Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 6 Jméno: Kruh: Datum: P6, str. 1 Diagnostika některých dalších gramnegativních bakterií (Neisseria, Moraxella, Bordetella, Legionella, Francisella.....) Tabulka pro hlavní výsledky úkolů 1 až 4: Kmen K L M N P Gramovo barvení kmene ­ Úkol 1b "Chudý" KA ("KA") Růst A/N "Bohatý" KA ("KA+") Růst A/N Čokoládový agar Růst A/N KultivaceÚkol2 Popis kolonií na KA+* a) Oxidázový test (+/­)Úkol 3 b) Indoxylacetátový (INAC) test KONEČNÝ ZÁVĚR (výsledek úkolu 4 NeisseriaTest, resp. úkolu 1 pro kmen který není gramnegativním kokem) *U bakterií nerostoucích na KA+ použijte výsledek růstu na ČA Úkol č. 1: Mikroskopie klinického vzorku a mikroskopie kmene a) Pozorování uretrálního nátěru u kapavky Prohlédněte si Gramem barvený nátěr. Nevšímejte si jen bakterií, ale také buněk makroorganismu, zejména leukocytů. Povšimněte si, že koky nejsou přítomny v každém leukocytu. Zakreslete, a spojte popisky objektů s pozorovanými objekty na obrázku. Poznámka: Velmi podobně by také vypadala mikroskopie u hnisavého mozkomíšního moku v případě akutní meningokokové meningitidy. b) Mikroskopie suspektních kmenů ­ hledání G­ koků Na stole máte kmeny označené písmeny. Obarvěte je podle Grama a zapište výsledky do tabulky. Kmen, který není G­ kokem, nebude studován v úkolech 3 a 4; ve druhém úkolu si jej však pro srovnání popište také. Úkol č. 2: Kultivace na agarových půdách Zapište do tabulky, které bakterie rostou na ,,chudém KA", ,,bohatém KA" a na čokoládovém agaru. Ústní druhy neisserií stejně jako moraxely a většina G+ koků rostou i na chudším krevním agaru. Neisseria meningitidis (,,meningokok") roste jen na bohatších krevních agarech. Neisseria gonorrhoeae (gonokok) na krevním agaru neroste vůbec, je nutný čokoládový agar. Poté popište kolonie všech kmenů na KA+, jen kmen, který tam neroste, popište na ČA. Výsledky zapište do tabulky. bílé krvinky G­ koky ve dvojících __________________ __________________ ____________ Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 6 Jméno: Kruh: Datum: P6, str. 2 Úkol č. 3: Základní biochemické testy u G- koků Oba testy budou prováděny demonstračně na bočním stole. Zapište výsledky do tabulky. a) Oxidázový test Učitel se dotkne několika kolonií kmenů identifikovaných jako G- koky oxidázovým diagnostickým papírkem. V případě pozitivity se během několika vteřin objeví modré zbarvení. Zakreslete a zapište výsledky do tabulky. b) Indoxylacetátový test Postup je podobný jako u oxidázového testu, ale proužek musí být předem zvlhčen, místo modré barvy pozorujete barvu modrozelenou a výsledek není viditelný okamžitě, ale je třeba několik minut počkat. Zakreslete pozitivní a negativní výsledek a zapište výsledky do tabulky. Úkol č. 4: Druhová diagnostika neisserií a branhamel biochemickými testy U kmenů určených jako G­ koky odečtěte biochemický mikrotest (NEISSERIAtest fy Lachema) naočkovaný předchozí den. Odečtěte podle schématu. První jamka obsahuje negativní kontrolu, takže vlastní test začíná až od DRUHÉ jamky! Zakápnutí Lugolovým roztokem již bylo provedeno, nemusíte je provádět sami. Povšimněte si nízké biochemické aktivity některých neisserií. Porovnejte výsledek s růstovými vlastnostmi (kmen určený jako gonokok by měl růst pouze na čokoládovém agaru, meningokok pouze na čokoládovém a bohatém krevním agaru). Kmen: H G F E D C B A NEC Kód: Identifikace: × 1 2 4 1 2 4 1 × Kmen: H G F E D C B A NEC Kód: Identifikace: × 1 2 4 1 2 4 1 × Kmen: H G F E D C B A NEC Kód: Identifikace: × 1 2 4 1 2 4 1 × Kmen: H G F E D C B A NEC Kód: Identifikace: × 1 2 4 1 2 4 1 × Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 6 Jméno: Kruh: Datum: P6, str. 3 Úkol č. 5 Test citlivosti G- koků na antibiotika Na stole naleznete difusní diskové testy citlivosti na antibiotika u kmenů, které jste určili jako G­ koky a které patří k patogenním druhům. Do tabulky dopište zkratky antibiotik dle přiložené kartičky a pro všechny testované kmeny změřte zóny citlivosti. Na kartičce máte napsány hraniční zóny ­ podle nich interpretujte zóny vámi zjištěné jako citlivé (C), rezistentní (R) a dubiózní (D). Kmen Antibiotikum (celé jméno) zóny (mm) Interpr. zóny (mm) Interpr. zóny (mm) Interpr. zóny (mm) Interpr. Úkol č. 6 Kultivační diagnostika bordetel Existuje speciální médium pro druh Bordetella pertussis a speciální způsob očkování na tuto půdu. Na rozdíl od mnoha jiných bakterií je Bordetella rezistentní k penicilinu. Proto začínáme kápnutím kapky penicilinového roztoku doprostřed misky s agarem. Výtěr je smíchán s kapkou a očkován ve směru spirály. Poté jsou očkovány radiální paprsky kličkou. Napište název půdy a zakreslete postup očkování podle obrázku. Název půdy: ____________________ Kontrolní otázky: 1. Jaké vzorky se doporučuje odebrat při podezření na kapavku? A jak je potřeba je transportovat do laboratoře? 2. Jaké rozdíly lze pozorovat při odběru mozkomíšního moku u zdravého člověka a u člověka s purulentní meningitidou? (Míněny rozdíly pozorované u lůžka, ne v laboratoři.) 3. Neisseria i Branhamella jsou obě gramnegativní. Znamená to tedy, že rostou na Endově půdě? Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 6 Jméno: Kruh: Datum: P6, str. 4 4. Které druhy neisserií jsou biochemicky nejméně aktivní a které cukry štěpí? 5. Který původce meningitid je důležitý u předškoláků (přinejmenším byl do zavedení očkování), který u teenagerů a který u seniorů? 6. Jakým způsobem se lze nejspíše nakazit tularémií?