Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 1 Jméno: Kruh: Datum: P1, str. 1 Diagnostika stafylokoků Úkol č. 1: Mikroskopie infekčního materiálu V mikroskopu sledujte preparát obarvený podle Grama. Popište a zakreslete sledované útvary. Všímejte si přítomnosti bakterií (jejich tvaru, barvitelnosti a množství) dále také leukocytů, epitelií a vzájemného poměru mezi nimi. Úkol č. 2: Mikroskopie kultur mikroorganizmů Obarvěte podle Grama čisté kultury předložených mikroorganismů označené písmeny. Výsledky pozorování zakreslete. Úkol č. 3: Růst na krevním agaru Popište morfologii kolonií jednotlivých předložených kmenů bakterií narostlých na krevním agaru, zvláště si všímejte barvy a jejich hemolytických vlastností. Číslo kmene Popis kolonie (velikost, barva,tvar, povrch, okraje, hemolýza) Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 1 Jméno: Kruh: Datum: P1, str. 2 Úkol č. 4: Růst bakterií na krevním agaru s 10 % NaCl Zhodnoťte schopnost růstu předložených kmenů na krevním agaru s 10 % NaCl, který slouží jako selektivní půda pro stafylokoky. Na krevním agaru s 10 % NaCl rostu kmeny:.................. Úkol č. 5: Katalasový test Prokažte přítomnost enzymu katalasy. Setřete mikrobiologickou kličkou kolonie předložených kmenů a vneste je do kapky 3% H2O2 na podložním sklíčku. Zaznamenejte reakci u předložených kmenů. Číslo kmene reakce interpretace Na základě úkolů č. 2 - 5 vyberte z předložených kmenů bakterie rodu Staphylococcus: ........................ Pomocí následujících úkolů určete, o které stafylokoky se jedná:........... Úkol č. 6: Plazmokoagulasový test - průkaz plasmakoagulasy volné Do 0,5 ml 10x ředěné králičí plazmy bylo suspendováno několik kolonií vyšetřovaného kmene stafylokoka. Suspenzi inkubujeme v termostatu při 37 °C. Výsledek se hodnotí po 1, 2 a 24 hodinách. Jako pozitivní se reakce hodnotí pokud dojde ke koagulaci králičí plazmy ve zkumavce, tj. dojde k zrosolovatění celého, příp. části, obsahu zkumavky. Zapište a zakreslete výsledek této reakce u vybraných kmenů po 24 hodinách inkubace. Pozitivní: Negativní: Úkol č. 7: Průkaz hyaluronidasy Na krevním agaru naočkujeme asi 1 cm širokou čáru Streptococcus equi, bakterie, která tvoří silné pouzdro s obsahem hyaluronidasy. Kolmo k této čáře naočkujeme čáru s vyšetřovaným kmenem stafylokoka. Pokud je příslušným kmenem stafylokoka hyaluronidasa produkována, Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 1 Jméno: Kruh: Datum: P1, str. 3 difunduje do okolí a do druhého dne způsobí lýzu pouzdra Str. equi. To se projeví plochým ,,vykousnutím" v slizovité čáře Str. equi. Zakreslete výsledek reakce (včetně pozitivní a negativní kontroly) a popište. Předložené kmeny stafylokoků byly určeny jako: Úkol č. 8: Citlivost stafylokoků k antibiotikům Zjistěte citlivost předložených kmenů stafylokoků k vybraným antibiotikům, pomocí diskového difuzního testu. Citlivost k předkládaným antibiotikům zhodnoťte na základě srovnání zjištěného průměru inhibiční zóny s příslušnou hraniční zónou. Seznam testovaných antibiotik a hodnoty jejich hraničních zón najdete v přiložené tabulce. Výsledky testu pro jednotlivá antibiotika (průměr inhibiční zóny i interpretaci) zapište. S. aureus S. epidermidis Antibiotikum Průměr zóny (mm) Intepretace Průměr zóny (mm) Intepretace Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 1 Jméno: Kruh: Datum: P1, str. 4 Kontrolní otázky: 1. Jaké jsou významné charakteristické vlastnosti rodu Staphylococcus (metabolické, morfologické a růstové vlastnosti)? 2. Jak odlišíme S. aureus od tzv. koagulázanegativních stafylokoků? S. aureus koagulázanegativní stafylokoky 3. U kterých dalších stafylokoků, mimo S. aureus, se můžeme setkat s přítomností plazmokoagulasy? 4. S jakými infekcemi způsobenými zástupci rodu Staphylococcus se v zubním lékařství můžete setkat? 5. Jaká jsou nejvýznamnější protistafylokoková antibiotika? 6. Co je to MRSA a jaké přináší problémy při terapii stafylokokových infekcí?