Základní koagulační testy FN BRNO Dělení testů atesty globální ^ postihují celý systém (i více) atesty skupinové (screening) ^ postihují určitou část koagulačního systému ^ umožňují odlišení poruch vnitřní a vnější cesty a přeměny fibrinogenu atesty speciální ^ vyšetřují jednotlivé složky systémů FVIIa-TF TJDrjnogsn Protrombinový čas - PT ■^tromboplastinový čas dle Quicka * monitoruje zevní koagulační systém íé FFVII,X, II, V a fibrinogen * sledování času tvorby fibrinu po přídavku Ca2+ tromboplastinu k vyšetřované plazmě * reagencie Ca2+tromboplastin (různý původ) ^l Ca2+ (CaCy ^ T F (tkáňový faktor) ^1 PL (fosfolipidy) Aktivace kontaktem XII, PK HMWK XI Tkáňový tromboplastin + Ca2+ IX VIII . ^^ ""^ VII X v ^^ II I (fibrinoge ;n) —► Fibrin „ XIII Fibrinové koagulum Vyjadřování výsledků PT * koagulační čas v sekundách ( čas normálu) ^ poměr R = čas vyš. plazmy/ čas normálu ->INR (mezinárodní normalizovaný poměr) INR=RISI - pro léčbu kumariny ■* % normální koagulační aktivity - odečtení z kalibrační křivky ^ % zlomek normální hodnoty (100% = 1,0) Kalibrace PT * kalibrační materiál ^ směsná normální plazma ^ komerční kalibrační plazma (100%) ustanovení času normálu pro výpočet R, INR ^ průměr opakovaných měření ^ pro každý přístroj * vyšetření různých ředění kalibrační plazmy v případě vyjadřování výsledků v % ií 100%, 50%, 25%, 12,5% ^ log/log závislost International Normalized Ratio (INR) * mezinárodní normalizovaný poměr *INR= RISI * vyjadřování PT při léčbě kumariny *ISI = international sensitivity index ^ mezinárodní index citlivosti ^ vyjadřuje citlivost daného tromboplastinu stanovenou vůči mezinárodnímu standartnímu tromboplastinu ^ hodnota ISI stanovena • pro každou šarži reagencie j výrobcem reagencie j \S\< 1,5 International Normalized Ratio (INR) * vyjadřování výsledků pouze při léčbě kumariny * zajišťuje standardizaci testu * umožňuje porovnání výsledků PT ^ z jednotlivých laboratoří ^ testované různými reagenciemi Stanovení ISI Vyšetření PT: 103 logt 25 pacientů (minimálně) -léčených kumariny X -v terapeutickém rozmezí 5 normálů 9 CD O 3 cr o / směrnice / ISI =1,2 "H. p* t/3 <—K I—»• 3 D3 1 0 1( Testovaný tromboplastin ^°§ * Indikace vyšetření PT * základní koagulační test * predoperační vyšetření ■* krvácivý stav ^ léčba kumariny * podezření na patologický inhibitor Příčiny prodloužení PT * defekt faktorů vnějšího systému * patologický inhibitor ^ specifický ^ nespecifický ■* nedostatek vit. K ^kumariny * heparin (dle typu a dávky, dle citlivosti reagens) ■»FDP ■» novorozenec Defekty * vrozený iE defekt FF II, V, VII a X * získaný ^ snížená syntéza ^ zvýšená spotřeba ^ zvýšené ztráty Normální hodnoty a terapeutický rozsah Normální hodnoty ■> koagulační čas = 11 - 15 s ■» poměr R = 0,8 -1,2 * % normální aktivity = 70-120 % ^1 %zlomek normální hodnoty = 0,7 -1,2 Terapeuticky rozsah * INR = 2,0 - 4,0 (dle klinické indikace) * %, % zlomek N H ^1 liší se dle šarže reagencie ^1 neisou vhodné pro monitorování léčby!!!! Požadavky na PT reagencii * citlivost k defektům faktorů * citlivost na kumariny (ISI < 1,5) -»stabilita * snadná manipulace * citlivost k heparinu * citlivost k inhibitorům Aktivovaný parciální tromboplastinový test - APTT zmonitoruje vnitrní koagulační systém iÉ PK, HMWK, FF XII, XI, IX, Vlil ale i X, II, V a fibrinogen ■* sledování času tvorby fibrinu po přídavku aktivátoru, parciálního tromboplastinu a Ca2+ k vyšetřované plazmě Z reagencie ^ aktivátor (silica, kaolin, kys. elagová..) ^ parciální tromboplastin (kefalin=fosfolipidy) ^1 Ca2+ (CaCy Aktivace kontaktem (+ PL + Ca2+) XII, PK HMWK XI IX VIII Tkáňový tromboplastin + Ca2+ VII II I (fibrinogen) —► Fibrin XIII Fibrinové koagulum Vyjadřování výsledků APTT ■»koagulační čas v sekundách ( čas normálu) ■» poměr R = čas vyš. plazmy/ čas normálu Normální hodnoty ■» koagulační čas = 28 - 45 s ^1 závisí na typu reagencie ■»poměr R = 0,8-1,2 ^1 nezávisí na typu reagencie Kalibrace APTT * kalibrační materiál ^ směsná normální plazma ^ komerční normální plazma ustanovení času normálu pro výpočet R ^ průměr opakovaných měření ^ pro každý přístroj Indikace vyšetření APTT ■* základní koagulační test ■*• predoperační vyšetření ■* krvácivý stav ■* léčba heparinem (UFH) ilterapeutické rozmezí * závislé na typu reagencie • citlivé reagencie R = 2,0 - 5,0 • méně citlivé R = 1,5 - 3,0 ■* podezření na patologický inhibitor Citlivost různých typu APTT na heparin aPTT-R 10 8 0 0 0,2 0,3 0,4 0,5 heparin IU/ml 0,6 0,7 0,8 Příčiny prodloužení APTT ■* defekt faktorů vnitřního systému ■*• patologický inhibitor ^ specifický ^ nespecifický ■*• heparin * FDP ■* novorozenec ■*• arteficiálně (odběr, zpracování) Defekty faktorů * vrozený iE hemofílie A, hemofílie B, defekt FF XII, XI, PK, HMWK, vWF * získaný ^ snížená syntéza ^ zvýšená spotřeba ^ zvýšené ztráty Požadavky na APTT reagencii * citlivost k defektům faktorů * citlivost na heparin ■»citlivost k LA ^ množství PL ^ optimální zastoupení PL -»stabilita * snadná manipulace Klinický význam PT a APTT * screening hypokoagulace ^ prodloužení základních koagulačních testů * vyšetření hyperkoagulace ^ nutné provedení speciálních testů ^ zkrácení časů APTT (málo citlivé) • v porovnání s předchozím výsledkem • za vyloučení arteficiálního ovlivnění při odběru ^ PT není citlivé Korekční testy ■* sledování korekce (zkrácení) PT, APTT po přídavku normální plazmy (směs 1:1) ■* prodloužení se koriguje - defekt faktorů ■* prodloužení se nekoriguje - přítomnost inhibitoru ^ specifického ^ nespecifického Trombinový čas -TČ * monitoruje třetí fázi koagulace * vyšetření poruch štěpení fibrinogenu trombinem * sledování času tvorby fibrinu po přídavku trombinu k neředěné vyšetřované plazmě * reagencie - trombin (nízká koncentrace) * vyjadřování výsledků ^ koagulační čas v sekundách (norma < 18 /21/ s) ^ (poměr R) Aktivace kontaktem XII. PK HMWK XI IX VIII X V II Tkáňový tromboplastin + Ca2+ VII I (fibrinogen) —► Fibrin „ XIII Fibrinové koagulum Příčiny prodloužení TČ ■»hypo-, afibrinogenémie ■» dysfibrinogenémie * heparin ■»FDP ■»jiné patologické inhibitory (myelom, revmatoidní artritída) ■» novorozenec Reptilázový čas *test s trombinu podobným enzymem reptilázou ■*jed hada Bothrops atrox *na rozdíl od trombinu není ovlivněn heparinem * vyjadřování výsledků ^ koagulační čas v sekundách (norma < 18 /21/s) * klinický význam j stejný jako TČ s výjimkou vlivu heparinu Fibrinogen (Fbg) * základní koagulační test * metody stanovení fibrinogenu ^ funkční - vyšetření schopnosti přeměny na fibrin (metoda dle Clause) ^ vyšetření množství (EID) * metoda dle Clause ^ sledování času tvorby fibrinu po přídavku nadbytku trombinu k ředěné vyšetřované plazmě ^ reagencie - trombin (vysoká koncentrace) Kalibrace fibrinogenu * vyjadřování výsledků v g/l (norma 1,8 -3,5 g/l) * odečet z kalibrační křivky (log/log závislost) * kalibrace ^ komerční kalibrační plazmy ^ vyšetření různých ředění * omezení metody -nutnost opakování vyšetření ^ u nízkých hladin Fbg (menší ředění a přepočet) ^ u vysokých hladin Fbg (větší ředění a přepočet) Fibrinogen - klinický význam Snížení * vrozené hypo-, afibrinogenémie ^těžké poruchy jaterního parenchymu (syntéza) * zvýšená spotřeba (DIC) * zvýšené ztráty ■^trombolytická léčba ■* dysfibrinogenémie Fibrinogen - klinický význam Zvýšení těhotenství zánět nádorová onemocnění stavy po operaci Trombinový čas Neředěná plazma obsahující: fibrinogen antitrombiny heparin FDP... trombin v J \^. —^ Cas koagulace závisí na zbytkové aktivitě trombinu Fibrinogen trombin f ředěná plazma (méně Fbg, antitrombinu...) v Cas koagulac na koncentraci f e závisí ibrinogenu Kontroly kvality (rutinní koagulace) * interní kontroly kvality j kontroly správnosti • shoda mezi naměřenou hodnotou a hodnotou udanou výrobcem kontrolního materiálu j kontroly přesnosti • shoda mezi výsledky opakovaných měření stejného kontrolního materiálu j porovnatelnost přístrojů • shoda mezi výsledky měření na různých přístrojích * externí kontroly kvality