Základní koagulační testy
J. Zavřelová
Dělení testů
testy globální
postihují celý systém (i více)
testy skupinové (screening)
postihují určitou část koagulačního systému
umožňují odlišení poruch vnitřní a vnější cesty a
přeměny fibrinogenu
testy speciální
vyšetřují jednotlivé složky systémů
XIIa
FIX
FVIIa-TF XIa
FIXa
FVIIIa FVIII
FX FXa
FVa FV
FII
fibrinogen FIBRIN
FIIa
APTT
APTT
PT
TČ
Protrombinový test - PT
tromboplastinový test dle Quicka
monitoruje zevní koagulační systém
FF VII, X, II, V a fibrinogen
sledování času tvorby fibrinu po přídavku Ca2+
tromboplastinu k vyšetřované plazmě
reagencie Ca2+ tromboplastin (různý původ)
Ca2+ (CaCl2)
TF (tkáňový faktor)
PL (fosfolipidy)
Aktivace kontaktem
XII, PK HMWK
XI
IX VIII
Tkáňový tromboplastin + Ca2+
VII
X V
II
I (fibrinogen) Fibrin
Fibrinové koagulum
XIII
Vyjadřování výsledků PT
koagulační čas v sekundách ( čas normálu)
poměr R = čas vyš. plazmy/ čas normálu
INR (mezinárodní normalizovaný poměr)
INR=RISI - pro léčbu kumariny
% normální koagulační aktivity - odečtení z kalibrační
křivky
% zlomek normální hodnoty (100% = 1,0)
Kalibrace PT
kalibrační materiál
směsná normální plazma
komerční kalibrační plazma (100%)
stanovení času normálu pro výpočet R, INR
průměr opakovaných měření
pro každý přístroj
vyšetření různých ředění kalibrační plazmy v
případě vyjadřování výsledků v %
100%, 50%, 25%, 12,5%
log/log závislost
International Normalized Ratio (INR)
mezinárodní normalizovaný poměr
INR = RISI
vyjadřování PT při léčbě kumariny
ISI = international sensitivity index
mezinárodní index citlivosti
vyjadřuje citlivost daného tromboplastinu
stanovenou vůči mezinárodnímu standartnímu
tromboplastinu
hodnota ISI stanovena
pro každou šarži reagencie
výrobcem reagencie
ISI < 1,5
International Normalized Ratio (INR)
vyjadřování výsledků pouze při léčbě kumariny
zajišťuje standardizaci testu
umožňuje porovnání výsledků PT
z jednotlivých laboratoří
testované různými reagenciemi
Stanovení ISI
Testovaný tromboplastin
log t
log t
WHO-ref.tromboplastin
směrnice
ISI = 1,2
Vyšetření PT:
25 pacientů (minimálně)
-léčených kumariny
-v terapeutickém rozmezí
5 normálů
10 103
103
Indikace vyšetření PT
základní koagulační test
předoperační vyšetření
krvácivý stav
léčba kumariny
podezření na patologický inhibitor
Příčiny prodloužení PT
defekt faktorů vnějšího systému
patologický inhibitor
specifický
nespecifický
nedostatek vit. K
kumariny
heparin (dle typu a dávky, dle citlivosti reagens)
FDP
novorozenec
Defekty faktorů
vrozený
defekt FF II, V, VII a X
získaný
snížená syntéza
zvýšená spotřeba
zvýšené ztráty
Normální hodnoty
a terapeutický rozsah
Normální hodnoty
koagulační čas = 11 – 15 s
poměr R = 0,8 – 1,2
% normální aktivity = 70 – 120 %
%zlomek normální hodnoty = 0,7 -1,2
Terapeutický rozsah
INR = 2,0 – 4,0 (dle klinické indikace)
%, % zlomek NH
liší se dle šarže reagencie
nejsou vhodné pro monitorování léčby!!!!
Požadavky na PT reagencii
citlivost k defektům faktorů
citlivost na kumariny (ISI < 1,5)
stabilita
snadná manipulace
citlivost k heparinu
citlivost k inhibitorům
Aktivovaný parciální
tromboplastinový test - APTT
monitoruje vnitřní koagulační systém
PK, HMWK, FF XII, XI, IX, VIII ale i X, II, V a
fibrinogen
sledování času tvorby fibrinu po přídavku
aktivátoru, parciálního tromboplastinu a Ca2+
k vyšetřované plazmě
reagencie
aktivátor (silica, kaolin, kys. elagová..)
parciální tromboplastin (kefalin=fosfolipidy)
Ca2+ (CaCl2)
Aktivace kontaktem (+ PL + Ca2+)
XII, PK HMWK
XI
IX VIII
Tkáňový tromboplastin + Ca2+
VII
X V
II
I (fibrinogen) Fibrin
Fibrinové koagulum
XIII
Vyjadřování výsledků APTT
koagulační čas v sekundách ( čas normálu)
poměr R = čas vyš. plazmy/ čas normálu
Normální hodnoty
koagulační čas = 28 – 45 s
závisí na typu reagencie
poměr R = 0,8 – 1,2
nezávisí na typu reagencie
Kalibrace APTT
kalibrační materiál
směsná normální plazma
komerční normální plazma
stanovení času normálu pro výpočet R
průměr opakovaných měření
pro každý přístroj
Indikace vyšetření APTT
základní koagulační test
předoperační vyšetření
krvácivý stav
léčba heparinem (UFH)
terapeutické rozmezí
závislé na typu reagencie
citlivé reagencie R = 2,0 – 5,0
méně citlivé R = 1,5 – 3,0
podezření na patologický inhibitor
Citlivost různých typů APTT na
heparin
0
2
4
6
8
10
0 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8
heparin IU/ml
aPTT-R
1.
2.
Příčiny prodloužení APTT
defekt faktorů vnitřního systému
patologický inhibitor
specifický
nespecifický
heparin
FDP
novorozenec
arteficiálně (odběr, zpracování)
Defekty faktorů
vrozený
hemofílie A, hemofílie B, defekt FF XII, XI,
PK, HMWK, vWF
získaný
snížená syntéza
zvýšená spotřeba
zvýšené ztráty
Požadavky na APTT reagencii
citlivost k defektům faktorů
citlivost na heparin
citlivost k LA
množství PL
optimální zastoupení PL
stabilita
snadná manipulace
Klinický význam PT a APTT
screening hypokoagulace
prodloužení základních koagulačních testů
vyšetření hyperkoagulace
nutné provedení speciálních testů
zkrácení časů APTT (málo citlivé)
v porovnání s předchozím výsledkem
za vyloučení arteficiálního ovlivnění při odběru
PT není citlivé
Korekční testy
sledování korekce (zkrácení) PT, APTT po
přídavku normální plazmy (směs 1:1)
prodloužení se koriguje - defekt faktorů
prodloužení se nekoriguje/jen částečně
koriguje - přítomnost inhibitoru
specifického
nespecifického
Trombinový test - TT,TČ
monitoruje třetí fázi koagulace
vyšetření poruch štěpení fibrinogenu trombinem
sledování času tvorby fibrinu po přídavku
trombinu k neředěné vyšetřované plazmě
reagencie - trombin (nízká koncentrace)
vyjadřování výsledků
koagulační čas v sekundách (norma < 18 /21/ s)
(poměr R)
Aktivace kontaktem
XII, PK HMWK
XI
IX VIII
Tkáňový tromboplastin + Ca2+
VII
X V
II
I (fibrinogen) Fibrin
Fibrinové koagulum
XIII
Příčiny prodloužení TČ
hypo-, afibrinogenémie
dysfibrinogenémie
heparin
FDP
jiné patologické inhibitory (myelom, revmatoidní
artritida)
novorozenec
Reptilázový test
test s trombinu podobným enzymem reptilázou
jed hada Bothrops atrox
na rozdíl od trombinu není ovlivněn heparinem
vyjadřování výsledků
koagulační čas v sekundách (norma < 18 /21/s)
klinický význam
stejný jako TČ s výjimkou vlivu heparinu
Fibrinogen (Fbg)
základní koagulační test
metody stanovení fibrinogenu
funkční - vyšetření schopnosti přeměny na fibrin
(metoda dle Clause)
vyšetření množství (EID)
metoda dle Clause
sledování času tvorby fibrinu po přídavku
nadbytku trombinu k ředěné vyšetřované
plazmě
reagencie - trombin (vysoká koncentrace)
Kalibrace fibrinogenu
vyjadřování výsledků v g/l (norma 1,8 -4,2 g/l)
odečet z kalibrační křivky (log/log závislost)
kalibrace
komerční kalibrační plazmy
vyšetření různých ředění
omezení metody -nutnost opakování vyšetření
u nízkých hladin Fbg (menší ředění a přepočet)
u vysokých hladin Fbg (větší ředění a přepočet)
Fibrinogen - klinický význam
Snížení
vrozené hypo-, afibrinogenémie
těžké poruchy jaterního parenchymu (syntéza)
zvýšená spotřeba (DIC)
zvýšené ztráty
trombolytická léčba
dysfibrinogenémie
Fibrinogen - klinický význam
Zvýšení
těhotenství
zánět
nádorová onemocnění
stavy po operaci
Neředěná plazma
obsahující:
fibrinogen
antitrombiny
heparin
FDP...
trombin
Čas koagulace závisí
na zbytkové aktivitě trombinu
Trombinový čas
trombin
ředěná plazma
(méně Fbg, antitrombinu…)
Fibrinogen
Čas koagulace závisí
na koncentraci fibrinogenu
Kontroly kvality (rutinní koagulace)
interní kontroly kvality
kontroly správnosti
shoda mezi naměřenou hodnotou a hodnotou
udanou výrobcem kontrolního materiálu
kontroly preciznosti
shoda mezi výsledky opakovaných měření
stejného kontrolního materiálu
porovnatelnost přístrojů
shoda mezi výsledky měření na různých
přístrojích
externí kontroly kvality