Lymfocyty T a B jsou základními operačními jednotkami adaptivní imunity

                                 Buněčné základy adaptivní imunity

Lymfoidní orgány (lymfadenopatie, asplenie, splenomegalie)

                          (thymus)

Vyšetření funkce lymfocytů in vivo

     tvorba protilátek po vakcinaci (imunoglobuliny v séru, ve slinách, v likvoru)

     celulární imunita (indukce kontaktní přecitlivělosti, multitest CMI)



Vyšetření subpopulací lymfocytů in vitro

     imunofenotypizace (CD)

     funkční testy (proliferace, tvorba cytokinů, Ig)





                                    Vyšetření lymfatických uzlin

Zvětšení lymfatických uzlin

   v důsledku imunitní reakce na antigen

    infiltrace zánětlivými buňkami (lymphadenitis)

    infiltrace a proliferace maligních buněk

    při imunologických (SLE, RA) a metabolických chorobách



U zdravých dospělých osob bývají axilární a inguinální uzliny hmatné (v průměru 1 cm).

V dětství je reakce lymfatických uzlin běžná.

U dospělých do 30 let je asi 80% lymfadenopatií benigních, u osob nad 50 let jen asi 40%.

Diagnostický význam při infekci HIV

                                         Vyšetření sleziny

U zdravých osob slezinu nenahmatáme



Hyposplenismus: vrozená asplenie

                          stavy po splenektomii

   Význam vakcinace proti pneumokokům!



Splenomegalie:

   hyperplasie buněk imunitního systému (infekce)

   porušení průtoku krve (cirhóza jater, trombózy)

   maligní procesy (primární i sekundární)

   autoimunitní procesy (RA-Felty, SLE, hematol.)

   extramedulární hematopoéza

                                     Diferenciální krevní obraz

Odběr krve do EDTA (nesrážlivá)



Leukocyty

  dospělí:               4,0 – 9,0 x 10^9/L

  4-7 let:                5,5 – 15,5 x 10^9/L

  novorozenci:         9,0 – 30,0 x 10^9/L







                                     Diferenciální krevní obraz

                          Dospělí       Děti       Kojenci



Tyčky                               do 5%      do 6%      do 8%



Granulocyty neutrofilní      40–70%  25-60%     17-60%

                  eosinofilní       do 4%      1-5%         1-5%

                  basofilní          do 1%     do 1%       do 1%



Monocyty                          do 7%      1-6%        1-6%



Lymfocyty                         25-45%   25-50%     20-70%





                                         Lymfocyty v periferní krvi

                                Isolace mononukleárních buněk z krve

                                CD klasifikační systém (Paříž 1982)

CD= cluster of differentiation

Molekuly buněčných membrán prokazované monoklonálními

protilátkami (metodikou průtokové cytometrie)



Odběr nesrážlivé krve (EDTA)



Lymfocyty T: CD3+(58-85%)   

                             Th: CD3+CD4+ (30-60% z CD3+)                  

                             Tc: CD3+CD8+  (15-35% z CD3+)

Lymfocyty B: CD19+ (7-23%)

Buňky NK:     CD16+CD56+  (6-20%)



(tč. asi 200 CD znaků, umožňujících  posouzení vývojového stadia

buněk a jejich aktivace).



                                  Základní subpopulace lymfocytů B

         BCR: IgM – Iga,Igb – CD19



    B-1B buňky 

    (minoritní subpopulace B-buněk v pleurální a peritoneální dutině, částečně ve střevě, tvoří
„přirozené protilátky“)

   

     B-2B buňky

    (predominantní  populace  B-buněk přítomná ve slezině  a v lymfatických uzlinách tvořená v
kostní dřeni v průběhu života)

                                    ZÁKLADNÍ SUBPOPULACE BUNĚK T



Th  (CD3/CD4+)

       Th1 (IFNg, TNF, LT, IL-2, IL-3, GM-CSF)

       Th2 (IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13)



Tc  (CD3/CD8+)

--------------------------------------------------------------

NKT (Va24-Ja18 a Vb11)

       poznávají glykolipidové antigeny s CD1

       aktivované produkují cytokiny (vč. IFNg a IL-4)      

                                          PAMĚŤOVÉ BUŇKY T



Centrální paměťové buňky (CCR7+, CD62L+)

    jsou v sekundárních lymfatických orgánech, vykazují nízkou cytolytickou aktivitu a omezenou
schopnost migrace; jsou nejúčinnější při systémových infekcích



Periferní (efektorové) paměťové buňky (CCR7-, CD62-)

    jsou v nelymfoidních tkáních (plíce, kůže, tuková tkáň), jsou cytolytické a mají výrazný
cirkulační potenciál; jejich lokalizace umožňuje bezprostřední reakci na infekce v periferních
tkáních

                                         REGULAČNÍ  BUŇKY T



Konstituční Treg (CD4+CD25+)

   neproliferují při polyklonální stimulaci, tlumí reakce T-buněk přímým kontaktem



Indukované Tr1 a Th3  (CD4+, IL-10, TGF-b)

   tlumí buňky Th1, Th2, ale i jiné buňky prostřednictvím cytokinů











                                      Průtokový cytometr (FACS)









                                   Proliferace lymfocytů in vitro
                            (polyklonální mitogeny, specifické antigeny)

                                   Tvorba imunoglobulinů in vitro

Stimulace: polyklonálními mitogeny

                antigeny



Detekce:   průkaz Ig v kultivační tekutině

                průkaz Ig na buněčné úrovni

                (ELISPOT)

                                       Intradermální aplikace
                                      diagnostických antigenů

                                      Pozitivní tuberkulinový test
                                 („pozdní“ – za 24 hod.-, indurace

                                   Reakce pozdní přecitlivělosti
                                     (IV. typ hypersenzitivity)