Cytochemická vyšetření
Bourková L., OKH, FN Brno
substrát

inkubační roztok
+
enzym

buňka
obarvené precipitáty

v místech přítomnosti enzymu
v buňce (v granulích)
Cytochemická reakce
Myeloperoxidáza
* Princip:
Peroxidáza přenáší vodík z vhodného donoru na peroxid.
Donor je oxidován a přeměněn na nerozpustnou sraženinu, ta
vzniká v místě peroxidázové aktivity a je následně obarvena.
* Hodnocení:
- pozitivita v primární granulaci leukocytů
- pozitivita je úměrná množství enzymu v leukocytárních
granulích
- intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- intenzita pozitivity: 0 až +++
- sleduje se barvení Auerových tyčí (nemusí být při
panoptickém barvení viditelné přes jádro).
- fyziologická pozitivita:
myeloidní buňky 0 / +++
monocyty 0 / +
lymfocyty 0
* Klinický význam:
Rozlišení myeloblastické nebo monoblastické leukemie od
lymfoblastické leukemie
AMMoL Lymfoblasty - negativní
Auerovy tyče
Nespecifické esterázy
např.: alfanapř.: alfa--naftylnaftyl--acetát esterázaacetát esteráza
* Princip:
Esteráza reaguje se substrátem nebo je reakce blokovaná NaF. V
místě aktivity enzymu vzniká v cytoplazmě obarvená sraženina.
* Hodnocení:
- pozitivita v granulích v cytoplazmě leukocytů
- pozitivita je úměrná množství enzymu v cytoplazmě
- intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- intenzita pozitivity: 0 až +++
- fyziologická pozitivita:
monocyty + až +++
myeloidní buňky, lymfocyty 0 až ++
- pozitivita po NaF:
monocyty zeslabení na 0 nebo +.
ostatních buňky: pozitivita stejná evt. snížená maximálně o +.
* Klinický význam:
- k rozlišení AML M4 a AML M5.
- zvýšené hodnoty NE a zablokování NE fluoridem: monocytární
charakter buňky
Mono: ++/+++
Granulo: +
NE+NaF: 0
PAS
PAS - Periodic Acid - Schiff
* Princip:
Průkaz polysacharidů
Kyselina jodistá rozkládá polysacharidy na dialdehydy, které dávají
specifickou červenou barvu se Schiffovým leukoprusinem.
* Hodnocení:
- pozitivita je úměrná množství enzymu v cytoplazmě
- intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- hodnocení typu pozitivity
- typy pozitivity:
myeloidní buňky:myeloidní buňky: difúzní zbarvení cytoplazmy
monocytymonocyty:: jemně granulární pozitivita
lymfocytylymfocyty -- fyziologické:fyziologické: negativní nebo ojediněle výraznější granula
lymfocytylymfocyty -- CLL:CLL: ve většině lymfocytů výrazná zrnitá pozitivita
blastyblasty -- ALL,ALL, nedifnedif. leukémie:. leukémie: hrubozrná pozitivita
NRBCNRBC -- fyziologické:fyziologické: negativní
NRBCNRBC -- patologické:patologické: hrubozrná ­ kapkovitá pozitivita
trombocyty atrombocyty a megakaryocytymegakaryocyty:: výrazně pozitivní.
* Klinický význam:
leukémie, MDS, anémie
AML - M6
pozitivita: difúzní, granulární
ALL
Poznámky
CytochemickáCytochemická vyšetření hodnotit v souvislosti s:vyšetření hodnotit v souvislosti s:
* ostatním cytochemickým vyšetřením
* morfologickým hodnocením a rozpočtem kostní
dřěně
* stádiem vyzrávání buněk
Cytochemické reakce
MPOX NE NE+NaF PAS
myeloid. b. -/+++ -/++ -/++ -/++
monocyt. b. -/+ +/+++ -/+ -/++
erytrocyt. b. - - - -/+++
lymfoc. b. - -/+ -/+ -/+++
Kyselá fosfatáza
* Princip:
Fosfatáza reaguje se substrátem nebo je reakce
blokovaná kyselinou vinnou. Reakce není blokována pro
izoenzym 5. V místě aktivity enzymu vzniká v
cytoplazmě obarvná sraženina.
* Hodnocení:
- pozitivita je úměrná množství enzymu v cytoplazmě
- fyziologická pozitivita:
lymfocyty, plazmatické buňky
granulocyty, monocyty, trombocyty
- pozitivita po kyselině vinné (tartaric acid):
pouze v lymfocytech s izoenzymem 5.
* Klinický význam:
- některé T - ALL, CLL
- pozitivita v lymfocytech po kyselině vinné pouze u
klasické formy vlasaté leukémie (HCL)
pozit.
negat.