NA STOPĚ PACHATELE Díl osmý: Acidorezistentní pachatelé Mikrobiologický ústav uvádí L Úvod: Plivátka v boji proti TBC nV době první republiky vyvinula společnost za osobní angažovanosti prezidenta Masaryka a jeho „Ligy proti tuberkulóze“ velké úsilí v boji proti této nemoci. Významnou součástí byla osvěta, aby lidé neplivali na zem, ale používali plivátka. 20 lystn www.bikupan.se [USEMAP] Přehled jednotlivých částí Klinická charakteristika acidorezistentních bakterií Specifické vlastnosti acidorezistentních bakterií Diagnostika acidorezistentních bakterií Bonusový materiál: Rickettsie a chlamydie Klinická charakteristika acidorezistentních bakterií 24 rtg Příběh první nHonza již několik let věděl, že je HIV pozitivní. Dobře věděl, že je mnohem zranitelnější než ostatní lidé, že ho každá infekce dostihne rychleji než jiné nPřesto ho zaskočilo, že v.poslední době začal kašlat. Jeho ošetřující lékaři zkoušeli různé možnosti, až nakonec na základě rentgenu, PCR vyšetření a kultivačního vyšetření dospěli k.názoru, že se jedná o miliární (zrnkovitou) formu tuberkulózy. tuberculosis.upmc.com Viníkem zde bylo nMycobacterium tuberculosis, i když TBC může způsobovat i například Mycobacterium bovis. nZajímavostí tohoto mikroba je záliba v životě uvnitř buněk. S tím také souvisí skutečnost, že na mykobakteria se špatně tvoří protilátková odpověď (takže se nedá prokazovat antigen ani protilátky) a že hlavní slovo má buněčná imunita – i při vakcinaci. nJelikož při HIV infekci je právě buněčná imunita postižena, je TBC jednou z oportunních infekcí. 08 mycobacterium-tuberculosis-299290 http://www.genomeindia.org Skutečný příběh n19. září 2007 15:17 nPlzeňští kriminalisté našli muže, který má zřejmě TBC. Lékaři příznaky nemoci identifikovali u sedmačtyřicetiletého Marcela Pfeifera v pondělí, pacient jim slíbil, že přijde druhý den, ale už se neobjevil. Proto po něm bylo vyhlášeno pátrání. n"Nemocný muž se dnes pohyboval po Slovanské třídě, v blízkosti křižovatky s Liliovou ulicí," uvedl mluvčí plzeňské policie Jaroslav Ibehej. nKriminalistům po zveřejnění pátrání volala řada lidí. Poslední z nich policisty skutečně navedl na místo, kde Pfeifer byl. Nyní ho čeká převoz do zdravotnického zařízení v Janově na Rokycansku. nTuberkulóza je nebezpečné nakažlivé onemocnění. Léčba pomalu se rozvíjející nemoci je velmi zdlouhavá. Po celou dobu je třeba být pod dohledem odborníků. nKvůli zamezení šíření nákazy musí zdravotníci vyhledávat také lidi, kteří byli v kontaktu s tuberkulózním pacientem. ncen, iDNES.cz 35 Mykobakteriová vakula Mycobacterium uvnitř buňky Tuberkulóza nPři prvotním styku s infekcí dojde ke vzniku tzv. primárního komplexu. Je to ložisko (obvykle v plicích) a k němu přiléhající mízní uzlina. nPři další infekci vzniká tzv. postprimární TBC, která je horší. Zpravidla vznikne granulomatózní útvar, který později podléhá kaseifikaci („zesýrovatění“) a pak už se dále nezvětšuje. Paradoxně za většinu škod v organismu může reakce hostitelského organismu (pozdní přecitlivělost – vlastně druh alergie) nPo letech se může ložisko znovu aktivizovat, zejména ve stáří, při podlomení imunity, nebo i při abúzu alkoholu. Takový člověk může být velmi nebezpečný pro své okolí [USEMAP] Intracelulární mikroby nMycobacterium je sice často přítomno uvnitř buněk, není však obligátně intracelulárním patogenem. Tím jsou naopak viry, a také chlamydie a rickettsie. Přečtěte si o nich v bonusovém materiálu! Tuberkulóza 16 cavernas tuberculosis 22 tuberculosis www.tusalud.com.mx http://www.stockmedicalart.com Není jen plicní forma TBC 18 rccm_tuberculosis_body 19 tbpicture sitemaker.umich.edu (2×) TBC ve světě http://www.healthytravelblog.com/2010/12/08/who-announces-milestone-test-for-tuberculosis/ Ještě jednou TBC 23 138_infection_stages 14 mycobacterium_tuberculosis0 http://www.lung.ca http://www.cbc.ca Tuberkulom mozku 38 tuberculoma http://pathology.mc.duke.edu Další zvláštnosti mykobakterií nJejich buněčná stěna je vysoce hydrofobní, jsou v ní tzv. mykolové kyseliny. Téměř se nebarví podle Grama, jsou nutná speciální barvení. nRoste pomalu, má dlouhou generační dobu, proto jsou pro kultivaci nutné speciální půdy nJsou velmi odolná k desinfekčním prostředkům. Nelze použít prostředky spektra „A“, proti běžným bakteriím, je nutné „T“ (proti TBC), případně „M“ (proti atypickým mykobakteriím) nJsou též odolná k antimikrobiálním látkám. 13 m_tub2 Buněčná stěna mykobakterií 09 Mycobacterium%20cell%20envelope www.primer.ru http://oregonstate.edu Zmínky o TBC ve známých písních… n…tuberkulóza, no to je paráda… n(Jaromír Nohavica: Pochod marodů) Známí lidé, kteří zemřeli na TBC Například: Václav II., Eliška Přemyslovna, Božena Němcová, Jiří Wolker, Karel Havlíček Borovský, Stanislav Rolínek (autor soch v Rudce u Kunštátu), Franz Kafka, George Orwell, Frederic Chopin, Anders Celsius (°C), Louis Braille (písmo), Gavrilo Princip (pachatel atentátu na následníka trůnu v Sarajevu), Beethovenova maminka, obr Drásal, sv. Terezie z Lisieux či svatý Kazimír Příběh druhý nPan Hassan žil v pouštní části Súdánu, zmítané neustálými válkami a nepokoji. nV poslední době se od něj začali odvracet i ti přátelé, kteří ještě neuprchli ani nebyli povražděni. Znetvoření obličeje pana Hassana bylo neklamnou známkou, že pan Hassan trpí onemocněním, které se v těchto zeměpisných šířkách ještě stále vyskytuje až příliš často. nNaštěstí se pan Hassan setkal s pracovníky jedné nevládní organizace, kterým rovněž byla diagnóza jasná. Pomocí dapsonu se podařilo panu Hassanovi pomoci. Viníkem je nMycobacterium leprae, mikrob ještě zvláštnější než tuberkulózní mykobakterium nJeho generační doba je ještě výrazně delší. In vitro kultivace se podařila teprve nedávno a trvala celý jeden rok nZákladní léčba lepry není drahá, bohužel v zemích, kde se lepra vyskytuje, je i tato poměrně nízká cena příliš vysoká nProto se problémem lepry zabývá řada nadací, nevládních a charitativních organizací a podobně. Lepra 01 leprosy 02 20-06_Leprosy_1 www2.bc.cc.ca.us (2×) Příběh třetí nPan Piraňa byl zuřivým akvaristou. Poslední měsíc měl problém: musel do akvárií nořit jen levou ruku, protože na pravé měl vřed. nPo vyšetřování byl jeho případ uzavřen jako tzv. fish tank granuloma, běžný u akvaristů. Podobná nemoc plavců se nazývá swimming pool granuloma. nPůvodci jsou… nKromě M. tuberculosis a M. leprae existuje i spousta dalších mykobakterií. Některá, např. Mycobacterium marinum, patří mezi tzv. atypická mykobakteria, která občas způsobují infekce ran a jiné problémy. nNěkterá jiná mykobakteria jsou nepatogenní a jsou normální součástí lidské mikroflóry, např. M. smegmatis – viz obrázek Atypická mykobakteria 11 Mycobacterium smegmatis http://www.hhmi.org Infekce M. marinum 37 rána Mycobacterium marinum http://www.nlm.nih.gov Příběh čtvrtý nPaní Píštělková si už delší dobu hmatala pod kůží krku drobné útvary nNedávno se stalo, že jeden z těchto útvarů se otevřel na povrch a v ústí se objevil velmi hustý, žlutý páchnoucí hnis. To už paní Píštělkovou donutilo zajít k lékaři. nLékaři poslali hnis na mikrobiologické vyšetření. Vyšetření trvalo dlouho – paní Píštělková už spílala mikrobiologům, že si tam někde válejí šunky. Nakonec se ukázalo, že… ntedy že viníkem je Actinomyces sp. nAktinomycety jsou vláknité bakterie, v podstatě grampozitivní, ale barví se Gramem špatně, protože jejich buněčná stěna je hodně hydrofobní a obsahuje hodně mykolových kyselin nAktinomycety se běžně vyskytují v ústní dutině zdravých osob. Odtud se za různých okolností mohou dostat do měkkých tkání krku, tváře či hrudníku. Jsou to anaerobní bakterie, či přinejmenším nejlépe rostou za anaerobních podmínek nPodobné aktinomycetám jsou nokardie, které jsou naopak striktně aerobní. Jinak však mají hodně podobné vlastnosti. …jde o aktinomykózu 26 240px-Actinomyces_spp_01 http://en.wikipedia.org Aktinomykóza 40 actino-lump 41 actino-lump2 pathmicro.med.sc.edu (3×) 45 act2 Nokardióza 53 nocard1 http://www.asm.org 48 nocard1 pathmicro.med.sc.edu Nokardiová pneumonie se sepsí 55 nokardiová bakteriémie A previously well 57-year-old man … 3-day history of severe dyspnoea. We conclude that N. asteroides infection can present as a fulminant community-acquired pneumonia with bacteraemia in the absence of immunosuppression or coexistent infection. (From the article related to the picture) http://www.mja.com.au Nokardióza mozku na CT 29 Pugatch_Figure04B Nocardiosis [USEMAP] http://www.appliedradiology.com Specifické vlastnosti acidorezistentních bakterií Acidorezistence a alkalirezistence nAby mohly na něco působit kyseliny či alkalie, musí to „něco“ být hydrofilní, tedy komunikovat s vodným prostředím. Pro mykobakteria však tohle neplatí. nNejsme tedy schopni je kyselinami či alkaliemi ničit nNejsme také schopni je kyselinami odbarvovat, pokud tedy se je nějakým zázrakem podařilo obarvit nTotiž: většina barviv je také hydrofilních, a tudíž se mykobakteria i špatně barví, zpravidla je nutno barvit je za horka, aby se vůbec obarvila nNokardie a aktinomycety jsou na rozdíl od mykobakterií acidorezistentní jen zčásti. Barvíme je proto podle Grama, ale musíme počítat s tím, že se barví nerovnoměrně a špatně. [USEMAP] Co z toho vyplývá pro klinika? nPokud klinik pošle vzorek (sputum, moč, hnis či cokoli jiného) „na bakteriologickou kultivaci“, nemůže očekávat, že vyšetření odhalí případnou přítomnost mykobakterií nChce-li klinik zjistit, zda má pacient TBC, musí poslat vzorek zvlášť a na průvodce výrazně označit, že má být vyšetřen kultivačně či pomocí PCR na tuberkulózu. V tom případě laboratoř provede příslušné procedury Diagnostika acidorezistentních bakterií Jak pátrat po mykobakteriích nMikroskopie: Používá se Ziehl-Neelsenovo barvení a fluorescenční barvení nKultivace: Používá se speciálních půd, přičemž před vlastní kultivací předchází moření, obvykle louhem. Cílem moření je usmrtit ostatní bakterie, které by při svém rychlém růstu byly kultivačně úspěšnější. Alkalirezistentní mykobakteria moření snadno přežijí. nAutomatická kultivace: Používá se různých typů kultivačních automatů: mohou detekovat kultivační pozitivitu mnohem dříve než klasická kultivace nBiochemické rozlišení je možné, je však vyhrazeno specializovaným laboratořím nPokus na zvířeti: občas se používá morče nPCR diagnostika se stává čím dál důležitější Defilé zločinců: Mycobacterium tuberculosis TBC1 03 1312_mycoba http://www.health.qld.gov.au Foto O. Z. Postup barvení dle Ziehl-Neelsena nV prvním kroku barvíme karbolfuchsinem (Gabbetem) za horka až do výstupu par. Bez zahřívání by mykobakteria nešlo obarvit, leda při použití koncentrovanějšího karbolfuchsinu (modifikace podle Kinyouna). nV druhém kroku odbarvujeme cca 15 s „kyselým alkoholem“, což je směs alkoholu s minerální kyselinou, nejčastěji kyselinou chlorovodíkovou, poté opláchneme vodou nVe třetím kroku dobarvujeme pozadí, tj. vše, co jsme ve druhém kroku odbarvili. Dobarvujeme cca 30 s malachitovou zelení nebo metylénovou modří. Opět opláchneme, osušíme a pozorujeme imerzí. nVýsledkem jsou červené acidorezistentní tyčinky na modrém nebo zeleném pozadí Ziehl-Neelsenovo barvení 32 Ziehl Neelsen www.spjc.edu (varianta s vodní lázní 12 m_tub Ziehl-Neelsenovo barvení www.primer.ru 80 cryptosporidum Kryptosporidia http://www.scientificdevice.com/intl_product_pages/icryptosporidium_stains.htm Zajímavostí je, že Ziehl-Neelsenovo barvení lze použít i pro skupinu parazitů, tzv. střevní kokcidie (kryptosporidia a cyklospory) Kultivace mykobakterií nPřed kultivací musí být provedeno moření nPoužíváme tekutou půdu Šulovu či Baničovu a vaječné půdy Ogawovu či Löwenstein-Jenssenovu. Vaječné půdy jsou tuhé vzhledem ke koagulaci vaječného bílku – neobsahují agar nI pevné půdy se nalévají do zkumavek a uzavírají zátkou. Není to jen kvůli ohrožení personálu, ale především kvůli vyschnutí půdy. nVýsledky se odečítají po 1 (kontrola kontaminace) 3, 6 a pro jistotu i 9 týdnech kultivace. (Pozitivní výsledky se obvykle nacházejí po šesti týdnech) Vzhled kolonií mykobakterií 21 mtbcolonies http://www.stockmedicalart.com/ K tekuté Šulově půdě nI pozitivní zkumavka je na první pohled čirá, protože nárůst mykobakterií je patrný jen u dna („modrej bordel“, jak to trefně označila studentka J. H. J) n n(Poznámka: nBordel případně může být i bílý) Šula Testy antituberkulotické citlivosti (nikoli antibiotické!) nAntituberkulotika jsou zvláštní látky, až na výjimky odlišné od antibiotik nVždy se užívají kombinace tří či čtyř: rychle totiž vznikají rezistence, navíc některá působí jen intra- a jiná zase extracelulárně nNelze používat difúzní diskové testy nAntituberkulotika proto přidáváme přímo do (pevné) kultivační půdy. Přidáme kontrolu růstu. nMykobakterium roste à je rezistentní nMykobakterium neroste à je citlivé Přehled běžně užívaných antituberkulotik Antibiotikum Zkratka Isoniazid H, INH Ethambutol E Rifampicin R Pyrazinamid Z Streptomycin S, STM jatra poz Tuberkulózní játra pokusného morčete Věnovala dr. Jana Svobodová a dr. Lev Mezenský nPCR je metodou, která se v diagnostice TBC používá více než v diagnostice jiných bakterií. Je to proto, že diagnostiku výrazně urychluje, přičemž u TBC příliš nehrozí riziko kontaminace z prostředí. PCR TBC 1, 2, 3, 4 = pacienti číslo 1, 2, . 4 5 = pozitivní kontrola 6 = negativní kontrola 7 = ladder (žebříček) horní řádek = proužek vzorku, dolní = IC PCR kit pro diagnostiku TBC 10 mycobacterium%20tuberculosis PCR diagnostic%20kit http://www.cinnagen.com Nepřímý průkaz TBC nNejdůležitějším typem imunity u TBC je buněčná imunita. Tvorba protilátek se vyskytuje, ale měřitelná množství jsou přítomna jen u části případů. Pozitivní nález protilátek lze považovat za známku infekce, zato však negativní nález má minimální informační hodnotu. nBuněčnou imunitu lze testovat nkožním (tuberkulinovým) testem, zvláště po vakcinaci ntestem uvolňování IFN-gama (reakce pacientových buněk na antigenní výzvu) Kožní testy (Mantoux) nPoužívá se pro ověření účinnosti očkování, ale také k průkazu případné latentní infekce nNa testy je potřeba celý pacient, nejde tedy o laboratorní test. Test provádějí dermatovenerologická či jiná specializovaná pracoviště nPozitivní jsou tyto testy v případě, že je aktivována buněčná imunita; jde vlastně o jistý typ opožděné alergie Test uvolnění interferonu gama (Quantiferon© TB-GOLD) nModerní možností k ověření buněčné imunity je vyšetření indukovaného uvolňování interferonu gama, v praxi se používá prakticky výhradně komerčně dostupný test Quantiferon TB-GOLD, proto budeme dále hovořit jen o něm nBylo prokázáno, že při tuberkulóze, a to i latentní, dochází k tomu, že tuberkulózní antigeny aktivují T-lymfocyty a ty tvoří velká množství interferonu gama nPodobně lze tyto T-lymfocyty aktivovat nespecificky např. takzvaným mitogenem, ten se proto používá jako pozitivní kontrola Quantiferon – tři zkumavky nOdebírá se nesrážlivá (heparinizovaná) krev do tří zkumavek (potřebujeme lymfocyty!) nprvní zkumavka obsahuje mitogen (MIT) – zde by mělo za normálních okolností vždy dojít ke stimulaci tvorby interferonu gama ndruhá zkumavka obsahuje antigeny TBC (TB) – zde by mělo dojít ke stimulaci tvorby interferonu gama pouze u infekce TBC ntřetí zkumavka neobsahuje nic (NIL) – zde by za normálních okolností nemělo docházet ke stimulaci tvorby interferonu gama Quantiferon – hodnocení nZa pozitivní lze považovat výsledek, kdy T-lymfocyty reagují na stimulaci antigenem mykobakteria, avšak ve zkumavce neobsahující nic nedochází k tvorbě inferferonu nZa negativní lze považovat výsledek, kdy T-lymfocyty reagují na stimulaci mitogenem, ale nereagují na stimulaci antigenem mykobakteria nNeurčitý výsledek se objeví (1) v případě, že T-lymfocyty nejsou aktivovány ani mitogenem, nebo naopak (2) se tvorba interferonu objeví i ve zkumavce, kde nic nebylo Příklad hodnocení* NIL [IU/ml] TB minus NIL [IU/ml] MIT minus NIL [IU/ml] Výsledné hodnocení testu přítomnost infekce M. tuberculosis ≤ 8,0 < 0,35 ≥ 0,5 Negativní nepravdě- podobná ≥ 0,35 a < 25% hodnoty NIL ≥ 0,5 ≥ 0,35 a ≥ 25% hodnoty NIL libovolná hodnota Pozitivní pravděpodobná < 0,35 < 0,5 Neurčitý nelze určit ≥ 0,35 a < 25% hodnoty NIL < 0,5 > 8,0 libovolná hodnota libovolná hodnota *může se lišit u jednotlivých typů testu Quantiferon – zásady odběru nuchovávat prázdné odběrové zkumavky důsledně při 4–25°C nodebrat správný objem krve (3 x 1 ml) npo odběru opakovaným obrácením zkumavky dostat do kontaktu vzorek krve s lyofilizovanými antigeny přítomnými na vnitřním povrchu zkumavky nzkumavky po odběru uchovávat při teplotě 17–27 °C nvzorek dopravit do laboratoře k dalšímu zpracování co nejdříve, nejpozději 16 hodin po odběru. Mikroskopie nokardií a aktinomycet nČástečně rezistentní aktinomycety a nokardie se dle Grama barví, i když špatně. Jsou také pleomorfní (různotvaré). nObě jsou typické větvenými vlákny, která se barví grampozitivně, ačkoli některé části vláken se mohou jevit gramnegativně nebo mohou zůstat zcela nezbarvené nNěkdy se v mikroskopii také mohou objevit krátké (kokoidní) formy http://filebox.vt.edu Actinomyces israeli 44 actino-cdc1x pathmicro.med.sc.edu 27 Nocardia asteroides http://rbp.fmrp.usp.br Nocardia asteroides 30 Nocardia asteroides Nocardia asteroides www2.mf.uni-lj.si 51 Nocardia http://www.nocardia.it Kultivace nokardií a aktinomycet nI když jsou oba rody v mnohém podobné, jedno se liší: nokardie jsou striktně aerobní, aktinomycety rostou za anaerobních podmínek 28 nocardia http://filebox.vt.edu Citlivost nokardií a aktinomycet na antibiotika nAntibiotická citlivost se na rozdíl od mykobakterií dá u nokardií a aktinomycet stanovit difusním diskovým testem. Musíme ale počítat s tím, že rostou pomalu a špatně. nU nokardiózy se v léčbě používá ko-trimoxazol, případně ampicilin či makrolidy nU aktinomykózy se používá penicilin, popřípadě doxycyklin a další antibiotika Diagnostika lepry leprominovým testem nJe jedno zvíře. Jmenuje se pásovec devítipásý (anglicky nine banded armadillo). nJe nezbytný při výrobě leprominu. nTato látka je používána v leprominovém testu, který je obdobou tuberkulinového testu u TBC. inverzní pásovec http://www.1-costaricalink.com/costa_rica_fauna/nine_banded_armadillo.htm 15 tblogo [USEMAP] Konec Logo jednoho kongresu o TBC http://www.niaid.nih.gov Rickettsie a chlamydie Bonusový materiál Rickettsie a chlamydie nejsou acidorezistentní bakterie, s mykobakteriemi mají společnou jen intracelularitu. Třeba vám však tento bonusový materiál poslouží u zkoušky… 31 stuart1 www.bio.umass.edu Chlamydie npovinně nitrobuněční parazité. njsou to přesto bakterie, v mnohém blízké gramnegativním nod plnohodnotné bakterie, se liší především neschopností vyrobit ATP nmají ale buněčnou stěnu. nrod Chlamydia poměrně nedávno rozdělen na rody Chlamydia a Chlamydophila 27 chlamydia www.roche.com 21 chlamydiový antigen v cytoplasmatické inkluzi 23 Chlamydia /info.fujita-hu.ac.jp www.uni-duesseldorf.de Chlamydia trachomatis nonemocnění závisí na serotypu: nSerotypy L1, L2, La2 a L3 nvyvolávají tropickou pohlavní nemoc - lymphogranuloma venereum. nSerotypy D až K nzpůsobují pohlavně přenosná onemocnění ve vyspělých zemích nčasto bez příznaků nmožné záněty různých částí pohlavního ústrojí nmožná neplodnosti nmohou též způsobit záněty spojivky – paratrachom 29 kep_zseb www.medimix.hu Chlamydia trachomatis nSerotypy A, B, Ba a C nzpůsobují trachom – nejčastější příčinu slepoty v rozvojových zemích npostižen téměř každý desátý obyvatel zeměkoule (tj. asi půl miliardy lidí!) nzačíná jako zánět spojivek nslepota přichází během 25–30 let npřenos dotykem a nespecifickými přenašeči (mouchy). 28 Chlamydia_avia_flech www.medvet.umontreal.ca Trachom Trachoma http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Image:Trachoma.jpg Chlamydophila pneumoniae npředevším onemocnění dýchacích cest nod rým a zánětů dutin až po záněty plic Chlamydophila psittaci §ptačí nemoc – ornitóza §závažnější papouščí nemoc – psitakóza §důležité je postižení dýchacích cest i jiných orgánů, např. jater §na chlamydie poměrně odolné, proto přenos i trusem ptáků 25 image002 www.cpnhelp.org 25 image002 www.cpnhelp.org 25a www.cpnhelp.org 25a www.cpnhelp.org nnechají se pohltit hostitelskou buňkou nv ní se namnoží npak jsou z buňky vypuzeny nebo ji rozloží 20 růstový cyklus ghlamydií /info.fujita-hu.ac.jp Chování chlamydií Odebírané vzorky u chlamydií nU nepřímého průkazu samozřejmě sérum nU přímého průkazu plicních chlamydióz sputum, případně jiný vhodný materiál (např. bronchoalveolární laváž) nU urogenitálních chlamydióz např. výtěr z cervixu na suchém tamponu (protože se zpravidla používá průkaz antigenu nebo PCR, ne kultivace) 24 chlamydia i9.photobucket.com Diagnostika chlamydií nMikroskopie s použitím speciálních barviv je možná, ale běžně se neprovádí nGramem se nebarví. nPro kultivaci nutné speciální odběrové médium nKultivace na buněčných kulturách jako u virů Pozorují se buněčné inkluze nVýznamný je průkaz antigenu, např. ELISA nNepřímý průkaz: KFR a ELISA. nGenetické metody: genová sonda, PCR, LCR Léčba §Tetracykliny, makrolidy Z diagnostiky chlamydií 26 pcr1 30 clearview Chamydia www.roche.com triad-assoc.com 16 Rickettsia_prowazekii Rickettsie a příbuzné organismy www.nature.com Základní charakteristika rickettsií nPodobně jako chlamydie odebírají z hostitelských buněk ATP a navíc i jiné živiny nJsou rovněž povinně nitrobuněčnými parazity nPři výzkumu rickettsií přispěl badatel Stanislaus Prowazek z Jindřichova Hradce nNěkteré druhy, dříve považované za příbuzné rickettsií, se dnes za příbuzné nepovažují, dokonce nejde o povinně nitrobuněčné parazity. Všechny jsou to ale drobné, obtížně kultivovatelné bakterie Klinická charakteristika a přenos nZpůsobují různé choroby, často horečnaté (viz dále), často přenášené členovci Léčba §Používají se zpravidla tetracykliny a jejich deriváty. To platí pro naprostou většinu z nich, jen u Bartonella bacilliformis se používá spíše penicilin a streptomycin Jak je to tedy s tou příbuzností (aneb Taxonomie) nŘád Rickettsiales byl rozdělen: nČeleď Rickettsiaceae – rody Rickettsia a Orientia nČeleď Anaplsmataceae – rody Anaplasma, Erhlichia, Neorickettsia, Wolbachia nDo řádu Rickettsiales dnes již nepatří: nCoxiella (samotná čeleď Coxiellaceae v řádu Legiolellales, tedy k legionelám) nBartonella (čeleď Bartonellaceae v řádu Rhizobiales). Do rodu Bartonella patří i bakterie, dříve řazené do rodu Rochalimea Rickettsia nJsou to malé kokobacily velké 0,2 až 0,5 µm nBarví se např. dle Giemsy nPřenašečem jsou klíšťata, vši a blechy nOnemocnění se vyskytovalo i u nás, např. za válek; některé rickettsiózy se i dnes vyskytují v Evropě, většina však spíše v tropech a subtropech, zejména v Africe a Latinské Americe nRozlišuje se skupina skvrnitých horeček a skupina skvrnitého tyfu (tyfových horeček) Rickettsie skvrnitých horeček nPřenos klíšťaty nČesky také „purpurové horečky“ nPříkladem je horečka Skalistých hor (také Rocky Mountains spotted fever, RMSP; jejím původcem je Rickettsia rickettsii), dále Středozemní, Astracháňská či Africká skvrnitá (různé další druhy rickettsií) nExistuje i Rickettsia slovaca, která způsobuje onemocnění s horečkou příškvary ve vlasaté části hlavy. Vyskytuje se mj. na Slovensku nRickettsia akari způsobuje tzv. ricktettsiové neštovice 19 velký /info.fujita-hu.ac.jp 18 rmsf www.pathguy.com Rickettsie tyfových horeček nPřenos šatními vešmi a blechami nProjevují se opět horečkou a vyrážkou nKlasický je skvrnitý tyfus, způsobený Rickettsia prowazekii. Oba badatelé, kteří mu dali jméno, na něj zemřeli nPo prodělání může mikrob přetrvávat v endoteliálních buňkách a po letech může vzniknout mírnější Brillova-Zinsserova nemoc nExistuje také endemický tyfus (též myší tyfus), způsobený Rickettsia typhi 17 Flea%2040X Přenašeč www.shoarns.com Orientia nJediným druhem je Orientia tsutsugamushi (dříve Rickettsia tsutsugamushi) nZpůsobuje křovinný tyfus, nazývaný též japonská říční horečka či horečka cucugamuši (cucuga = onemocnění, muši = roztoč; přenos roztoči) nVýznam onemocnění vzrostl za II. světové války a za války ve Vietnamu nVyskytuje se hlavně ve východní a jihovýchodní Asii Prowazek 98 Prowazek rovigno2 99 prowazek www.amphilsoc.org www.quido.cz/osobnosti/images/prowazek.gif Stanislaus Prowazek (1875–1915) n"Nikdo nemůže vyjádřit mínění o povaze viru jen na základě experimentů, tak, jak se v nynější době stává se dogmatem." nMikrobiolog a zoolog a objevitel původce skvrnitého tyfu Stanislaus Prowazek se narodil v Jindřichově Hradci v rodině důstojníka rakouské armády dne 12. listopadu 1875. Studoval na přírodovědecké fakultě v Praze a ve Vídni. Jeho doktorská práce zaujala Paula Ehrlicha (pozdějšího držitele Nobelovy ceny). A tak se Prowazek stal jeho asistentem. Postupně se stává nadějí německé medicínské parazitologie. Prowazek se stává vedoucím protozoologické laboratoře Institutu pro tropické choroby v Hamburgu. Další osudy této erudované osobnosti jsou spojeny se skvrnitým tyfem, typickou válečnou chorobou. Za tou se Prowazek v roce 1913 vypravuje do Srbska. Prowazek v chotěbuzském zajateckém lágru studoval nad mikroskopem tyfový materiál nemocných zajatců. Toto studium se mu stalo osudným. Podobně jako Ricketts i on se nakazil skvrnitým tyfem a dne 17. února 1915 zemřel. n n99 www.quido.cz/osobnosti/images/prowazek.gif Anaplasma phagocytophilum nČasto je z praktických důvodů původce řazen mezi ehrlichie. Vyskytuje se v Evropě i USA nZpůsobuje nemoc zvanou HGE (human granulocytar ehrlichiosis) nPříznaky jsou horečka, bolesti hlavy a svalů nOnemocnění přenášejí klíšťata, někdy se hovoří o klíšťové ehrlichióze, po borelióze a klíšťové encefalitidě je to třetí nejvýznamnější klíšťové onemocnění u nás Ehrlichie (ostatní) nEhrlichia chafeensis se vyskytuje převážně v USA. Způsobuje nemoc zvanou HME (human monocytar ehrlichiosis); nevolnost, horečka, bolest hlavy a další nEhrlichia ewingii se také vyskytuje v USA. způsobuje tzv. Ewingovu ehrlichiózu (bolest hlavy, horečka, hlavně oslabení pacienti) nPříbuzná Neorickettsia sennetsu se vyskytuje ve východní Asii a způsobuje horečku sennetsu. Na rozdíl od ostatních ji nepřenášejí klíšťata, člověk se nakazí pozřením syrových ryb (japonské suši) Coxiella burnetii nJe to drobná G- tyčinka (1 × 0,3 µm), ale barví se spíše dle Giemsy či Gimenéze nZpůsobuje takzvanou Q-horečku, poprvé popsanou 1937 v Austrálii nJde o akutní horečnaté onemocnění s atypickou pneumonií nebo chronickou infekci s endokarditidou. Může postihnout i játra či mozkové blány nVyskytuje se ve všech světadílech. Zdrojem jsou hlodavci, přenašečem klíšťata Bartonella nJsou to G- tyčinky, barví se však lépe Giemsou. Jsou jen fakultativně intracelulární. nJsou dokonce schopny růst na krevním nebo čokoládovém agaru, musí ale mít 10 % CO2 a vyrostou až za 5 až 42 dní. Proto je i u nich podobná diagnostika jako u ostatních nMohou přežívat v erytrocytech, což je chrání před imunitní odpovědí i antibiotiky Jednotlivé druhy 1 nBartonella quintana (dříve Rochalimea) je původcem volyňské či zákopové horečky, známé z I. světové války. Dnes může být problémem u bezdomovců, narkomanů či alkoholiků. Jde o horečku s bolestmi. nBartonella hensellae způsobuje tzv. bacilární angiomatózu (porušení kůže a vnitřních orgánů) a některé případy nemoci z kočičího škrábnutí (další má na svědomí Afipia felis) Jednotlivé druhy 2 nBartonella bacilliformis je původcem horečky Oroya. Smrtnost horečky Oroya je až 40 %. Vyskytuje se hlavně v Jižní Americe nPři horečce, ale i v případě, kdy horečka není přítomna, je také možný výskyt tzv. peruánských bradavic (verruca peruviana) nJeden peruánský student medicíny chtěl dokázat, že peruánské bradavice způsobuje mikrob. Naočkoval se materiálem z bradavice a zemřel na horečku Oroya. Ta se po něm jmenuje také Carrionova choroba Diagnostika rickettsií a dalších druhů nse provádí jen ve vyčleněných laboratořích za zvlášť přísných bezpečnostních opatření nmikroskopie se zpravidla neprovádí nkultivace na žloutkovém vaku nebo buněčných kulturách nantigenní analýza imunofluorescencí nPCR nnepřímý průkaz KFR, aglutinací a imunofluorescencí nu některých rickettsií funguje zkřížená aglutinace – protilátky reagují s O antigeny některých nepohyblivých kmenů Protea (tzv. Weil-Felixova reakce) 22 chlamydia Konec bonusového materiálu emma-jane4.tripod.com [USEMAP]