Téma P07: Diagnostika anaerobních bakterií

Ke studiu: Clostridium; nesporulující anaeroby (učebnice, WWW atd.)

Z jarního semestru: Mikroskopie, kultivace, biochemická identifikace, pokus na zvířeti,
neutralizace

Tabulka pro hlavní výsledky úkolů 1 až 4 (k postupnému vyplnění):

Kmen

A

B

C

D

Gramovo barvení – Úkol 1b

(včetně případných údajů o tvorbě spor)





Kultivace: úkol 3 2

Krevní (“KA”) Růst A/N





 VL agar (“VLA”) Růst A/N





 VL bujón Růst A/N





Popis kolonií na KA/VLA*








KONEČNÝ ZÁVĚR (výsledek Úkolu 4 – AnaeroTest, nebo, u ne-anaerobů, výsledky předchozích testů)





*Použijte VLA (VL agar) u bakterií, které nerostou na krevním agaru

Úkol 1: Mikroskopie klinického vzorku a mikroskopie kmene

a) Prohlídka klinického vzorku


________________________________________________________________________________

Prohlédněte si Gramem barvený preparát.

Pravděpodobně najdete směs různých bakterií, jak je to u anaerobních infekcí typické: za infekci
nemůže jeden patogen, ale směs patogenů. Vedle bakterií můžete vidět leukocyty (zejména
polymorfonukleráry), případně epitelie, tkáňovou drť a tak dále.

Nezapomeňte obrázek popsat (použijte čáry)!

b) Mikroskopie podezřelých kmenů

Anaerobní bakterie mohou být koky i tyčinky, grampozitivní i gramnegativní; v tom se neliší od
jiných bakterií. Bývají ale pleomorfnější. U rodu Clostridium je přítomnost a pozice endospor
užívána jako významný diagnostický znak. Pokuste se u jednoho z vašich kmenů (robustní G+ tyčinky)
endospory najít.

Úkol 2: Anaerostat a anaerobní box

K získání anaerobiózy používáme v naší laboratoři tři způsoby:


a) pro tekuté půdy se jako bariéra médium/atmosféra používá parafinový olej (není dokonalé)

b) pevné půdy dáváme do anaerostatu, kde je kyslík chemicky nahrazen směsí plynů

c) pevné půdy lze také umístit do anaerobního boxu; anaerobní atmosféra je vháněna z bomby.


Vepište do obrázků svůj popis (anaerostat uvidíte doopravdy a spolu s anaerobním boxem také na
obrázku).

Úkol 3: Kultivace na agarových půdách

Popište kultivační výsledky daných kmenů na aerobních i anaerobních půdách.

a) Aerobní kultivace na krevním agaru (KA)

Napište, zda bakterie rostou či nikoli, případně též popište jejich kolonie.

b) Anaerobní kultivace na VL agaru (VL krevním agaru)

VL (krevní) agar je podobný krevnímu agaru, ale má snížený redoxní potenciál a kultivuje se
v anaerostatu či anaerobním boxu. Napište, které kmeny zde rostou a ty, které nerostly na KA,
popište.

c) Pomnožení anaerobů ve VL bujónu

VL bujón se používá pro pomnožení málo početných anaerobních bakterií. Zkontrolujte přítomnost
zákalu (růstu) ve VL bujónu a porovnejte s výsledky části b).

Úkol 4: Druhová diagnostika anaerobů biochemickými testy

U kmenů určených jako anaeroby použijeme biochemický mikrotest (ANAEROtest 23 Lachema) naočkovaný o
dva dny dříve. Odečtěte podle schématu. Pozor, kódová kniha má tentokrát čtyři části, musíte tedy
najít správnou část dle výsledků mikroskopie. Výsledky sloupců „B“ a „A“ se neuapočítávají, získáte
tedy šestimístný kód za sloupce H až C.

Kmen:


        H

         G

          F

           E

            D

             C

              B

               A

                                                                                                               Kód:



     1









                Identifikace:


     2









                % pravděpodobn.:


     4









                Index typičnosti:


     Kód











Kmen:


        H

         G

          F

           E

            D

             C

              B

               A

                                                                                                               Kód:



     1









                Identifikace:


     2









                % pravděpodobn.:


     4









                Index typičnosti:


     Kód











Notes:

Úkol 5 Citlivost anaerobů na antibiotika

Na stole naleznete difusní diskové testy citlivosti na antibiotika u kmenů, které jste určili jako
G– koky a které patří k patogenním druhům. Do tabulky dopište zkratky antibiotik dle přiložené
kartičky a pro všechny testované kmeny změřte zóny citlivosti. Na kartičce máte napsány hraniční
zóny – podle nich interpretujte zóny vámi zjištěné jako citlivé (C), rezistentní (R) a dubiózní
(D).

                                              Kmen �





                                           Antibiotikum

                                           (celé jméno)

                                                                                                   Æ zóny (mm)

                                                                                                               Interpr.

                                                                                                                      Æ zóny (mm)

                                                                                                                                  Interpr.

































Kontrolní otázky:

1. Kde se v lidském těle vyskytují za fyziologických podmínek anaerobní bakterie? Jak se dostávají
do jiných tkání, kde pak způsobují záněty?




2. Jaké jsou principy odběru a transportu vzorku při podezření na anaerobní infekce?




3. Které anaerobní bakterie zpravidla nacházíme v ústní dutině a které se zde mohou podílet na
patologických procesech?






4. Jmenujte alespoň tři antibiotika vhodná k léčbě anaerobních infekcí