek do stojánku · Vložení stojánku do analyzátoru b) Seznámení se s konstrukcí a funkcemi různých typů centrifug · Nastavení centrifugačních programů (centrifuga Eppendorf 5810R) 2000 g, doba centrifugace 8 minut 1000 g, doba centrifugace 5 minuty · A) Výpočítat RCF (Relativní centrifugační síly) pro centrifugy Eppendorf 5810R, Rotanta 460R, Rotofix 32A, cytofuga · B) Vypočítat počet ot/min. nutných k dosažení RCF 4000g a 8000g pro centrifugy Rotanta 460R a Eppendorf 5810R, HETTICH; 10000g pro ROTOFIX 32A; 1500g cytofuga · Výpočty porovnat s odečtem z nomogramu Vzorec pro výpočet relativní odstředivé síly RCF (x g): RCF = 1,118 x 10^-3 x n^2 x r Vzorec pro výpočet počtu otáček za minutu n: __________________________ N = √ RCF / (1,118 x 10^-3 x r) n [min^-1 ] počet otáček za minutu (RPM – Rotation Per Minute) RCF [x g] relativní odstředivá síla – Relative Centrifugal Force) r [m] poloměr rotoru (údaj v metrech !!) Typ centrifugy r n (ot/min) RCF (x g) Naměřený Z návodu výpočet nomogram Eppendorf 5810R 2000 4000 HETTICH 460R 2000 4000 HETTICH 32A 10000 cytofuga 800 Typ centrifugy r n (ot/min) RCF (x g) Eppendorf 5810R 4000 8000 HETTICH 460R 4000 8000 HETTICH 32A 10000 cytofuga 1500 c) Zahušťování močí pro gelovou elektroforézu · Vzorek moči zahustěte pomocí koncentrátoru VIVASPIN 2 firmy Sartorius · Pracovní postup: - Napipetujte 2,5 ml zcentrifugované moče do koncentrátoru (po rysku). (Pokud použijeme nový koncentrátor, napipetujte moč přímo, pokud je koncentrátor po procesu čištění naplněn deionizovanou vodou, nejprve vodu vylijte.) - Centrifugujte při 3160 g 9 minut (program 1 na centrifuze MPW 352). - Zahušťujeme cca 36x, tj. na objem 70 µL. Pokud po první centrifugaci je objem větší než 100 µL, centrifugaci opakujeme. V případě, že se zahustí moč na menší objem (mrtvý objem, který vždy zůstane, aby nedošlo k vysušení vzorku, je 8 µL), doplníme profiltrovanou močí pacienta nebo destilovanou vodou na 70 µL. - Odstraňte kontejnerek s filtrátem. - Nasaďte na zkumavku krycí klobouček, obraťte dnem vzhůru a centrifugujte 3 min při 3160 g (program 2 na centrifuze MPW 352). - Takto získaný koncentrát přepipetujte do eppendorfky a řádně označte.