Stanovení hormonů Miroslava Beňovská Hormony •Látky specificky reagující na metabol. děje v organismu •Většinou tvořeny v endokrinních žlázách •Krví přenášejí informace do buněk cílových orgánů po vazbě na specifické receptory (nebo bez spec. receptorů) •V krvi hormony často vázány na specifické transportní bílkoviny •Biologicky účinné jen formy volné Podle chemického složení rozlišujeme hormony • •bílkovinné a peptidové (hormony pankreatu, hypotalamu, hypofýzy, příštítné žlázy) •steroidní (hormony pohlavních žláz a kůry nadledvin) •odvozené od aminokyseliny tyrosinu (hormony štítné žlázy a dřeně nadledvin) •odvozené od mastných kyselin (prostaglandiny ) METODY STANOVENÍ – •Chromatografické metody (HPLC, GC, LC/MS/MS, ID-GC/MS, ID-LC/MS/MS, ID-HPLC/MS ) – i metody referenční • Často nutná úprava vzorku (derivatizace, extrakce) • •Imunoanalytické metody • s luminometrickou detekcí (LIA, ILMA, CMIA, ECLIA) • s fluorometrickou detekcí ( MEIA, FPIA) • s fotometrickou detekcí (ELISA, EMIT) • s detekcí radioaktivity (RIA, IRMA) • •Multiplexové metody MULTIPLEXOVÉ METODY •Princip xMAP technologie (microarraye partical): •100 druhů mikrokuliček (magnetické) rozlišených kombinací dvou fluorescenčních barev •Na každém druhu kuličky molekula umožňující specifickou vazbu jednoho analytu •Na kuličku je navázán analyt a druhá protilátka Kuličky protékají přístrojem (Luminex 100 IS, Luminex Corp.) - princip flow cytometrie •Měří se fluorescence vzniklé po excitaci dvěma lasery – z nich se vyhodnotí – druh a množství analytu MULTIPLEXOVÉ METODY- vlastnosti •xMAP technologie poskytuje možnost simultanního měření až 100 analytů v jedné jamce mikrotitrační destičky •Analýzu je možné provádět pro předem připravené panely vyšetření – př. cytokiny •Potřeba velmi malého objemu •Nižší cena za vyšetření •Dlouhá inkubace a nutnost práce ve větších sériích •Metodika je vhodná pro měření imunochemických metod, mukleových kyselin, enzymů • Biočipová array technologie: •Imunoanalýza založená na simultánní multianalýze • •Na jednom biočipu se analyzují celé panely příbuzných testů • •Principem stanovení je ELISA (přístroj Evidence, Randox) HORMONY ŠTÍTNÉ ŽLÁZY •TYROXIN (CELKOVÝ A VOLNÝ, T4 A FT4) •Speciální preanalytické požadavky: separaci séra nebo plazmy provést do 6h po odběru •Referenční hodnoty: 60-150 nmol/l (T4) a 9,1-23,8 pmol/l (FT4) • • TRIJODTYRONIN (CELKOVÝ A VOLNÝ, T3 A FT3) •Speciální preanalytické požadavky: separaci séra nebo plazmy provést do 6h po odběru •Referenční hodnoty: 1,21-2,29 nmol/l (T3) a 2,2-5,3 pmol/l(FT3) Další látky, které nejsou hormony, ale týkají se metabolismu štítné žlázy •TYREOGLOBULIN ( THYROGLOBULIN, THG) •Referenční hodnoty: do 55 ug/l •glykoprotein obsahující jod, prekursor tyroxinu a trijodtyroninu, tvořený dvěma podjednotkami • • PROTILÁTKY PROTI TYREOIDÁLNÍ PEROXIDÁZE (ANTI- • TPO, TPOAB) •Referenční hodnoty: do 50 kU/l (U/ml) •mohou se zúčastnit na poškození tyreocytů • •PROTILÁTKY PROTI TYREOGLOBULINU (ANTI-TG, TGAB) •Referenční hodnoty: do 150 kU/l (U/ml) • •PROTILÁTKY PROTI RECEPTORŮM TSH (TRAK) •Referenční hodnoty: negativní <1,0 U/l (Brahms)<1,5 U/l (Roche) • „šedá zóna“ 1,0-1,5 U/l 1,5-1,75 U/l • pozitivní >1,5 U/l >1,75 U/l POHLAVNÍ HORMONY – •Androgeny (testosteron) •Estrogeny (estradiol, estron, estriol) •Gestageny (progesteron) • • Sekrece pohlavních hormonů řízena hypofyzárními gonadotropiny; luteinisačním hormonem (LH) a hormonem stimulujícím folikuly (FSH) • • Hlavním transportním proteinem pohlavních hormonů je sexuální hormony vázající globulin (SHBG) POHLAVNÍ HORMONY •TESTOSTERON •Referenční hodnoty: ženy 0,2-2,9 nmol/l, • muži 9,9-27,8 nmol/l •v krvi vázaný na bílkoviny, část je volná •změny koncentrace vazebných bílkovin mohou ovlivnit koncentraci, v praxi se používá index volných androgenů (FAI), vypočítaný jako poměr testosteronu celkového a SHBG • •ESTRADIOL (17-Β-ESTRADIOL) • •Referenční hodnoty: ženy: folikulární fáze 40-606 pmol/l, ovulační fáze 536-1930 pmol/l, luteální fáze 121-718 pmol/l, posmenopauza <136 pmol/l, • muži: <121 pmol/l •hlavní ženský steroidní pohlavní hormon •sledování indukce ovulace a ovariální hyperstimulace, anomálií menstruačního cyklu POHLAVNÍ HORMONY •PROGESTERON (PRG) •Referenční hodnoty: ženy: folikulární fáze 0,5-4,4 nmol/l, ovulační fáze 14,1-89,1 nmol/l, luteální fáze 10,6-81,3 nmol/l, posmenopauza <2,3 nmol/l • muži: 0,9-3,9 nmol/l •u žen tvořen žlutým tělískem ovarií , v menší míře kůrou nadledvin. •v šestém týdnu hlavním místem tvorby stává placenta. •většina progesteronu je v krvi vázána na bílkoviny (albumin, aj.). •prudký nárůst koncentrace při ovulaci • •PLACENTÁRNÍ HORMONY • Lidský choriový gonadotropin (lidský choriogonadotropin, hCG) •stanovení je také součástí screeningu vrozených vývojových vad •Referenční hodnoty: do 5 U/l •k potvrzení gravidity a k jejímu sledování, zvýšené hodnoty jsou u nádorů vaječníků, varlat, aj. •stanovení celkový beta-hCG (intaktní hormon+volná podjednotka beta), intaktní hCG(pouze intaktní hormon), volná beta-podjednotka HORMONY PANKREATU •INZULIN •Referenční hodnoty: 6-27 mU/l •stanovení má malou diagnostickou hodnotu •ruší exogenní inzulin a protilátky proti inzulinu • •GLUKAGON •polypeptid složený z 29 aminokyselin, stimuluje glykogenolýzu a glukoneogenézu, zvyšuje glykémii • •C-PEPTID •Referenční hodnoty: 0,78-1,89 ug/l •C-peptid není hormon, je to jednoduchý peptid vzniklý rozštěpením proinzulinu •ukazatel endogenní syntézy inzulinu •neinterferuje exogenní inzulin HORMONY HYPOFÝZY A HYPOTALAMU – •TYREOTROPIN (TYREOTROPNÍ HORMON, TSH) •Speciální preanalytické požadavky: pokud je to možné odběr ráno, nalačno, separaci séra nebo plazmy provést do 4h po odběru •Referenční hodnoty: 0,2-4,5 mU/l • • •ADRENOKORTIKOTROPIN (KORTIKOTROPIN, ACTH) •Speciální preanalytické požadavky: transport v ledové lázni, Referenční hodnoty: do 46 ng/l (pg/ml) •odhalování příčiny nadměrné produkce kortizolu (Cushingův syndrom),nebo nedostatečné sekrece (Addisonova nemoc) •stimulační a inhibiční testy syntézy ACTH (např.dexametazonový test) HORMONY HYPOFÝZY A HYPOTALAMU •FOLIKULOSTIMULAČNÍ HORMON (FOLITROPIN, FSH) •Referenční hodnoty: ženy: folikulární fáze 2,5-10,2 U/l, ovulační fáze 3,4-33,4 U/l, luteální fáze 1,5-9,1 U/l, postmenopauza 23,0-116,3 U/l • muži: 1,4-18,1 U/l •závislost na období menstruačního cyklu s maximem v ovulaci • •LUTEINIZAČNÍ HORMON (LUTROPIN,LH) •Referenční hodnoty: ženy: folikulární fáze 1,9-12,5 U/l, ovulační fáze 8,7-76,3 U/l, luteální fáze 0,5-16,9 U/l, postmenopauza 15,9-54,0 U/l • muži: 1,5-9,3 U/l HORMONY HYPOFÝZY A HYPOTALAMU •PROLAKTIN (PRL) •Speciální preanalytické požadavky: doporučuje se odběr 3h po probuzení (optimálně mezi 8 a 10h) •Referenční hodnoty: ženy: 59-619 mU/l, postmenopauza 38-430 mU/l, muži: 44-375 mU/l •základní diagnostická metoda pro diagnostiku adenomu hypofýzy (prolaktinom) •zvýšené hodnoty jsou přítomny v graviditě a při laktaci • •RŮSTOVÝ HORMON (SOMATOTROPIN, STH, TAKÉ GH, •GROWTH HORMON) •Referenční hodnoty: 0,16-13,00 mU/l HORMONY KŮRY NADLEDVIN •KORTIZOL •Speciální preanalytické požadavky: kolísáni koncentrace kortizolu během dne - nejčastěji se odběr provádí ráno mezi 7-9h a večer mezi 16-20h •Referenční hodnoty: sérum - ráno 101-536 nmol/l, • večer 79-478 nmol/l • moč 12-486 nmol/24h •většina kortizolu v krvi je vázána na transkortin, dále na SHBG a albumin •10 % je ve volné formě • • • DEHYDROEPIANDROSTERON SULFÁT (DHEAS) •Speciální preanalytické požadavky: oddělit elementy do 30 min po odběru •Referenční hodnoty: jsou závislé na použité metodě, věku, pohlaví •vzniká téměř výlučně v nadledvinách, u mužů částečně i ve varlatech, u žen v ovariích. •zvýšené koncentrace u hyperplazie a tumorů nadledvin –HORMONY DŘENĚ NADLEDVIN • adrenalin, noradrenalin (katecholaminy) •pro stanovení v plazmě nebo moči se používá HPLC s elektrochemickou detekcí po vyextrahování z bílkovinné matrice •stanovují se také O-methyl metabolity nazývané metanefriny. •Katecholaminy a metanefriny se stanovují především pro diagnostiku nádoru chromafinních buněk feochromocytomu • – PARATHORMON •Speciální preanalytické požadavky: transportovat při teplotě tajícího ledu, centrifugovat co nejdříve v chlazené centrifuze a oddělit sérum nebo plazmu •Referenční hodnoty: 1,5-7,6 pmol/l •stanovení slouží pro laboratorní diagnostiku primární hyperparatyreózy