Kalibrace, kontroly kvality v
koagulační laboratoři
Kalibrační materiál
Komerční kalibrační plazmy
přesně udaná hladina vyšetřované složky
naváznost na mezinárodní referenční
materiály
některé parametry návaznost na „pool“
normální plazmu (aPTT, PT,..)
Směsná normální plazma (PT, aPTT)
Kalibrace1/ Vyšetření
Různých ředění kalibrační plazmy s udanou hladinou
parametru(100%, 50 %, 25 %….)
Několika kalibračních materiálů s různou hladinou
parametru
a vynesení naměřených hodnot (čas, A…) pro jednotlivé
hladiny do grafu
Závislost lin/lin, lin/log, log/log,nelineární(polynom)
2/ Vyšetření referenčního času (času normálu) pro výpočet
R, INR
3/ Načtení kalibrace čarovým kodem u předkalibrovaných
metod
Ředění kalibrační plazmy
Automatické
naprogramováno
Manuální
Typy ředění
Geometrickou řadou
100 % 100 % plazma (neředěná/ředěná)
50 % 1 díl 100% plazmy + 1 díl pufru
25 % 1 díl 50 % plazmy + 1 díl pufru
12,5 % 1 díl 25 % plazmy + 1 díl pufru
6,25 % 1 díl 12,5 % plazmy + 1 díl pufru
Typy ředění
Jiný způsob
1:1 100 % plazma (neředěná/ředěná) 100%
1:2 1díl 100% plazmy + 1 díl pufru 50 %
1:4 1díl 100 % plazmy + 3 díly pufru 25 %
1:8 1díl 100 % plazmy + 7 dílů pufru 12,5 %
1:16 1díl 100 % plazmy + 15 dílů pufru 6,25 %
Kalibrační křivka
Grafická závislost měřeného parametru na hladině
vyšetřované složky
měřený parametr (osa y)
koagulační čas (s)
absorbance (A, ∆A/min)…..
hladina vyšetřované složky (osa x)
aktivita (%, IU/ml…)
koncentrace (g/l, µg/ml…)
Kalibrační křivka - požadavky
minimálně tříbodová
závisí na typu vyšetření
musí pokrýt rozsah normálních i patologických
hodnot
linearita kalibrační křivky (ideální r = 1,00)
pokud naměřená hodnota mimo kalibrovanou
oblast v oblasti s klinickým významem je
nezbytné opakovat vyšetření s jiným ředěním
(menším nebo větším) vyšetřované plazmy
Odečtení výsledku
Automatické
Manuální
přímé odečtení
stejné ředění kalibrační i vyšetřované plazmy
odečtení + vynásobení dilučním faktorem
odlišné ředění kalibrační a vyšetřované plazmy
Provedení kalibrace
při změně šarže setu
při změně šarže jednotlivých reagencií, v
případě že nejsou součástí jednoho setu
po kalibraci musí následovat provedení kontrol
správnosti v normálním i patologickém rozsahu
Kalibrace rutinních koagulačních
vyšetření PT, APTT, Fbg, AT, D-DI
Kalibrační materiál
Komerční kalibrační plazmy
Směsná normální plazma (PT, aPTT)
Provedení kalibrace
Při změně šarže setu
Při změně šarže jednotlivých reagencií,
v případě, že nejsou součástí jednoho setu
Kalibrace speciálních koagulačních
vyšetření
Kalibrační materiál
Komerční kalibrační plazmy
Provedení kalibrace
S každou sérií vyšetření vzhledem k omezené
stabilitě reagencií a vysoké citlivosti
Za obzvláště citlivé metody vyžadující kalibraci s
každou sérií jsou považována vyšetření FF VIII,
IX, XI a XII, PC a PS
Typy kontrol
Správnost/pravdivost
Preciznost v čase/ reprodukovatelnost
Preciznost v sérii/ opakovatelnost
Porovnatelnost přístrojů/metod
Požadavky na kontrolní vzorky
Měření v jednom běhu současně se vzorky
pacientů
Analyzované složky musí být dostatečně stabilní
Složení co nejvíce podobné vyšetřovaným
vzorkům
Zcela nezávislé na kalibračních materiálech
Materiál nesmí být použit ke kalibraci
analytických metod
Kontrolní vzorky
Firemní komerční plazmy (lyofilizované)
V referenčních mezích („normální“ – N) a mimo
referenční meze (patologické – P)
Atestované a neatestované
Plazmy připravené laboratoří (čerstvé i
zamražené po alikvotech)
„Normální“ a patologické
Kontrolní vzorky atestované
Atestované (=certifikované) kontrolní materiály
Mají přesně udanou hladinu měřeného
parametru s udáním povolených odchylek
Nutno použít více kontrolních vzorků s různou
hladinou měřeného parametru, aby byl pokryt
celý měřený rozsah
Odlišné hladiny nelze získat různým ředěním
téhož kontrolního materiálu!!!
Kontrolní vzorky neatestované
Neatestované kontrolní materiály
Komerční kontrolní materiály, které
Nemají udanou hladinu měřeného parametru
Mají uvedeno pouze
Parametry, pro které je kontrolní materiál určen
Orientační vymezení hladiny měřeného
parametru
„Normální“ a patologické
Správnost / pravdivost
Vyjadřuje těsnost shody mezi naměřenou
hodnotou a „pravou hodnotou“ udanou
výrobcem kontrolního materiálu
Číselným vyjádřením = absolutní chyba (d)
d=xi – xs
Správnost / pravdivost
Relativní chyba (e)
100 x d
e = ------------------- (%)
Xs
Kontrolní materiály s přesně udanou hladinou
stanovované složky a s udáním povolených
odchylek/rozmezí
Správnost / pravdivost
Atestovaný komerční kontrolní materiál
Použít minimálně dva nezávislé kontrolní vzorky
Normální
Patologický
Odchylky/rozmezí uvedené na kontrolních
materiálech nesmí být překročeny
Pokud k tomu dojde, je nutné hledat příčinu a a
celý běh analýz včetně analýzy kontrolního
vzorku zopakovat
Správnost / pravdivost
Rutinní koagulace
Při změně šarže reagencie
Po kalibraci
1x měsíčně minimálně
Speciální koagulace
Po kalibraci
S každou sérií vyšetření
Správnost / pravdivost
Vyhodnocení
Porovnání s deklarovanými hodnotami
Vedení protokolů
výsledky měření
deklarované rozmezí
autorizace
schválení
Preciznost
je vyjádřením těsné shody mezi výsledky
opakovaných měření téhož vzorku
číselným vyjádřením = směrodatná
odchylka(SD) od aritmet. průměru (x)
Σ(xi - x)2
SD = √ ---------------
n-1
Preciznost
relativní směrodatná odchylka = variační
koeficient
SD x 100
CV = ----------- (%)
x
Stanovení preciznosti
Opakovaná analýza stejného kontrolního
materiálu, který nemusí mít udaný obsah
stanovovaných složek (neatestovaný kontrolní
materiál)
zajištění dostatečného množství kontrolních
vzorků
zajištění stability vyšetřovaných parametrů
Stanovení preciznosti
Preciznost metody v sérii
je to souhlas mezi výsledky opakované analýzy
téhož kontrolního vzorku, analyzovaných
opakovaně (např. 10x) stejnou metodou ve
stejném čase
Preciznost metody v čase
liší se od přesnosti v sérii tím, že se kontrolní
vzorek analyzuje každý den v provozních
podmínkách současně s ostatními vzorky
Preciznost v čase/reprodukovatelnost
Rutinní koagulace (PT,APTT,Fbg,TČ,AT)
Kontrolní materiál
komerční neatestovaný
připravený laboratoří
Vhodné dva kontrolní vzorky
N
P
Provádět minimálně 1-2x denně
Před zahájením denního provozu (a před pohotovostní
službou)
Pro každý parametr
Pro každý přístroj, který je v provozu
Preciznost v čase - vyhodnocení
Statistické programy
koagulační automat
LIS
samostatné
výstup na Levey - Jenninsonovy grafy
Westgardova pravidla
není běžné
Preciznost v čase - vyhodnocení
Nutno provádět průběžně
Průměr, SD, CV (%CV doporučené nebo
vlastní)
kontrolní rozmezí (průměr ± 2 SD)
varovné rozmezí maxim.(průměr ± 3 SD)
Preciznost v čase - vyhodnocení
Pokud výsledek mimo povolené meze
musí se najít příčina a celou sérii včetně kontrol
zopakovat
Pokud výsledky na jedné straně od x nebo
vykazují stoupající nebo klesající trend, velký
rozdíl oproti předchozímu výsledku...
je nutno analytickou metodu opravit
Preciznost v čase/reprodukovatelnost
Vedení protokolů
průběžně
výsledky měření, kontrolní a varovné
rozmezí,CV, autorizace, schválení
závěr (šarže kontroly, reagencie, kalibrace)
CV, (počet překročení kontrolního rozmezí)
Primární dokumentace
tisk výsledků kontrol, grafů
Kontroly preciznosti pro AT - N
54,4
69,4
84,4
99,4
114,4
129,4
144,4
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Kontroly preciznosti AT - P
15,1
31,7
48,3
64,9
81,5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Preciznost v čase/reprodukovatelnost
Speciální koagulace
Kontrolní materiál
Komerční atestovaný
V případě více měření v rámci kontroly správnosti
Připravený laboratoří
Provádět s každou sérií vyšetření
Vyhodnocení
Průměr, SD, CV (%CV doporučené nebo vlastní)
kontrolní rozmezí (průměr ± 2 SD)
Preciznost v sérii /opakovatelnost
Nepatří mezi běžné kontroly v koagulaci
Provádí se
Při validaci přístroje
Pro ověření správné funkce přístroje
Při zavádění nových metod
Počet měření 5 – 10
Vyhodnocení
Průměr, SD, CV (%CV doporučené)
Porovnatelnost přístrojů
Rutinní koagulace (PT,APTT,Fbg,AT)
Čerstvě odebrané vzorky pro dané parametry
(N a P)
Vzorky změřit 1x denně na všech
přístrojích,které jsou v provozu
Komerční atestované kontroly (N a P)
Vzorky změřit na všech přístrojích
Po kalibraci
Při změně šarže reagencie
Vyhodnocení
CV (%CV doporučené nebo vlastní)
Porovnatelnost přístrojů
Speciální koagulace
Běžně se nedělá vzhledem k provádění
kalibrace s každou sérií vyšetření
Neprovádí se u všech speciálních testů
Vyhodnocení
CV (%CV doporučené nebo vlastní)