Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 8
Jméno: Kruh: Datum:
P8, str. 1
Téma P08: Laboratorní diagnostika tuberkulózy,
aktinomycet a nokardií
Úkol 1: Mikroskopie acidorezistentních a částečně acidorezistentních
mikroorganizmů
Zatímco acidorezistentní mikroorganizmy (Mycobacterium) nelze barvit dle Grama, mikroby acidorezistentní
pouze částečně (Actinomyces, Nocardia) mohou být gramem obarveny, ale barví se nekonstantně, a také
nabývají větvených filamentózních forem.
a) Barvení (negativního) klinického materiálu barvicí metodou dle Ziehl-
Neelsena
Ziehl-Neelsenovo barvení se používá u mykobakterií (M.
tuberculosis, M. leprae), ale také u některých parazitů
(Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis).
Acidorezistentní organizmy se barví pouze při zahřátí, zato
je pak neodbarví ani kyselý alkohol (alkohol s minerální
kyselinou). Poté je odbarvené pozadí obarveno kontrastní
barvou.
Obarvěte vzorek sputa dle Ziehl-Neelsena (varianta
s methylenovou modří). Mikroskopujte. Zde
acidorezistentní tyčinky nenaleznete. Zakreslete výsledky, uvidíte především přirozené pozadí, tj. leukocyty,
epitelie a další objekty. Nezapomeňte obrázek popsat (za použití řádků vedle obrázku).
Popište také barvicí proceduru ­ do následující tabulky zapište názvy činidel používaných při barvení.
1. Během barvení se preparát , dokud
2. Činidlo je směsí a
3. Místo tohoto barviva lze použít také
b) Mikroskopie mykobakteriální kultury
Prohlédněte si v mikroskopu (imerze, imerzní objektiv)
mykobakteriální kulturu barvenou dle Ziehl-Neelsena.
Zaznamenejte zejména přítomnost acidorezistentních
tyček. Pozorování zakreslete. Nezapomeňte obrázek popsat
(za použití řádků vedle obrázku).
c) Mikroskopie kmenů actinomycet a
nokardií
Prohlédněte si mikroskopicky dle Grama barvené sklíčko.
Popište a zakreslete pozorované objekty. Povšimněte si
velkého polymorfizmu organismů (od kokovitého tvaru
přes tyčinky až po vlákna, často větvená); grampozitivní,
ale často až gramlabilní).
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 8
Jméno: Kruh: Datum:
P8, str. 2
Úkol 2: Kultivace mykobakterií, aktinomycet a nokardií
Kultivační nároky acidorezistentních a částečně acidorezistentních bakterií jsou velmi různorodé.
o Pro Mycobacterium tuberculosis používáme tekuté (Šula) a pevné půdy (Ogawa, Löwenstein-Jenssen).
Pevné půdy se liší od většiny půd používaných v bakteriologii, protože neobsahují agar; jejich
,,pevnost" je dána koagulovanou vaječnou bílkovinou. Před kultivací je nutno vzorky mořit.
o Pro rod Nocardia postačuje běžný krevní agar.
o Pro rod Actinomyces je nutný VL-agar a kultivace v anaerostatu či anaerobním boxu (viz P07), protože
jsou anaerobní.
a) Popiště půdy pro kultivaci mykobakterií
Název půdy tekutá/pevná barva poznámky
b) Popiště a zakrslete růst kolonií rodů Mycobacterium, Actinomyces a
Nocardia na (v) daných médiích
Baktérie Název půdy Přítomnost/nepřítomnost růstu, případně charakterizace růstu
(charakterizujte růst vlastními slovy)
Mycobacterium
krevní agarActinomyces
VL agar
krevní agarNocardia
VL agar
Úkol 3: Určení citlivosti na antimikrobiální látky
K léčbě mykobakteriálních infekcí se používají speciální léky zvané antituberkulotika. Liší se také způsob
testování citlivosti: antituberkulotika se přímo přídávají do půdy. Infekce působené rody Actinomyces a
Nocardia se léčí ,,normálními" antibiotiky a citlivost se testuje ,,normálním" difuzním diskovým testem.
a) Určení citlivosti mykobakterií na antituberkulotika
Porovnáním s kontrolní zkumavkou odečtěte testy citlivosti kmenů mykobakterií na antituberkulotika.
Antituberkulotikum Pozitivní
kontrola
Růst A/N
Interpretace
b) Citlivost na antibiotika u kmenů Nocardia a Actinomyces
Proveďte in vitro testování citlivosti na antibiotika u nokardií a aktinomycet. Na stole naleznete difusní diskové
testy. Do tabulky dopište zkratky antibiotik dle přiložené kartičky a pro všechny testované kmeny změřte zóny
Lékařská orální mikrobiologie Téma P - 8
Jméno: Kruh: Datum:
P8, str. 3
citlivosti. Na kartičce máte napsány hraniční zóny ­ podle nich interpretujte zóny vámi zjištěné jako citlivé (C),
rezistentní (R) a dubiózní (D).
Kmen
Antibiotikum
(celé jméno)
 zóny (mm) Interpretace  zóny (mm) Interpretace
Úkol 4: PCR v diagnostice TBC
Jelikož je kultivace mykobakterií obtížná, stává se PCR velmi důležitou diagnostickou metodou. Odečtěte
výsledek PCR TBC (z prezentace), zapište a interpretujte výsledky.
Pacient č. Proužek vzorku Interní kontrola Interpretace
1
2
3
4
Kontrolní otázky:
1. Jaké vzorky se odebírají při podezření na TBC?
2. Jak dlouho trvá kultivace M. tuberculosis?
3. Proč je nutné moření před kultivací M. tuberculosis?
4. Za jakých podmínek a jak dlouho rostou aktinomycety a nokardie?
5. Z jakého důvodu se v diagnostice TBC prosazuje automatická kultivace?
6. Jak by ve čtvrtém úkolu vypadala ,,inhibice reakce", a jak by se takový výsledek interpretoval?