Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 5
Jméno: Kruh: Datum:
P5, str. 1
Diagnostika hemofilů a G­ nefermentujících tyčinek
Tabulka pro hlavní výsledky úkolů 1 až 5:
Kmen K L M N P Q R S
Gramovo barvení Úkol
1
Růst na KA
(A/N)
Růstové
charakteristiky
na
KA (ČA*)
Endova p.
(­/L-/L+)
Kul-
tiva-
ce
Úkol
2
MH agar
(barva)
Úkol 3a Satelitový
fenomén (+/­)
Úkol 3b Růstové f.
(X, V, X + V)
Fermentace gluk.
Úkol 4 (Hajna)
Oxidázový test
Úkol 5a
NefermTest 24
(Úkol 5b)
KONEČNÝ
ZÁVĚR
*Pro bakterie nerostoucí na krevním agaru (KA) použijte čokoládový agar (ČA)
Úkol č. 1: Mikroskopie kmenů
Na stole máte kmeny popsané písmeny. Obarvěte je podle Grama, a do tabulky vepište výsledky. Kmen, který
NENÍ G­ tyčinka, nebude studován v úkolech 3 až 5 (ale v úkolu 2 si ho pro srovnání popište)
Úkol č. 2: Kultivace na agarových půdách
Nejdříve napište, které bakterie rostou na krevním agaru a které ne. Pak, používajíce standardních procedur,
popište kolonie všech kmenů na krevním agaru. Pouze ty, které na KA nerostou, popište na čokoládovém agaru.
Poté popište růst na Endově půdě (stačí ,,­" pokud nerostou, ,,L+" pro laktóza pozitivní a ,,L­" pro laktóza
negativní) a na MH agaru (jen ,,­" nebo ,,+", a případně přítomnost specifického zbarvení).
Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 5
Jméno: Kruh: Datum:
P5, str. 2
Úkol č. 3: Identifikace hemofilů a jejich přesnější určení
a) Satelitový fenomén
Hemofily jsou typické takzvaným satelitovým
fenoménem. To znamená, že samy o sobě nerostou na
krevním agaru, ale jsou tam schopny růst v přítomnosti
kmene, který pro ně z krvinek uvolní růstové faktory. Pro
tento účel se zpravidla používá kmen Staphylococcus
aureus. Zakreslete satelitový fenomén a spojte popisky
s příslušnými jevy na obrázku
b) Identifikace hemofilů podle potřeby růstových faktorů
Určete dané kmeny podle potřeby růstových faktorů. Zakreslete výsledek faktorového testu pro oba kmeny.
Úkol č. 4: Hajnova půda
Prohlédněte si kultivační výsledky čtyř kmenů na Hajnově půdě. Kmen, který fermentuje glukózu (žlutá barva)
označte jako ,,+", kmeny nefermentující (červená) jako ,,­".
Úkol č. 5: Určení G­ glukózu nefermentujících bakterií
a) Oxidázový test
Demonstrace oxidázového testu u tří kmenů určených jako G­ nefermentující bakterie. Zapište výsledky do
tabulky. (Pseudomonas je vždy pozitivní, Burkholderia většinou, ale ne nutně pozitivní; na druhou stranu,
Stenotrophomonas bývá zpravidla negativní).
Oxidáza pozitivní bakterie s typickou vůní a pigmentem (zpravidla zeleným, řidčeji modrým či zrzavým) je
prakticky s jistotou Pseudomonas aeruginosa. U této bakterie tedy není nutno provádět další biochemické
testování, popsané v úkolu 5a. U ostatních dvou kmenů je toto biochemické testování nezbytné.
b) Podrobné biochemické testování
Vyhodnoťte předložené výsledky NEFERMtestu 24, který byl připraven DVA dny předem (rozdíl oproti jiným
biochemickým testům) při 30 °C (další rozdíl; jiné testy vyžadují 37 °C). Také způsob odečítání testu je jiný,
protože zde máme tři řady. Testy v horní řadě mají vždy hodnotu ,,1", v prostřední ,,2" a v dolní ,,4". První
číslice je z oxidázového testu: ,,0" pro negativní, ,,1" pro pozitivní oxidázu. Z reakcí v důlcích B a A se číslice
Staphylococcus aureus Kolonie hemofilů
Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 5
Jméno: Kruh: Datum:
P5, str. 3
nevypočítávají. Máme tedy sedmimístný kód ­ první pozice je ,,0" (oxidáza ­) nebo ,,1" (oxidáza +) a dalších
šest může nabývat hodnot 0 až 7 dle výsledku testů ve sloupcích H až C.
Kmen: OX H G F E D C B A Kód:
1 Identifikace:
2 % pravděpodobn.:
4 Index typičnosti:
Kód
Kmen: OX H G F E D C B A Kód:
1 Identifikace:
2 % pravděpodobn.:
4 Index typičnosti:
Kód
Poznámky:
Úkol č. 6: Testy citlivosti patogenů na antibiotika
Mezi vašimi bakteriemi je pět patogenních: dvě z čeledi Pasteurellaceae a tři G­ nefermentující. Zapište celé
názvy antibiotik a změřte velikost zón. Zapište kmeny jako citlivé (C) resistentní (R) a dubiózní (D). (Dubiózní
jsou ty, které mají velikost zóny právě hraniční.)
Test pro hemofily
Kmen Kmen
Antibiotikum
(celé jméno)
 zóny (mm) Interpr. Antibiotikum
(celé jméno)
 zóny (mm) Interpr.
Test pro G­ nefermentující
Kmen
Antibiotikum
(celé jméno)
 zóny
(mm)
Interpr.  zóny (mm) Interpr.  zóny (mm) Interpr.
Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 5
Jméno: Kruh: Datum:
P5, str. 4
Úkol č. 7: Vztahy bakterií ke kyslíku ­ porovnání enterobakterií, Gnefermentujících
a anaerobů
Podívejte se na bujóny kultivované za aerobních a anaerobních podmínek (vrstva parafinu na povrchu),
vyhodnoťte růst bakterií a jeho charakter.
Kmen
Růst v bujónu
Růst ve VL bujónu
Závěr
Kontrolní otázky:
1. Za jakých okolností jsou hemofily schopny růst na krevním agaru? Proč?
2. Ve kterém materiálu nejspíše nalezneme Pasteurella multocida?
3. Který hemofil je nejvíce patogenní? Které závažné infekce způsobuje?
4. Proč v posledních letech u nás klesá počet batolecích meningitid působených hemofily?
5. Proč zpravidla u Pseudomonas aeruginosa není nutno provádět biochemické testování?
6. Jaké infekce nejčastěji způsobují gramnegativní nefermentující tyčinky?
7. Navrhněte antibiotika vhodná pro léčbu infekcí způsobených nefermentujícími tyčinkami.