Téma P01: Diagnostika stafylokoků

Úkol 1:Mikroskopie infekčního materiálu


Popis (napište názvy útvarů a spojte je šipkami s objekty nakreslenými vlevo)







V mikroskopu sledujte preparát obarvený podle Grama. Popište a zakreslete sledované útvary.
Všímejte si přítomnosti bakterií (jejich tvaru, barvitelnosti a množství) dále také leukocytů,
epitelií a vzájemného poměru mezi nimi.


Tabulka pro souhrn výsledků úkolů 2 až 7 (k postupnému vyplnění):

Kmen

                                                                                            K

                                                                                                   L

                                                                                                    M

                                                                                                     N

Gramovo barvení – Úkol 2





Úkol 3: Kulti- vace (krevní agar)

                                 Velikost






                                 Barva






                                 Tvar






                                 Profil






                                 Hemo- lýza





                                 Jiné






Úkol 4: růst na KA + 10 % NaCl





Úkol 5: kataláza (pište „+“ či „–“)





DÍLČÍ ZÁVĚR






Úkol 6a: Test clump. faktor (+/-)





Úkol 6b: Plasma-koaguláz. test (+/-)





Úkol 6c: Test hyaluronidázy (+/-)





KONEČNÝ ZÁVĚR






Úkol 2: Mikroskopie kultur mikroorganismů


Kmen K                            Kmen L                                  Kmen
M                                   Kmen N

 Obarvěte podle Grama čisté kultury předložených mikrobů. Výsledky pozorování zakreslete (↓) a
zapište (↑).

Úkol 3: Růst na krevním agaru

Vyplňte tabulku v řádku Úkol č. 3. Do „jiných“ napište to zajímavé, co se nevejde jinam.

Úkol 4: Růst bakterií na krevním agaru s 10 % NaCl

Zhodnoťte schopnost růstu předložených kmenů na krevním agaru s 10 % NaCl, který slouží jako
selektivní půda pro stafylokoky. Zapište „+“ pokud kmen roste a „–“ pokud neroste.

Úkol 5: Katalázový test

Prokažte přítomnost enzymu katalasy. Setřete mikrobiologickou kličkou kolonie předložených kmenů a
vneste je do kapky 3% H[2]O[2] na podložním sklíčku. Zaznamenejte reakci u všech kmenů. Do tabulky
pište „+“ a „-“.



Pozitivitu charakterizují _____________________, zatímco  ____________________ je negativní.

Nyní vyplňte řádek „Dílčí závěr“. Napište STAF, pokud se kmen ukázal býti stafylokokem, a JINÝ,
pokud je to něco jiného.

Úkol 6: Testy pro diferenciaci S. aureus

6a) Test na clumping faktor (test vázané plasmakoagulázy)

Na podložní sklíčko kápněte kapku ředěné králičí plazmy. Pomocí sterilní mikrobiologické kličky v
ní suspendujte vyšetřovaný kmen stafylokoka. Přítomnost plasmakoagulázy se projeví aglutinací
bakteriálních buněk. Výsledek vyšetření zaznamenejte.


Kmen ______







6b) Plasmakoagulázový test (test volné plasmakoagulázy)

Do 0,5 ml 10× ředěné králičí plazmy bylo suspendováno několik kolonií vyšetřovaného kmene
stafylokoka. Suspenzi inkubujeme v termostatu při 37 °C. Výsledek se odečítá po 1, 2 a 24 hodinách.
Jako pozitivní reakce se hodnotí, pokud dojde ke koagulaci králičí plasmy ve zkumavce, tj. dojde k
zrosolovatění celého obsahu zkumavky, příp. alespoň části. Zapište a zakreslete výsledek této
reakce u vybraných kmenů po 24 hodinách inkubace.



Negativní výsledek


Pozitivní výsledek

6c) Detekce hyaluronidázy

Na krevní agar jsme naočkovali asi 2 cm široký pás Streptococcus equii, bakterie, která tvoří silné
pouzdro s obsahem kyseliny hyaluronové. Kolmo k tomuto pásu byla naočkována čára vyšetřovaného
kmene stafylokoka. Pokud je příslušným kmenem stafylokoka hyaluronidasa produkována, difunduje do
okolí a do druhého dne způsobí lýzu pouzdra Streptococcus equii. To se projeví půlkruhovou zónou
„ztráty slizovitosti“ v pásu naočkovaného Streptococcus equii. Zakreslete výsledek reakce u dvou
kmenů (včetně pozitivní a negativní kontroly) a popište. Pozor! V tomto úkolu nejde o hemolýzu
kmenů. Do obrázku ji sice – pokud ji pozorujete – můžete zakreslit, není to však pro tento úkol
podstatné. Dbejte pokynů učitele a úkol provádějte až po jeho výkladu!



Úkol 7: Bližší určení stafylokoků pomocí biochemického mikrotestu (STAPHYtest 16)

ZLLM neprovádí

Úkol 8: Citlivost stafylokoků k antibiotikům

Zjistěte citlivost předložených kmenů stafylokoků k vybraným antibiotikům, pomocí diskového
difusního testu. Citlivost k předkládaným antibiotikům zhodnoťte na základě srovnání zjištěného
průměru inhibiční zóny s příslušnou hraniční zónou. Seznam testovaných antibiotik a hodnoty jejich
hraničních zón najdete v přiložené tabulce. Výsledky testu pro jednotlivá antibiotika (průměr
inhibiční zóny i interpretaci) zapište.


                               Antibiotikum (plný název, ne zkratka)

                                             S. aureus

                                          S. epidermidis

                                         Průměr zóny (mm)

                                           Interpretace

                                         Průměr zóny (mm)

                                           Interpretace